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家蚕一个DDRGK超家族成员的克隆及分析: 2010年; DDRGK类蛋白是在动物及植物中发现的约有300个氨基酸残基的蛋白家族,含有一个高度保守的DDRGK基序,但功能还未知。在对家蚕幼虫cDNA文库的测序中发现了含有该保守结构域的EST序列,经过电子克隆、RT-PCR,获得该基因完整的cDNA序列,将其命名BmDDRGK(GenBank登录号FJ645927)。然后构建了重组质粒转化到大肠杆菌BL21和Rosetta中诱导表达,但经SDS-PAGE检测未检测到重组蛋白的表达。利用Real-timePCR技术对BmDDRGK在家蚕五龄幼虫期和蛹期不同组织的mRNA表达水平进行了鉴定。绝对定量结果显示BmDDRGK在家蚕五龄幼虫期和蛹期的各个组织中均有较为明显的表达,在五龄幼虫期,以中肠、马氏管、睾丸表达量较高,在蛹期,以翅原基、睾丸的表达量较高。; 宗志鹏步翠玉张耀洲; 关键词：家蚕克隆实时定量PCR

家蚕二化性品种(品系)转基因用蚕卵的预处理技术研究被引量：5: 2009年; 家蚕为卵滞育昆虫,二化性家蚕品种（品系）的化性由上代卵期温度与光照等调控。将若干个二化性家蚕品种（品系）以1718℃温度催青诱导子代蚕卵非滞育,筛选出1个经济性状较优的实用品种＂秋丰＂、1个突变品系P33,二者非滞育卵圈比例分别达到96.4%和89.6%,正常催青的良卵实用孵化率分别达到96.11%和98.58%,解决了采用显微注射法以家蚕实用品种构建转基因系统过程中因蚕卵滞育不能及时孵化的难题。另对利用20%盐酸-2%甲醛混合液刺激解除蚕卵滞育的方法以及非滞育蚕卵表面用70%乙醇消毒的方法进行了尝试,前者可以获得96%以上的孵化率,后者可以缩短蚕卵预处理时间。; 唐顺明沈兴家赵巧玲章扬张国政郭锡杰; 关键词：家蚕催青温度转基因

家禽血液基因组DNA的快速提取被引量：4: 2010年; [目的]建立一种应用硅胶膜提取禽血DNA的新方法。[方法]应用硅胶膜法和传统的酚/氯仿法提取抗凝禽血基因组DNA,设计合成了一对2.7 kb的鸡卵清蛋白基因的引物,检测这2种方法提取的基因组DNA模板对聚合酶链式反应(PCR)扩增效率的影响。[结果]用硅胶膜法提取的基因组DNA产量和质量均比传统的酚/氯仿法高,将该法提取的基因组DNA作为模板能够消除抗凝剂对后续PCR反应的影响。[结论]硅胶膜法为快速提取高质量的禽血基因组DNA奠定了基础。; 孙朕孙英民郑素月樊宝良; 关键词：聚合酶链式反应

感染BmNPV家蚕幼虫马氏管蛋白质组的初探: 本文旨在探讨家蚕幼虫马氏管的蛋白质组及其免疫功能。我们构建了重组BmNPV-EGFP,注射感染家蚕,调查病毒在各组织感染时相（以呈现EGFP为指标）;以呈现EGFP的马氏管为材料,采用双向电泳（2-DE）技术对其蛋白组进...; 王娜唐顺明裘智勇丁丽平赵巧玲沈兴家; 关键词：家蚕马氏管 BMNPV 双向电泳蛋白质组; 文献传递

禁食对生长期北京鸭腺胃ghrelin免疫阳性细胞的影响被引量：1: 2010年; 本研究旨在观察禁食是否对生长期北京鸭腺胃ghrelin免疫阳性细胞生成有影响。用免疫组织化学的方法检测25、35、50日龄的北京鸭(已经禁食72 h)单位面积(mm2)腺胃组织中ghrelin阳性细胞数目。研究发现在这3个时期,不管是禁食组还是自由采食组,大量ghrelin阳性细胞多分布于腺胃深层复管状腺中;禁食组腺胃中gh-relin阳性细胞数目比自由采食组极显著增加(P<0.01)。结果提示:禁食是影响腺胃产生有活性ghrelin的重要因素。; 邵育静张书宁黄鹤悠孙鹏唐小艳韩海棠李赞东; 关键词：北京鸭 GHRELIN 禁食免疫组织化学腺胃

鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养比较初探被引量：11: 2010年; 为比较鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养与整胚培养效果,对鸡Ⅹ期胚盘细胞分别进行分散培养和整胚培养并进行传代,观察细胞生长情况,通过碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定计算阳性克隆率;结果,分散培养的细胞生长状态良好,整胚培养的细胞贴壁能力较差,培养过程中细胞易分化;传代后两种方法培养的细胞AKP阳性克隆率差异显著(P<0.01)。表明鸡Ⅹ期胚盘细胞分散培养效果较为理想。; 杨海燕孙敏田智泉秦玉蓉任丽伟许峰李碧春

蛋鸡骨骼肌卫星细胞分离培养及鉴定被引量：7: 2011年; 采用组织块分离法从蛋鸡鸡胚腿部肌肉组织中体外培养获取鸡骨骼肌卫星细胞,对培养的细胞进行了传代、冻存和复苏研究,同时从分子表达水平对分离培养的卫星细胞进行了鉴定,建立了一套鸡骨骼肌卫星细胞分离、传代、冻存和复苏的方法。特异基因表达鉴定结果表明,该方法分离得到的细胞能够表达卫星细胞特异的标志基因Pax7,而肌细胞分化基因MyoD、Myogenin未表达,说明获得的肌卫星细胞纯度较高,尚未进行肌细胞的分化。; 郑素月樊宝良张庆桥; 关键词：蛋鸡骨骼肌卫星细胞

鸡ES细胞体外定向诱导分化特性的研究被引量：1: 2011年; 旨在探索鸡胚胎干细胞(ES细胞)体外定向诱导的多向分化潜能。分离鸡X期胚盘细胞,体外培养传代,经鉴定后,采用地塞米松(DEX)、β-甘油磷酸钠(β-GP)和维生素C(VitC)诱导ES细胞向成骨细胞分化;采用维甲酸(RA)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导ES细胞向神经元样细胞分化;采用DEX、胰岛素、IBMX诱导ES细胞向脂肪细胞分化,比较不同浓度组合诱导剂的诱导效果,分别用Von Kossa’s染色法、甲苯胺蓝染色法、免疫组化法、油红O染色法和RT-PCR鉴定诱导产生的细胞。结果显示,ES细胞被诱导3～21d后,分化为成骨细胞,诱导率为40%～72%;被诱导4～7d后,分化为神经元样细胞,诱导率为71%～84%;被诱导2～21d后,分化为脂肪细胞,油红O染色阳性,并表达PPARγ基因。结果表明,在体外条件下,ES细胞可被特异的化学物质定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,具有多向分化潜能。; 李碧春陈香凝裴敬帅施青青傅德智阴彦辉张振韬窦套存王克华; 关键词：胚胎干细胞体外培养诱导分化

家蚕实用品种转基因用蚕卵的预处理技术研究: 家蚕为卵态滞育昆虫,二化性家蚕品种的化性变化受上代卵期生态环境的调控。以17℃-18℃温度催青,从若干家蚕品种中筛选初1个生产用二化性品种"秋丰"、1个二化性突变品系P33,两者非滞育卵比例分别达到96.4%和89.6%...; 唐顺明赵巧玲章扬沈兴家张国政郭锡杰; 关键词：家蚕催青滞育转基因; 文献传递

特异性识别鸡卵清蛋白基因3'非编码区序列的锌指核酸酶基因的设计装配及初步功能验证: 目的本研究拟设计装配一个能够识别并切割鸡卵清蛋白基因3’非翻译区特定序列的锌指核酸酶基因,为后续的基因打靶的转基因鸡的制作奠定基础。方法应用www.zincfingers.org网站提供的多聚锌指识别序列设计软件进行分析...; 樊宝良; 关键词：锌指核酸酶转基因鸡基因打靶; 文献传递

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国家高技术研究发展计划(2007AA100504)