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人鼻腔纤毛上皮细胞的浸没培养被引量：2: 2014年; 目的：浸没培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞，为纤毛相关研究及经鼻药物安全性评价等研究提供可靠的细胞学模型。方法：采用低温酶消化法，浸没培养人鼻腔纤毛上皮细胞，倒置相差显微镜观察细胞生长状况，扫描电镜及免疫细胞化学方法观察细胞融合及纤毛分化状态，高速数字化显微视频成像系统检测纤毛摆动频率。结果：①相差显微镜下，纤毛细胞数量逐渐增加，至7～10d达到高峰后逐渐减少，纤毛细胞存活时间维持在14～21d；②细胞培养第7天，扫描电镜可见鼻腔上皮细胞表面覆盖纤毛或微绒毛，杯状细胞及无纤毛柱状上皮细胞相间排列；③细胞培养第7天，Ⅳ型β-微管蛋白、闭合小环蛋白-1免疫荧光结果显示细胞融合及纤毛分化良好，纤毛细胞比例可达20％～30％；④培养第7、14、21天纤毛摆动基础频率分别为（10．73±2．15）Hz、（9．92±1．97）Hz、（10．30±2．11）Hz，无明显统计学差异；⑤外源性刺激剂100μmol／L ATP可明显增加纤毛摆动频率。结论：应用酶消化法浸没培养人鼻腔纤毛上皮细胞，细胞融合及纤毛分化状态良好，纤毛摆动活跃，对外源性刺激反应灵敏，是应用于纤毛相关研究及经鼻药物安全性评价等研究的一个较为理想的细胞模型。; 矫健孟娜张罗; 关键词：鼻腔纤毛上皮细胞细胞培养

人鼻息肉上皮细胞的气液界面培养被引量：2: 2014年; 目的气液界面培养人鼻腔纤毛上皮细胞，为深入研究鼻腔黏液纤毛传输系统提供良好的细胞模型。方法采用低温酶消化法，气液界面培养人鼻腔纤毛上皮细胞，倒置相差显微镜观察细胞生长状况，扫描电镜和免疫细胞化学法观察细胞增殖、融合及分化情况，高速数字显微视频成像系统检测纤毛摆动频率及对外源性刺激剂三磷酸腺苷（adenosinetriphosphate，ATP）的反应性。采用Prism4．0软件进行数据分析。结果光镜下Transwell支持膜上细胞24h贴壁生长良好，浸没培养约1周后，单层细胞融合达80％-90％，细胞间衔接紧密成铺路石状结构，此时建立气液界面培养。气液界面培养7d，扫描电镜可见鼻腔上皮细胞表面覆盖纤毛或微绒毛，纤毛细胞分化良好，成簇状分布，杯状细胞及无纤毛柱状上皮细胞相间排列。气液界面培养14d，IV型β-微管蛋白（p—tubulinIV），闭合小环蛋白-1（Zonaoccludens-1，ZO-1）免疫荧光结果显示细胞融合及纤毛上皮细胞分化良好，纤毛细胞比例可达50％～60％。气液界面培养7、14、21、28、35d，上皮细胞纤毛摆动基础频率分别为（8．42±1．24）、（8．71±1．11）、（9．17±1．11）、（8．89±0．91）、（8．99±0．91）Hz，差异无统计学意义（F=1．451，P〉0．05）。外源性刺激剂100μmol／LATP可明显增加纤毛摆动频率。结论低温酶消化法，气液界面培养模式下可获得分化良好的人鼻腔纤毛上皮细胞，其形态和功能与体内接近，且能较长时间维持其正常形态及功能，可以为深入研究黏液纤毛传输系统提供细胞分化模型。; 孟娜矫健张罗; 关键词：细胞培养技术纤毛上皮细胞鼻腔鼻息肉

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首都卫生发展科研专项(2011-1017-03)

文献类型

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主题

机构

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