国家自然科学基金(30572060)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
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- 沙门菌介导骨桥蛋白siRNA对Tca 8113细胞体外生长的影响
- 2011年
- 目的:研究应用减毒沙门菌感染性转基因骨桥蛋白siRNA(OPNsiRNA)抑制Tca 8113细胞生长和转移的可行性和作用。方法:人工合成OPNsiRNA,同时,合成无义ControlsiRNA作为对照,进行以下平行试验;合成siRNA,分别构建表达载体pIRES2-EGFP,转染减毒沙门菌SL7207,获得的重组菌SL-OPNsiRNA和SL-ControlsiRNA分别体外感染Tca 8113细胞,观察细胞感染率及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响,同时以Western印迹检测转基因OPNsiRNA对细胞内源性OPN、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)蛋白表达的影响。采用SPSS15.0软件包进行组间t检验。结果:重组减毒沙门菌感染Tca 8113的效率可达80.0%以上,两者之间无显著差异(P>0.05);OPNsiRNA可显著抑制Tca 8113细胞的生长和诱导凋亡;感染后24h,细胞OPNsiRNA和Control-siRNA的迁移指数分别为0.56±0.10和0.82±0.05,侵袭力指数分别为0.53±0.13和0.83±0.06,2组之间均存在显著差异(n=12,P<0.01);同时,OPNsiRNA感染可显著降低细胞内OPN、MMP-2和uPA蛋白的表达量。结论:携带OPN-siRNA的减毒沙门菌可有效通过细菌感染方式,转入舌癌细胞,发挥抗肿瘤生长和转移的作用。
- 江中明殷新民周晶危薇周延殷雪萌吴媛媛
- 关键词：骨桥蛋白SIRNATCA8113侵袭力
- 荷瘤小鼠口服重组减毒鼠伤寒沙门菌后瘤体内富集效果的观察被引量：1
- 2013年
- 目的观察重组减毒鼠伤寒沙门菌作为基因载体在人涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤中的富集情况和对外源基因的呈递能力。方法以绿色荧光蛋白基因(GFP)为报告基因,以减毒鼠伤寒沙门菌SL7207为转基因载体,分别构建原核启动GFP表达的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL7207-pUC-GFP和真核启动GFP表达的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL7207-pEG-FP-N1。原核菌SL7207-pUC-GFP在体外连续传代,观察GFP基因表达的稳定性;同时,对荷人涎腺腺样囊性癌皮下移植瘤裸鼠模型口服给予原核菌SL7207-pUC-GFP(0.1mL,1×109cfu/mL),在口服后24h、48h、5d、10d、20d、30d处死荷瘤裸鼠,获取肝、脾及肿瘤组织并制成匀浆液进行重组菌培养及GFP表达检测,观察重组菌在瘤体细胞内富集情况。对荷瘤裸鼠模型口服给予真核菌SL7207-pEGFP-N1,5d后取肝、脾及肿瘤组织进行冰冻组织切片,荧光显微镜下观察GFP的表达,了解重组菌携带外源基因在肿瘤细胞内的表达。结果携带GFP原核表达的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL7207-pUC-GFP在体外连续传代10次未见表达减少或缺失。荷瘤裸鼠口服原核表达GFP基因重组菌SL7207-pUC-GFP菌液实验表明,重组菌SL7207-pUC-GFP在肝、脾及肿瘤组织中能长期存活,以肿瘤组织中聚集明显(P<0.05)且维持时间较长。荷瘤裸鼠口服真核表达GFP基因重组菌SL7207-pEGFP-N1菌液实验表明,相对肝脏和脾脏组织,外源基因在肿瘤细胞内表达量最高。结论重组减毒鼠伤寒沙门菌可以在瘤体细胞内富集存活,并且携带的外源基因可以释放到肿瘤细胞内表达,具有作为基因治疗载体的双重优势。
- 江中明殷新民俞越缪亮危薇周延殷雪萌吴莹莹
- 关键词：鼠伤寒沙门菌涎腺肿瘤
- 口服携带Tip30与人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗舌癌荷瘤裸鼠的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的:观察口服携带HIV tip30与人IFN-γ基因减毒沙门菌(SL7207)基因治疗舌癌荷瘤裸鼠的疗效。方法:4周龄BALB/c雄性裸鼠25只,随机分为PBS对照组、单纯SL7207组、携带人IFN-γ基因SL7207-pCI-IFN治疗组、携带HIV tip30基因SL7207-pCI-tip30治疗组和同时携带HIV tip30与人IFN-γ基因SL7207-pCI-tip30/IFN联合治疗组5组。裸鼠下颌下区皮下接种人舌癌Tca8113细胞10 d后,口服相应治疗菌,每周1次,共3次。测定瘤体积及瘤重变化,计算抑瘤率,免疫组化检测肿瘤组织中IFN-γ、Tip30的表达,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。采用SPSS15.0软件包对数据进行统计学分析。结果:肿瘤生长曲线、动物累积生存率及肿瘤抑瘤率指标均显示,PBS对照组肿瘤呈进行性生长;单纯SL7207组显示一定抑瘤效果(P<0.05);携带人IFN-γ基因SL7207-pCI-IFN治疗组和携带HIV tip30基因SL7207-pCI-tip30治疗组均具有较好疗效(P<0.05),但2组之间无显著差异;Tip30和IFN联合SL7207-pCI-tip30/IFN治疗组疗效最好(P<0.01)。表明Tip30和IFN联合具有协同抗肿瘤作用。免疫组化检测发现,口服携带不同目的基因重组菌的肿瘤组织内相应蛋白高表达。琼脂糖凝胶电泳分析发现,转tip30基因的肿瘤细胞基因组DNA表现出凋亡DNA"阶梯状"条带。结论:口服重组减毒沙门菌具有体内瘤体转基因的能力,而且可使同时携带的HIV tip30与人IFN-γ2个目的基因同时达到瘤体细胞内表达,发挥协同抗瘤作用,为舌癌的基因治疗提供了新的方法。
- 江中明殷新民俞越缪亮危薇周延殷雪萌吴莹莹
- 关键词：TIP30Γ干扰素舌癌
