广东省中国科学院全面战略合作项目(2010A090100010)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
- 相关作者：袁振宏尚常花朱顺妮王忠铭吕鹏梅更多>>
- 相关机构：中国科学院更多>>
- 发文基金：广东省中国科学院全面战略合作项目中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学动力工程及工程热物理更多>>
- 巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的克隆和分析被引量：2
- 2011年
- [目的]获得巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[方法]以巴夫杜氏藻cDNA为模板,采用简并引物进行PCR扩增,获得533bp特异cDNA片段。在此基础上,设计特异引物,采用5'-Genome Walking和3'-RACE的方法,获得基因的5'-端DNA序列和3'-端cDNA序列,进而获得β-肌动蛋白基因cDNA全长序列。[结果]获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的特异cDNA片段、5'-端DNA和3'-端cDNA片段。经拼接后,扩增出全长cDNA。β-肌动蛋白基因cDNA全长1754bp,包括1137bp的开放读码框和617bp的3'-非翻译区序列。氨基酸序列相似性分析发现,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白氨基酸序列与杜氏盐藻、莱茵衣藻等的同源性较高。系统发育分析表明,巴夫杜氏藻β-肌动蛋白与杜氏盐藻的相似性最高。[结论]首次获得了巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因cDNA全长序列,并发现巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因非常保守。
- 尚常花朱顺妮袁振宏王忠铭
- 关键词：克隆
- 普通小球藻细胞色素b559α亚基编码基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- 细胞色素b559是由α和β两个亚基组成的一种血红蛋白,是光系统Ⅱ的必需组分,可以保护光系统Ⅱ免受光抑制的危害。为了从分子水平深入了解细胞色素b559的功能,从普通小球藻(Chlorella vugaris)中克隆了编码细胞色素b559α亚基的基因序列及其5′-侧翼序列。结果表明,DNA全长包括1个252 bp的开放读码框,442 bp的5′-侧翼序列和195 bp的3′-侧翼序列,5′-侧翼序列区域存在一系列预测的顺式作用元件。
- 尚常花朱顺妮袁振宏王忠铭
- 关键词：普通小球藻克隆
- 培养基成分含量对巴夫杜氏藻生长的影响被引量：4
- 2013年
- 通过固定培养基中其它成分的含量,考察变化的成分含量对巴夫杜氏藻生长的影响,以期获得适宜生长的最佳单一养分浓度。结果表明,硝酸钠和氯化钠在实验浓度范围内(0.042 g/L^1.68 g/L和14.615 g/L^175.38 g/L)对巴夫杜氏藻的生长有显著影响,碳酸氢钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、柠檬酸铁、A5溶液和pH值对藻生长影响较小。可以通过调控硝酸钠和氯化钠的浓度来促进巴夫杜氏藻的生长。
- 尚常花秦磊朱顺妮袁振宏彭万峰王学伟王忠铭
- 关键词：培养基
- 巴夫杜氏藻GAPDH基因部分序列的克隆被引量：2
- 2011年
- 3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是糖酵解途径中的一个关键酶,由于其基因表达量相对恒定,因此在定量和半定量PCR试验中常被用作内源参照基因来确定目标基因的相对表达量。从巴夫杜氏藻(Dunaliella parva)中克隆GAPDH基因,并对基因序列进行了分析。以巴夫杜氏藻cDNA为模板,根据GAPDH的保守序列设计引物,PCR扩增获得了673 bp的cDNA序列。在此基础上,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了913 bp的3′-cDNA序列,进而获得了cDNA部分序列1 393 bp。序列分析结果表明:巴夫杜氏藻GAPDH cDNA部分序列包括1 055 bp的编码区和338 bp的3′非翻译区。该基因的克隆为半定量和定量PCR等技术在巴夫杜氏藻分子生物学研究中的应用提供了内源参照基因。
- 尚常花朱顺妮袁振宏王忠铭
- 关键词：克隆
- 藻类转基因研究进展
- 2011年
- 从藻类遗传背景、选择标记基因、报告基因、启动子和转化方法等方面对藻类基因工程的研究进展进行了综述。
- 尚常花杨康袁振宏王忠铭朱顺妮
- 关键词：藻类转基因报告基因启动子
- 巴夫杜氏藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因的克隆和分析被引量：7
- 2011年
- 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了分析。根据已知rbcS基因保守核苷酸序列设计引物,分别克隆到1 841 bp的DNA和380 bp的cDNA序列。以此为基础,使用染色体步移(Genome walking)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了799bp的5′端DNA序列和500 bp的3′端cDNA序列。序列分析发现,巴夫杜氏藻rbcS DNA全长为2 031 bp(不包括476 bp 5′-上游序列),cDNA全长包括570 bp开放读码框(GenBank登录号:HQ315783)和294 bp 3′端非翻译区。5′-上游序列区域存在一系列预测的顺式作用元件。该研究旨在为后继的rbcS基因的功能和表达研究、Rubisco的遗传改造奠定基础。同时,rbcS启动子因其可驱动基因高效表达而引起广泛关注,因此获得的rbcS 5′-上游序列经验证和优化后,可用于在嗜盐微藻中驱动转基因的高效表达以及完善微藻转化系统。
- 尚常花朱顺妮袁振宏吕鹏梅王忠铭
- 关键词：基因克隆RBCS1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶
