吉林省科技发展计划基金(201105038)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：吉林大学第四医院军事医学科学院山西农业大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
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- 朊蛋白与金属离子之间作用的研究进展
- 2012年
- 朊病毒(PrPSc)是由动物体内正常朊蛋白PrPc构象改变形成的,PrPSc与PrPC在氨基酸序列上完全一致,PrPC中α-螺旋丰富而PrPSc富含β-折叠。目前,科学家还未研究清楚PrP的生理机能。人们普遍认为:人和动物感染朊病毒病时除PrP外还存在一些重要的辅助因子影响着PrPC变构、PrPSc传播、PrPSc引起神经细胞凋亡等病变过程,因此,研究朊蛋白的各种辅助因子将有助于阐明这方面的问题,这些辅助因子包括各种金属离子,如Ca2+、Cu2+、Fe2+、Mn2+。作者概述金属离子对朊蛋白结构和功能的影响,以及它们在朊病毒病的发病过程中可能起的作用。
- 张晓晶鞠传静万家余孟轲音李忠义郝镯汤鑫王东旭刘文森刘林娜刘晋平钱军
- 关键词：朊病毒病FE^2+CU^2+ZN^2+MN^2+
- 羊痒病病毒株对鼠神经瘤细胞的影响
- 2012年
- 目的研究羊痒病病毒株(22L)对神经瘤细胞(N2a)的影响,并建立研究朊病毒病的细胞模型。方法用感染22L的鼠脑匀浆感染正常的N2a细胞,经荧光倒置显微镜、电镜及HE染色对正常细胞和染毒细胞(N2a-22L)的形态和内部结构进行观察,并通过Western blot检测细胞中朊病毒(Prions,PrPS)c的含量。结果镜下观察可见,N2a-22L细胞的神经突起较N2a细胞明显增多,并交织成复杂的网状结构;线粒体出现明显的空化,嵴消失;细胞体积减小,细胞核皱缩,细胞间通过突起连在一起,细胞核与细胞质界限模糊。N2a-22L细胞蛋白PrP经PK酶消化后,可见抗PK酶的PrPSc,N2a细胞的PrP蛋白均能被PK酶消化,表明N2a-22L已稳定感染了22L。结论 N2a-22L细胞可作为研究朊病毒病的细胞模型,为研究朊病毒病发病机制提供了有效途径。
- 张晓晶李忠义万家余鞠传静梁斌斌刘文森刘林娜孙玉成刘晋平钱军
- 关键词：神经瘤细胞细胞形态学朊病毒
- 鼠PrP的无细胞表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2012年
- 目的成功的表达鼠的PrP,制备特异性的兔抗PrP多克隆抗体。方法以BALB/c小鼠肝脏基因组DNA作为模板运用PCR技术成功扩增了PrP23-231,将其克隆到pRSET原核表达载体中,构建重组表达载体pRSET PrP23-231。将该重组载体进行无细胞表达,然后对成功表达的PrP进行纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,并进行Western-blot鉴定。结果通过Western-blot鉴定,有约30kD的目的条带,证明蛋白成功表达,并进行其多克隆抗体的制备并进行Western-blot鉴定,有约30kD的目的条带,证明成功制备了PrP的多克隆抗体。结论成功表达了PrP23-231,并且成功制备了其多克隆抗体,为进一步研究PrP的功能奠定了基础。
- 汤鑫鞠传静梁斌斌李忠义孟轲音刘文森郝镯栾世慧张晓晶李莎沈景林万家余
- 关键词：朊蛋白多克隆抗体
- PrP(D178N)无细胞表达、抗原性及结构分析被引量：1
- 2011年
- 目的无细胞表达人178位点突变朊蛋白PrP(D178N),并分析其抗原性及结构。方法提取人血液基因组DNA,应用PCR法突变人PrP 178号位点。以正常的PrP为对照组,分别连接至真核表达载体pcDNA3.1上,利用无细胞真核表达系统进行表达。Western blot分析表达的重组蛋白的抗原性,电镜观察抗原结构。结果突变基因重组表达质粒构建正确;表达的PrP(D178N)蛋白相对分子质量约为28 000,对PK酶具有抗性,电镜下可见氧病相关纤维(Scrapie associated fibrils,SAF)存在。结论 已成功无细胞表达了PrP(D178N),为后续其突变后空间构象及致病机理的研究奠定了基础。
- 汤鑫万家余鞠传静李莎郝镯刘文森李忠义孟轲音张晓晶刘林娜沈景林马永和钱军
- 关键词：朊蛋白突变
