国家自然科学基金(30860282)
- 作品数：3 被引量：30H指数：2
- 相关作者：陈福宝冯立新马良宏李培军丁强更多>>
- 相关机构：上海交通大学宁夏医科大学附属医院复旦大学上海医学院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响被引量：27
- 2011年
- 背景:精原干细胞移植对不育具有潜在的临床应用价值,体外建立精原干细胞的培养系统获得数量较多的精原干细胞,仍是目前研究中亟待解决的问题。目的:观察枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响。方法:采用两步酶消化法获取出生4～6d雄性C57BL/6小鼠睾丸Sertoli细胞与精原干细胞,将精原干细胞接种在Sertoli细胞饲养层上,再加入枸杞多糖或联合细胞因子添加到细胞培养液中。1周后以流式细胞仪检测细胞周期及细胞活性率,并检测各组精原干细胞GFRa-1、Thy-1、c-kit的阳性率。结果与结论:单独加入枸杞多糖后精原干细胞数量明显增加,增殖明显,联合加入胶质细胞源性神经营养因子与白血病抑制因子精原干细胞增殖更加明显(P<0.05)。并发现体外培养1周后的精原干细胞仍保持其睾丸组织内的精原干细胞特征,大多仍维持在未分化状态。表明在枸杞多糖或枸杞多糖联合胶质细胞源性神经营养因子及白血病抑制因子作用下,可促进精原干细胞体外增殖。
- 马良宏邱志军闫圣男冯立新王燕蓉李培军陈福宝
- 关键词：精原干细胞枸杞多糖体外增殖
- 精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化被引量：1
- 2010年
- 背景:精原干细胞移植对男性不育的治疗具有潜在的临床应用价值,但移植后干细胞体内迁移、增殖、分化的过程目前尚不完全清楚。目的:观测精原干细胞移植后的体内迁移、增殖和分化过程。方法:以出生后6～10d的雄性C57BL/6小鼠为供体,通过复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法获取精原干细胞;以出生后6周的雄性C57BL/6小鼠为受体,腹腔注射白消安,破坏其内源性生精功能。实验组采用曲细精管微注射法将供体精原干细胞移植入受体睾丸内,对移植后细胞进行PKH26-GL荧光追踪分析,观察其体内迁移过程,以Western Blot和RFQ-PCR法检测睾丸组织α6-Integrin,c-kit,SCF蛋白及mRNA的变化。以未接受化疗和细胞移植的正常同系生小鼠作为阳性对照组,以单侧睾丸曲细精管微注射移植细胞递质作为阴性对照组。结果与结论:PKH26-GL荧光追踪移植细胞,移植后1周部分精原干细胞已向曲细精管基底膜迁移,移植后1个月精原干细胞已从曲细精管管腔迁移至曲细精管基底膜,并分裂增殖,移植后3个月曲细精管管腔内可见大量精子细胞形成。移植后1,2,3个月,各组α6-Integrin,c-kit蛋白表达均呈增加趋势(P<0.01),阴性对照组、实验组SCF蛋白表达有增加趋势(P<0.05);各组α6-Integrin,c-kit,SCF mRNA的表达均有增加趋势(P<0.05)。提示大剂量化疗后,生精上皮内仍存在一定数量的Sertoli细胞,这种精子发生的微环境并未完全破坏,外源性精原干细胞移植后能在受体Sertoli细胞所提供的微环境中增殖和分化。
- 马良宏丁强冯立新李培军陈福宝
- 关键词：迁移增殖分化精原干细胞干细胞
- 精原干细胞冷冻保存后再移植的生精功能被引量：2
- 2010年
- 背景:精原干细胞的冷冻保存在男性不育治疗方面具有潜在的临床应用价值,但冷冻保存过的精原干细胞移植后,其精子发生过程及生精能力目前尚不完全清楚。目的:观测精原干细胞冷冻保存后移植的生精功能。方法:采用复合酶消化、差速贴壁结合非连续性Percoll密度梯度离心的方法获取雄性SD大鼠及雄性C57BL/6小鼠精原干细胞;以雄性BALB/c裸小鼠为受体,出生后6周予腹腔注射白消安破坏其内源性生精功能。将供体精原干细胞分为冷冻保存组与非冷冻保存组,分别以曲细精管微注射的方法异种移植精原干细胞,采用形态学方法观察生精过程;采集附睾精液,观察精子形态并进行体外受精实验。移植后1,2,3个月取受体睾丸组织,采用免疫组化SABC法检测α6-Integrin蛋白表达情况;移植后1周、1个月、3个月取受体睾丸组织,应用扫描电镜观察生精过程。结果与结论:冷冻保存前的精原干细胞活性率高于冷冻保存后的细胞活性率(P<0.01)。冷冻保存组与未冷冻保存组受体睾丸组织精原细胞膜和细胞质中均有α6-Integrin的阳性表达,随时间增加而增加,两组间α6-Integrin蛋白的表达无统计学差异;SD大鼠精原干细胞移植后能在BALB/c裸小鼠生精上皮中克隆增殖,并能分化形成大鼠形态特征的精子,在小鼠精子发生巢内既有大鼠来源的精子发生,又有小鼠内源性精子发生,其供体来源的精子数量较小鼠自身来源的精子数量多。通过体外受精实验提示移植后的精原干细胞在受体内增殖分化形成的精子功能正常,具有受精的能力。结果说明采用常规方法冷冻保存的精原干细胞,移植后能在受体生精上皮中克隆增殖,并能分化形成成熟的精子。
- 马良宏丁强冯立新李培军陈福宝
- 关键词：冷冻保存精原干细胞精子发生
