国家自然科学基金(81170187)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 靶向磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体对小鼠急性心梗后早期细胞凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨靶向持续抑制磷酸二酯酶5(PDE5)的短发夹RNA(shRNA)[PDE5 shRNA]重组腺病毒载体对小鼠急性心梗后早期细胞凋亡的影响。方法结扎小鼠左冠状动脉前降支建立小鼠心肌梗死模型,随机分为实验组10例,将携带有PDE5 shRNA重组腺病毒载体注射到心肌梗死区及周边区和对照组10例,将没有插入PDE5 shRNA的普通腺病毒载体注射到心肌梗死区及周边区。1周后,进行免疫组化和原位末端标记分析(TUNEL)检测梗死及梗死周边细胞凋亡情况,酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测环磷酸鸟苷(c GMP)和蛋白激酶G(PKG)的表达,蛋白印迹分析检测各组PDE5的表达情况。结果心梗1周后,和对照组相比较,实验组小鼠梗死区及梗死周围区域细胞凋亡明显减少(P<0.05),梗死周边心肌细胞凋亡明显减少(P<0.05),实验组小鼠心肌PDE5表达明显减少,c GMP和PKG表达明显上调(P<0.05)。结论 PDE5 shRNA的干预可以明显减少心肌梗死及梗死周边区细胞凋亡和非梗死区心肌细胞凋亡,可能与上调c GMP和PKG的表达密切相关。
- 陈宏肖锦雯李龙虎洪炳哲肖健齐魏冬梅
- 关键词：短发夹RNA干预治疗心肌梗死磷酸二酯酶5
- 抑制磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体可改善小鼠心肌梗死后心力衰竭被引量：1
- 2014年
- 目的探讨抑制磷酸二酯酶5（PDE5）的短发夹RNA重组腺病毒载体（PDE5shRNA）对小鼠心肌梗死后心室重构和心力衰竭的影响。方法雄性10周龄C57BL／6J小鼠，随机分为假手术组（仅穿线不结扎左冠状动脉前降支，n=6）、PDE5shRNA组（结扎左冠状动脉前降支＋心肌注射PDE5shRNA，n=12）、普通腺病毒组（结扎左冠状动脉前降支＋心肌注射普通腺病毒，n=15）和DMEM组（结扎左冠状动脉前降支＋心肌注射DMEM，n=8）。4周后，统计各组小鼠存活情况，通过心脏超声检查和组织学染色的方法分别检测各组小鼠左心室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（LVFS）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）、心肌梗死面积和心肌纤维化面积，以评价PDE5shRNA对小鼠心功能及心室重构的影响。同时采用免疫组织化学、ELISA、Westernblot等方法，检测血管密度以及PDE5、环磷酸鸟苷（cGMP）和蛋白激酶G（PKG）等蛋白的表达情况。结果（1）小鼠存活情况：4周后，假手术组小鼠全部存活（100％），DMEM组死亡3只（37％），PDE5shRNA组小鼠死亡1只（8％）与普通腺病毒组死亡5只（33％）比较差异无统计学意义（P=0．11）。（2）心功能和心室重构指标的检测结果：PDE5shRNA组小鼠心肌梗死面积显著小于普通腺病毒组和DMEM组[（25．44-2．9）％比（42．0±3．2）％和（43．4±2．6）％，P均〈0．05]，LVFS显著高于普通腺病毒组和DMEM组[（21．1l±3．72）％比（14．22±2．91）％和（14．22±2．91）％，P均〈0．05]，低于假手术组（41．3±1．8）％（P〈0．05），LVEF显著高于普通腺病毒组和DMEM组[（48．23±7．06）％比（34．59±6．23）％和（38．1±2．8）％，P均〈0．05]，低于假手术组（77．7±3．1）％（P〈0．05），LVEDD显著小于普通腺病毒组和DMEM组[（4．88±0．36）mm比（5．72±0．62）mm和（
- 张健刚丽金哲李龙虎于勤王美兰宋爱琳洪炳哲
