国家自然科学基金(30470792)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：四川大学四川大学华西医院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 多功能转录因子CTCF重组质粒构建及其表达鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建人CTCFcDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体,纯化融合蛋白并进行鉴定。方法以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板,分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF-C,转化大肠杆菌BL21,酶切、测序鉴定;优化IPTG诱导表达条件,并对亲和层析纯化的GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF进行Far-Western blot鉴定。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实构建成功。GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C均在大肠杆菌中成功诱导表达,融合蛋白经亲和层析纯化获得纯化蛋白。各纯化蛋白经SDS-PAGE和Far-Western blot鉴定,均为诱导表达蛋白质。结论成功构建了GST融合表达CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C的重组质粒,对融合蛋白表达条件进行了优化,获得了高效表达的GST融合蛋白。
- 蒋磊覃扬孙芝琳武静杨文理张军哲
- 关键词：融合蛋白
- 人vigilin基因全长编码区的分段克隆及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的为了探讨全长VIGILIN、VIGILIN的N端、VIGILIN的C端以及不同KH组合的功能,采取5分段扩增的策略克隆全长vigilin基因。方法根据vigilin基因全长编码区内的限制性核酸内切酶位点,将vigilin基因全长编码区分为5段。从意外死亡健康成人肝组织中提取总RNA,RT-PCR分段扩增目的基因,克隆至pUC118载体,测序,并亚克隆至pUC118载体,对接头部位测序。结果获得8个大小不同的人vigilin基因编码区片段和全长编码区。重组全长vigilin质粒pC118/vigilin(12+345)经测序,与GenBank上登陆的人vigilin cDNA(NM:005336)序列完全一致。结论用分段克隆的方法成功获得了人vigilin基因的全长编码区。
- 杨文理武静谢晓砚魏玲覃扬
- 关键词：克隆
- 人VIGILINN端融合蛋白的表达及亚细胞定位被引量：2
- 2009年
- 目的原核表达人VIGILINN端基因,制备抗人VIGILIN的多克隆抗体,对人VIGILIN作亚细胞定位。方法用PCR扩增人VIGILIN基因N端,克隆到表达载体pGEX-4T-2中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。产物经Glutathion Sepharose 4B纯化后免疫新西兰白兔制备抗人VIGILINN端融合蛋白抗体,采用ELISA和Western blot鉴定抗体的效价及特异性。通过细胞免疫荧光染色,观察VIGILIN在细胞中的分布。结果在28℃1、mmol/L IPTG诱导3 h的最优条件下成功表达GST-VIGILIN N端融合蛋白,抗体ELISA滴度为1∶16000,Western blot证实抗体特异性较高,VIGILIN在细胞质和核中均有分布,核中的分布集中在核膜内侧和靠近DAPI染色显著的区域。结论成功表达人VIGILIN N端融合蛋白和制备兔抗人VIGILIN抗体,并应用于亚细胞定位,为研究人VIGILIN的性质和功能奠定基础。
- 魏玲张朝良蒋磊杨文理谢晓砚覃扬
- 关键词：原核表达多克隆抗体亚细胞定位
- 人vigilin基因全长编码区的分段克隆及鉴定
- 目的:人 VIGILIN 是一个多功能蛋白,全长1289个氨基酸,含有14个 KH 结构域。采取分段克隆酶切位点接拼的策略克隆全长 vigilin 基因,方便进一步探讨全长 VIGILIN、VIGILIN 的 N 端,V...
- 杨文理武静谢晓砚魏玲覃扬
- 关键词：克隆
- 人原发性肝癌IGF2/H19基因印记及其调控机制研究(英文)
- Genomic imprinting is the preferential silencing of one parental allele due to epigenetic modifications.Insuli...
- 覃扬
- 关键词：GF2HEPATOCELLULARGENOMICIMPRINTING
- 人原发性肝癌胰岛素样生长因子2和H19基因印迹研究被引量：2
- 2007年
- 目的研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insu lin-like grow th factorⅡ,IGF 2)和H 19基因的印迹状态,为进一步研究印迹调控机制打下基础。方法采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)筛选IGF 2和H 19基因杂合标本,并用逆转录PCR-RFLP检测杂合标本IGF 2和H 19基因的印迹状态。结果正常人肝组织中,IGF 2呈双等位基因表达,H 19呈单等位基因表达;47.1%(8/17)的肝癌标本中检测到IGF 2基因的印迹获得,45.5%(5/10)的肝癌标本中检测到H 19基因的印迹丢失;IGF 2和H 19的印迹改变没有相关性。结论IGF 2和H 19的印迹异常与肝癌有关,成人肝组织中IGF 2与H 19的印迹调控可能相对独立。
- 武静覃扬李波何文智孙芝琳
- 关键词：H19胰岛素样生长因子2人原发性肝癌基因组印迹
- 人Vigilin N端融合蛋白的克隆、表达、抗体制备及初步亚细胞定位的研究
- 人高密度脂蛋白结合蛋白(HDLBP)—人 Vigilin 蛋白,包含有14个相关的不完全一致的能与核酸相结合的 KH(hnRNP K-homology)模序。含多个 KH 结构域的 Vigilin 家族蛋白广泛存在于真
- 魏玲蒋磊张朝良杨文理谢晓砚覃扬
- 关键词：原核表达多克隆抗体亚细胞定位
- 文献传递
