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国家自然科学基金(36170701)

作品数:7 被引量:74H指数:6
相关作者:曹胜波陈焕春刘新文琚春梅郗鑫更多>>
相关机构:华中农业大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:农业科学医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 7篇农业科学
  • 1篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 5篇圆环病毒
  • 5篇病毒
  • 3篇全基因
  • 3篇全基因组
  • 3篇基因
  • 3篇基因组
  • 3篇感染性
  • 2篇全基因组克隆
  • 2篇PCV-2
  • 2篇PCV1
  • 2篇PCV2
  • 1篇断奶
  • 1篇断奶仔猪
  • 1篇断奶仔猪多系...
  • 1篇多系统衰竭综...
  • 1篇全基因组序列
  • 1篇全基因组序列...
  • 1篇仔猪
  • 1篇仔猪多系统衰...
  • 1篇克隆

机构

  • 7篇华中农业大学

作者

  • 7篇陈焕春
  • 7篇曹胜波
  • 3篇刘新文
  • 2篇郗鑫
  • 2篇孙敏轩
  • 2篇琚春梅
  • 2篇郭东春
  • 2篇姚清侠
  • 2篇刘学芹
  • 1篇陈华平
  • 1篇刘正飞
  • 1篇李川
  • 1篇赵俊龙
  • 1篇吕建强
  • 1篇肖少波
  • 1篇刘朝
  • 1篇钱平

传媒

  • 2篇中国兽医学报
  • 2篇微生物学报
  • 2篇病毒学报
  • 1篇中国生物化学...