- 关键词：心肌梗死RNA磷酸二酯酶5
- 抑制磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体对缺氧缺糖乳鼠心肌细胞的保护作用
- 2014年
- 目的观察磷酸二酯酶5(PDE5)shRNA对缺氧缺糖条件下乳鼠心肌细胞的保护作用。方法培养新生C57BL/6J小鼠心肌细胞,通过缺氧缺糖建立小鼠心肌细胞缺氧缺糖损伤模型。随机分2组:实验组(shPDE5)通过构建PDE5 shRNA,将PDE5 shRNA转染心肌细胞;对照组(Null):将普通腺病毒载体转染心肌细胞。用原位末端标记分析(TUNEL)检测2组细胞凋亡情况;免疫蛋白印迹检测PDE5蛋白的表达;用酶联免疫吸附法测定各组心肌细胞cGMP和PKG的水平。结果与对照组比较,实验组PDE5表达明显下降,cGMP和PKG的活性明显上调(P<0.05);实验组细胞凋亡数明显减少(P<0.05)。结论 PDE5 shRNA可明显拮抗缺氧缺糖诱导的心肌细胞凋亡,可能与PDE5 shRNA持续抑制心肌细胞PDE5基因表达、显著上调cGMP和PKG活性有关。
- 李龙虎张健智慧兰金哲刘天卿王美兰于勤
- 关键词：短发夹RNA干预治疗磷酸二酯酶5心肌细胞
- 他达拉非对阿霉素心肌病的保护作用及机制研究
- 2013年
- 目的观察他达拉非对阿霉素所致心肌病的保护作用及其作用机制。方法随机分为3组:模型组与实验组(均n=16):一次性腹腔内注射阿霉素15mg.kg-1制备小鼠心肌病模型。正常组(n=10):一次性腹腔注射相同容量的生理盐水。在此基础上,实验组灌胃他达拉非4 mg.kg-1,每日1次,共14天。给药2周后,进行心脏超声检查、光镜下观察及检测各组心肌组织中cGMP含量等。结果 2周后,实验组与模型组左室舒张与收缩末期内径分别为(3.07±0.10)vs(3.50±0.20)mm与(2.17±0.10)vs(2.82±0.17)mm;左室射血分数分别为(57.85±2.03)%,(46.07±2.96)%;左室短轴缩短率分别为(29.20±3.05)%,(19.41±2.59)%;心肌细胞直径分别为(14.24±0.39),(13.78±0.36)μm;心肌纤维化面积比率分别为(2.35±0.21)%,(5.16±0.36)%;cGMP含量分别为(0.15±0.01),(0.05±0.01)pg.mg-1,2组比较均有统计学意义(均P<0.05)。实验组的肌凝蛋白重链、肌钙蛋白I以及肌间蛋白的表达较模型组均明显升高。细胞凋亡各组间未见明显差异。结论他达拉非可能通过cGMP通路减轻阿霉素所致的心肌细胞萎缩和心肌纤维化,明显改善左心室功能障碍。
- 张健李龙虎金哲洪炳哲张曙影王美兰智慧兰宋爱琳
- 关键词：阿霉素心肌病他达拉非纤维化
- PDE5 shRNA对小鼠急性心梗后早期细胞凋亡的影响
- 2015年
- 目的:探讨磷酸二酯酶5(PDE5)shRNA对小鼠急性心梗后早期细胞凋亡的影响。方法:通过结扎小鼠左冠状动脉前降支建立小鼠心肌梗死模型,并将建立好的模型随机分为实验组(n=10):将携带有抑制PDE5的shRNA(PDE5 shRNA)重组腺病毒载体对小鼠心肌组织多部位注射;模型组(n=10):将没有插入PDE5 shRNA的普通腺病毒载体对小鼠心肌组织多部位注射。1周后,进行免疫组化和TUNEL分析检测梗死及梗死周边细胞凋亡情况,ELISA法检测环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,c GMP)和蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)的表达,免疫蛋白印迹分析检测各组磷酸二酯酶5(phosphodiesterase5,PDE5)的表达情况。结果:心梗1周后,和模型组相比较,实验组小鼠梗死区及梗死周边区域细胞凋亡明显减少(P<0.05),实验组小鼠心肌PDE5表达明显减少,cGMP和PKG表达明显上调(P<0.05)。结论:PDE5 shRNA可以明显减少梗死区及梗死周边区细胞凋亡,可能与上调cGMP和PKG的表达密切相关。
- 智慧兰张健李龙虎金哲刘天卿王美兰于勤
- 关键词：短发夹RNA干预治疗磷酸二酯酶5抑制剂
