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国家重点基础研究发展计划(2004CCA01800)

作品数:7 被引量:31H指数:4
相关作者:郭万柱黄亚平李晓琪吴华张丽更多>>
相关机构:四川农业大学更多>>
发文基金:国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
相关领域:生物学农业科学医药卫生更多>>

文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 5篇生物学
  • 3篇农业科学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 5篇荣昌猪
  • 5篇克隆
  • 5篇白细胞介素
  • 3篇细胞
  • 2篇原核表达
  • 2篇克隆与序列分...
  • 2篇白细胞
  • 2篇白细胞介素-...
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体
  • 1篇真核表达载体...
  • 1篇内江猪
  • 1篇克隆及序列分...
  • 1篇基因CDNA
  • 1篇核表达
  • 1篇干扰素
  • 1篇Γ干扰素
  • 1篇白细胞介素-...
  • 1篇白细胞介素-...

机构

  • 6篇四川农业大学

作者

  • 6篇郭万柱
  • 2篇李晓琪
  • 2篇吴华
  • 2篇黄亚平
  • 1篇张丽
  • 1篇王新
  • 1篇陈弟诗
  • 1篇王晓玉
  • 1篇李雯

传媒

  • 2篇黑龙江畜牧兽...
  • 2篇安徽农业科学
  • 1篇中国预防兽医...
  • 1篇中国畜牧兽医
  • 1篇Chines...

年份

  • 7篇2007
7 条 记 录,以下是 1-7
排序方式:
荣昌猪白细胞介素-8基因cDNA的克隆及序列分析
2007年
从体外ConA刺激20 h的荣昌猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增,pMD18-T载体连接,常规转化后,进行酶切及序列测定,并进行鉴定。结果显示:猪IL-8基因与人、猕猴、牛、绵羊和家犬基因序列的同源性分别为81.3%、80.4%、88.9%、88.2%和85.3%。
李雯郭万柱陈弟诗王晓玉
关键词:荣昌猪白细胞介素-8克隆
内江猪γ干扰素基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建被引量:9
2007年
将内江猪的外周血淋巴细胞在刀豆素(ConA)的刺激下培养24 h后,提取总RNA,应用一步法RT-PCR扩增γ干扰素(IFN-γ)cDNA,克隆到PMD18-T载体,命名为pMD-N-IFN-γ,测序结果证明克隆的cDNA全长603 bp,其ORF为501bp,编码166个氨基酸,与Genbank公布的IFN-γ比对,核苷酸同源性在99.4%以上,从而证实成功地克隆了内江猪IFN-γ基因。以pMD-N-IFN-γ质粒为模板亚克隆完整ORF区,连接到真核表达质粒pcDNA3.1(+)的EcoRI、XhoI两位点之间,经单双酶切鉴定,成功的构建了IFN-γ真核表达载体pcDNA3.1(+)-N-IFN-γs。
黄亚平郭万柱李晓琪
关键词:Γ干扰素克隆真核表达载体构建
荣昌猪白细胞介素-2基因的原核表达被引量:11
2007年
应用DNA重组技术,将克隆的荣昌猪白细胞介素-2基因亚克隆到PET-32a(+)表达载体上,构建重组表达载体。酶切鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用1 mM的HPTG诱导表达重组蛋白。RT-PCR方法检测表明白细胞介素-2基因得到了转录;对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳,发现在相对分子质量约37 Ku处有明显的蛋白质条带,而对照组无相应条带产生。最后用MTT法检测表达蛋白的生物学活性,表明所获得的重组蛋白具有较好的生物学活性,这为利用该蛋白及其基因研制高效抗病免疫制剂和基因工程疫苗奠定了良好的基础。
张芳郭万柱吴华
关键词:荣昌猪白细胞介素-2
荣昌猪白细胞介素-2和白细胞介素-4基因的克隆与序列分析被引量:4
2007年
将荣昌猪外周血淋巴细胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培养24—70h后,提取总RNA,应用RT—PCR技术扩增白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)cDNA,克隆到pMD18-T载体并测序。结果表明:克隆的IL-2cDNA全长为522个碱基,ORF为465个碱基,编码154个氨基酸。与GenBank公布的猪IL-2比对同源性均为99.8%;克隆的IL-4cDNA全长411个碱基,ORF为402个碱基,编码133个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-4比对同源性均在98.0%以上,从而证实成功克隆了荣昌猪IL-2和IL-4基因cDNA。
张芳郭万柱吴华
关键词:荣昌猪IL-2IL-4克隆
荣昌猪白细胞介素-10(IL-10)基因的克隆及原核表达被引量:5
2007年
根据GenBank收录的猪白细胞介素-10(PIL-10)设计1对特异性引物,经刀豆蛋白素A(conA)诱导猪淋巴细胞并提取总RNA,RT-PCR方法首次扩增出荣昌猪PIL-10的全长基因。序列分析表明PIL-10全长771 bp。设计1对引物亚克隆荣昌猪IL-10基因成熟蛋白编码基因(477 bp)。利用基因重组技术构建了PET32a(+)-PIL-10融合表达载体,经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE,重组菌的RT-PCR,Western blotting结果表明融合表达成功。
李晓琪郭万柱黄亚平张丽
关键词:荣昌猪白细胞介素-10克隆原核表达
荣昌猪白细胞介素-6基因的克隆与序列分析被引量:2
2007年
根据GenBank收录的猪白细胞介素-6(PIL-6)设计1对特异性引物,经刀豆蛋白素A(Co—nA)诱导猪淋巴细胞并提取总RNA,用1it—PCR方法扩增出荣昌猪IL-6的cDNA。将扩增基因连接到PMD18-T质粒上,经酶切鉴定和序列测定证明该序列是PIL-6。序列分析结果表明:该基因cDNA全长741bp,开放阅读框由639个核苷酸组成,推测产生的编码产物由212个氨基酸组成。核酸序列分析比对发现:荣昌猪IL-6与GenBank已发表的IL-6序列的同源性较高,为99.8%。100%,氨基酸的同源性为99.5%-100%。对荣昌猪IL-6基因氨基酸的亲水性和蛋白表面可能性进行分析,表明其与IL-6基因氨基酸序列性质一致。
吴华郭万柱张芳王新
关键词:荣昌猪白细胞介素-6克隆
Expressed sequence tags analysis of a liver tissue cDNA library from a highly inbred minipig line被引量:2
2007年
Background Porcine liver performing efficient physiological functions in the human body is prerequisite for successful liver xenotransplantation. However, the protein differences between pig and human remain largely unexplored. Therefore we investigated the liver expression profile of a highly inbred minipig line. Methods A cDNA library was constructed from liver tissue of an inbred Banna minipig. Two hundred randomly selected clones were sequenced then analysed by BLAST programme. Results Alignments of the sequences showed 44% encoded previously known porcine genes. Among the 56% unknown genes, sequences of 72 clones had high similarities with known genes of other species and the similarities to human were mostly above 0.80. The other 40 clones showing no similarity to genes in National Centre for Biotechnology Information are newly discovered, expressed sequence tags specific to liver of inbred Banna minipig. Twenty-two of the 200 clones had full length encoding regions, 38 complete 5' terminal sequences and 140 complete 3' terminal sequences.Conclusion These newly discovered expression sequences may be an important resource for research involving physiological characteristics and medical usage of inbred pigs and contribute to matching studies in xenotransplantation.
CHEN You-nanTAN Wei-dongLU Yan-rongQIN Sheng-fangLI Sheng-fuZENG Yang-zhiBU HongLI You-pingCHENG Jing-qiu
关键词:LIVERXENOTRANSPLANTATION
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