年份

  • 1篇2007
  • 3篇2006
  • 2篇2004
  • 1篇2002
7 条 记 录,以下是 1-7
排序方式:
嵌合猪圆环病毒PCV2-1感染性克隆的构建被引量:6
2007年
根据GenBank中发表的猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)的核苷酸序列,设计3对特异性引物。通过PCR方法,以引物P1和P2从接毒细胞中扩增到猪型圆环病毒(PCV2)全基因组,克隆入pBluescriptⅡ SK(+)载体构建质粒SK-PCV2,以之为模板,用引物P5和P6扩增不包含PCV2-ORF2的部分基因(SK-PCV2△ORF2);另一对引物P3、P4用于特异性扩增猪型圆环病毒(PCV1)的ORF2基因,与前面得到的SK-PCV2△ORF2基因连接,构建嵌合型质粒SK-PCV2-1,以此为基础构建双联体质粒SK-PCV2-1(DB)。体外转染PK-15细胞,盲传4代后,用RT-PCR和间接免疫荧光方法检测,结果表明本试验构建的嵌合病毒PCV2-1克隆具有感染性。
刘新文姚清侠曹胜波郭东春陈焕春
关键词:感染性克隆
猪Ⅱ型圆环病毒ORF1基因克隆及在E.coli中的表达被引量:7
2004年
A pair of specific primers were designed and synthesized according to the published sequences of ORF1 gene of PCV 2. The complete DNA fragment of ORF1 gene was obtained by PCR from viral DNA of PCV 2 QD strain.Its nuclectide sequence was determined by the dideoxy mediated chain termination method.The results showed that the complete open reading frame (ORF) of ORF1 gene encoding 314 amino acids was 945 bp in length.A comparison of the nucleotide and amino acid sequences of ORF1 gene with that of other PCV strains showed that the identity of nucleotide with PCV 1 and PCV 2 were 83% and 96 4%~99 2% respectively,and identity of the deduced amino acid with PCV 1 and PCV 2 were 84% and more than 98% respecitively.The DNA fragment of ORF1 gene was subcloned into prokaryotic expression vector pET 28a and pGEX KG;while the specific non fusion and fusion proteins with GST of molecular weight 38 kD and 63 kD were expressed in E.coli BL 21 (DE3).Western blotting assay indicated that the polyclonal antibody against PCV 2 could recognize these two proteins.
郗鑫陈焕春李川刘正飞曹胜波琚春梅
关键词:PORCINECIRCOVIRUSGENECLONING
猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组克隆与序列分析被引量:21
2002年
参照国外发表的猪Ⅱ型圆环病毒 (porcinecircovirustype 2 ,PCV - 2 )全基因组序列 ,设计一对PCV - 2特异性引物 ,用该室分离的PCV - 2豫A株感染PK - 15细胞 ,从中提取PCV - 2复制型基因组DNA ,并以之为模板进行PCR扩增。回收PCR产物 ,构建重组测序质粒T -PCV - 2。测序结果表明 ,猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组为 176 7bp ,与GenBank收录的PCV - 2国外分离株核苷酸的同源性可高达 97%。序列分析表明 ,复制型豫A株的基因组包含 10个读码框架 ,其中ORF1、ORF2是其两个最主要的读码框架 ,分别编码 314、2 34个氨基酸。豫A株和PCV - 1间的ORF1、ORF2的氨基酸序列同源性分别为 85 %、6 6 % ,与其它PCV - 2毒株间的ORF1氨基酸同源性均在 98%以上 ,而ORF2的氨基酸同源性为 92 %~ 97%。
曹胜波陈焕春肖少波赵俊龙吕建强钱平
关键词:全基因组克隆PCV-2
猪1型圆环病毒全基因组克隆及其感染性初步鉴定被引量:3
2006年
PCV1 was isolated from IBRS-2 cells line,and its complete genomic sequence was cloned by PCR.Sequence analysis indicated that this PCV1 strain shares >98% nucleotide identity with the other PCV1 strains in GenBank.Then double copy molecule clone(pSK2PCV1) was constructed and used to transfect PK-15 cell line.The results of indirect immunofluorescence(IIF) and RT-PCR suggested that pSK2PCV1 could form infectious virus after being transfected into PK-15 cells.
曹胜波刘学芹刘朝孙敏轩陈焕春
关键词:全基因组感染性
猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)Henan株的分离与全基因组序列分析被引量:18
2006年
用PCR方法从河南某猪场送检的1头疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的腹股沟淋巴结中检测到了猪Ⅱ型圆环病毒(porcine circovirus type2,PCV2)核酸。将该病料研磨、过滤除菌后接种无PCV1和PCV2污染的PK-15细胞,盲传12代后,用PCR方法仍然能够在接种细胞中检测到PCV2核酸。从接种细胞中收获病毒,经超速离心纯化后电镜负染观察.可见直径约17nm、呈二十面体对称结构的病毒粒子,表明从发病猪中分离到了PCV2,将该毒株命名为PCV2Henan株。序列分析表明:该株病毒全基因组长1767bp,包含11个读码框,与PCV1同源性为76.2%~77.3%,与其他PCV2株的同源性为95.5%~99.6%。
刘新文曹胜波郭东春姚清侠陈焕春
关键词:病毒分离断奶仔猪多系统衰竭综合征
猪Ⅱ型圆环病毒全基因组的克隆及感染性鉴定被引量:19
2004年
设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )全基因组的特异性引物 ,从 3份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征 (PMWS)的死亡仔猪病料中 ,PCR扩增和克隆了 3株PCV 2全基因组序列。将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较 ,并绘制系统发育进化树。结果显示 ,所测毒株间的核苷酸同源性为 95 7%~ 99 4 % ,与其它毒株的同源性较高 ,达 95 1%以上 ;ORF1的核苷酸同源性高达 97 8%以上 ,氨基酸同源性大于 98% ;ORF2的核苷酸同源性较低 ,为 90 %~ 98%不等 ,推导的氨基酸序列同源性介于 87%~ 99 1%。进化树分析表明各分离毒株在进化上存在地域上的相关性。将克隆到的PCV 2基因组环化后 ,脂质体介导转染PK 15细胞 ,盲传 3代。间接免疫荧光检测表明 ,克隆到的基因组具有感染性。
郗鑫陈焕春陈华平曹胜波琚春梅
关键词:基因组克隆感染性PCV-2PMWS
嵌合猪圆环病毒PCV1-2的构建及其感染性初步鉴定被引量:6
2006年
猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是当前严重危害养猪业的重要病原之一。目前,世界上还没有有效疫苗用于该病毒的免疫预防。该研究利用PCR方法,将PCV2的ORF2基因替换猪Ⅰ型圆环病毒(PCV1)的ORF2基因,构建了以PCV1基因组为骨架的嵌合病毒(PCV1-2)分子克隆(pSK2PCV1-2)。将该分子克隆转染PK-15细胞并连续盲传5代,用RT-PCR方法可以在转染后盲传的细胞中检测到PCV1的ORF1 mRNA和PCV2的ORF2 mRNA,但检测不到PCV1的ORF2 mRNA和PCV2的ORF1 mRNA。间接免疫荧光检测显示在盲传第5代的细胞中有PCV2 ORF2蛋白的表达,表达蛋白主要分布于细胞核。该研究初步证实构建的PCV1-2分子克隆转染细胞后可以形成具有感染性的嵌合病毒,从而为更深入研究嵌合病毒生物学特性奠定了基础。
曹胜波孙敏轩刘学芹刘新文陈焕春
关键词:感染性
共1页<1>
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