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广东省科技计划工业攻关项目(20118031300020)
作品数:
1
被引量:1
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相关作者:
胡稷杰
何敏毅
余斌
金丹
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刘亚伟
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何敏毅
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胡稷杰
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2013
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实时荧光定量聚合酶链反应筛选重组人骨形态发生蛋白-2诱导比格犬骨髓基质干细胞成骨分化差异表达的miRNAs
被引量:1
2013年
目的利川实时荧光定镣聚合酶链反应(Q—PCR)疗法筛选骨形态发生蛋白.2(rhBMP.2)诱导比格犬骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的miRNAs,探讨过表达miRNAs对成骨分化的影响。方法选取4只比格犬分离BMSCs原代,取培养至第3代BMSCs分为2组:对照组(用基础培养基培养)和实验组(在基础培养基中打11人rhBMP-2培养7d,诱导细胞成骨分化)。采川碱性磷酸酶染色法验证细胞成骨分化情况,采用Q—PCR法筛选成骨分化细胞对照组细胞差异表达的miRNAs;随机选择其中-种低表达miRNA(miR-125b),采用Lipofe(qamine2000进行转染,其中实验组1转染miR-125bmimic·s以过表达miR—125b,其阴性对照实验组2转染mimics—NC,验证过表达miR-125b7cl后对rhBMP-2诱导的比格犬BMSCs成骨分化的影响。结果成功建立比格犬BMSCs培养方法.rhBMP-2诱导比格犬BMSCs成骨分化7d后,进行Q—PCR筛选,获得表达差异相对于埘照组达到2倍以上的miRNAs41个,其中表达上调的有13个,表达下调的有28个;实验组l相对于实验组2,细胞中miR-125b表达上调4.13倍(P〈0.05)。转染7d后,ALP染色结果湿示:实验组1细胞质中深蓝色柑大颗粒明显少于实验组2。结论采用Q—PCR方法筛选比格犬BMSCs成骨分化的miRNAs系统高效、准确。筛选扶得的miRNAs中,miR.125b过表达能够显著抑制比格犬BMSCs的成骨分化。
胡稷杰
刘亚伟
何敏毅
金丹
赵辉
余斌
关键词:
聚合酶链反应
骨形态发生蛋白类
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