国家自然科学基金(30572052)
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：西安交通大学口腔医院西安交通大学医学院第二附属医院西安交通大学更多>>
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- RNA干扰蛋白聚糖酶-1表达对体外培养的软骨细胞基质代谢的影响
- 2009年
- 目的探讨RNA干扰蛋白聚糖酶-1(aggrecanase-1)对大鼠肋软骨细胞基质代谢的影响。方法体外分离培养大鼠肋软骨细胞,采用脂质体转染试剂将针对aggrecanase-1的载体质粒转染软骨细胞,观察转染后细胞生长曲线、细胞形态的变化,RT-PCR检测aggrecanase-1mRNA水平的变化,Westernblotting检测蛋白多糖(aggrecan)的变化。结果RNA干扰aggreanase-1对细胞生长速度及形态无明显影响,可明显降低aggrecanase-1的mRNA表达水平(P<0.05),增加aggrecan的含量(P<0.05)。结论抑制aggrecanase-1可减少蛋白多糖的降解,RNAi是一种有效的研究软骨细胞基质代谢的工具。
- 王正辉贺西京杨壮群王丽李丽霞屠军波
- 关键词：软骨细胞RNA干扰
- 同种异体软骨移植免疫排斥反应的研究进展被引量：2
- 2008年
- 关节炎、颞颌关节疾病及关节机械损伤以及颌面部美容整形的发展，都使得软骨治疗成为倍受关注的对象，由于软骨组织中无血管、神经及淋巴等供应，而软骨细胞又为终末分化细胞，软骨缺损很难自身修复，故治疗以软骨移植为主。软骨移植包括自体、同种异体、异种移植，其中自体软骨移植来源有限、给患者带来二次创伤并增加患者疼痛而致应用受限，异种移植由于强烈的免疫排斥等问题研究还处在基础实验阶段，而同种异体软骨移植来源广泛，生物学性能良好，可望成为较理想的软骨移植物，但其存在的免疫排斥反应影响移植物在体内的长期存活，是目前研究不容忽视的问题。
- 李丽霞王丽王正辉杨壮群
- 关键词：移植免疫排斥反应自体软骨移植异种移植生物学性能美容整形
- 不同浓度的IL-1β和TGF-β_1对大鼠肋软骨细胞的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:研究人白细胞介素-1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1)对体外培养的SD大鼠肋软骨细胞功能的影响。方法:采用免疫组织化学检测不同剂量IL-1β和TGF-β1作用48h后软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达水平。采用RT-PCR方法检测细胞Ⅱ型胶原、aggrecanase-1,2、aggrecan的mRNA的表达水平。结果:IL-1β可以促进软骨细胞aggrecanase-1,2的表达,从而降低多聚蛋白聚糖的含量,破环细胞外基质结构,减少Ⅱ型胶原的含量,使细胞呈现去分化的表现,对软骨细胞起负性调节作用。低浓度的TGF-β1对软骨细胞起保护的作用;高浓度的TGF-β(1100ng/ml)在促进蛋白多糖表达的同时也促进软骨细胞蛋白多糖的降解,从而打破软骨的代谢平衡,起负性调节的作用。
- 王丽王正辉杨壮群李丽霞屠军波李国光
- 关键词：IL-1ΒTGF-Β1软骨细胞
- 大鼠肋软骨细胞体外培养及老化对基质代谢的影响被引量：9
- 2007年
- 目的建立大鼠肋软骨细胞(RCC)分离、培养的方法,探讨其老化过程中细胞外基质及其相关基因的变化,为软骨细胞增殖分化的调控和软骨组织工程修复的研究建立实验基础。方法显微解剖出大鼠软骨,酶消化法获得分散的单个RCC。观察单层培养的不同代数RCC的细胞形态变化;采用免疫细胞化学方法检测不同代数RCC蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达;RT-PCR从mRNA水平分析Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及蛋白聚糖酶-1、2(Aggrecanse-1,2)基因表达量。结果本实验分离的RCC呈多角形或圆形,第4代细胞形态发生变化;第1代到第3代细胞蛋白聚糖逐渐减少,第4代明显下降;Ⅱ型胶原(Collagen)含量随着细胞的老化逐渐减少;Aggrecanse-1前3代无明显变化,第4代明显上升,而Aggrecanse-2则无明显改变。结论本研究所建立的分离培养方法可以获得高纯度、高活性的软骨细胞,前3代RCC保持了在体软骨细胞的表型,是研究软骨细胞生物活性的良好材料。
- 王正辉李国光杨壮群贺西京王丽李丽霞屠军波
- 关键词：软骨细胞细胞老化代谢
- 大鼠Aggrecanse-1,2特异性shRNA慢病毒表达载体的构建及测序被引量：3
- 2007年
- 目的:利用RNA干扰技术,以大鼠aggrecanse-1,2基因为靶基因,设计aggrecanse-1,2基因特异性的小干扰RNA(si RNA),构建其短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒表达载体,并进行测序鉴定。方法:根据Tuschl原则设计并合成大鼠aggrecanse-1,2基因特异性的DNA寡核苷酸,连接到经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切线性化的pKCSHR-GFP质粒上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性菌落、扩增后提取质粒,进行DNA测序鉴定。结果:将合成的8对大鼠aggrecanse-1,2基因特异性DNA寡核苷酸序列退火后,分别克隆到线性化的pKCSHR-GFP载体质粒上。在氨苄青霉素培养基条件下,筛选出相应的阳性菌落,经DNA测序鉴定确定为设计的序列。结论:成功构建了8对大鼠aggrecanse-1,2基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体,可进一步用于干扰aggrecanse-1,2基因的mRNA转录,从而为制备aggrecanse-1,2基因表达受抑制的大鼠软骨细胞奠定基础。
- 王正辉杨壮群贺西京李国光王丽李丽霞屠军波
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
- 软骨蛋白聚糖研究进展被引量：1
- 2007年
- 软骨组织存在于机体的许多部位，透明软骨是软骨的主要形式，普遍存在于骨骼系统中，如胚胎时期的骨生成始基、幼年个体发育期引导骨增长的生长板以及关节的骨软骨负重面等。所有的透明软骨都含有大量的特征性物质蛋白聚糖（proteoglycan，PG），它主要以透明质酸和连接蛋白合成的蛋白聚糖聚合物形式存在，在软骨中通过其渗透性使软骨膨胀以抵抗软骨所受的压缩力。
- 王正辉杨壮群贺西京
- 关键词：透明软骨软骨组织骨骼系统蛋白合成透明质酸骨生成
