浙江省科技厅重点资助项目(2006C23006)
- 作品数：10 被引量：40H指数：4
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- 发文基金：浙江省科技厅重点资助项目国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 构建多顺反子表达载体的有效工具——FMDV 2A被引量：13
- 2007年
- 近年来肿瘤多基因治疗倍受关注,然而目前缺少一种有效的构建多顺子的工具。传统的构建多顺反子的工具,如IRES等,由于存在结构大,上下游基因表达差异显著等缺陷,严重限制了其应用。FMDV2A,因其具有结构小、剪切效率高等优点为多基因治疗带来了新的希望。主要介绍了FMDV2A的特性、"剪切"活力及其在构建多顺反子载体中的应用。
- 刘必胜刘新垣钱程
- 关键词：FMDV多顺反子基因治疗肿瘤
- 溶瘤腺病毒联合不同浓度阿霉素对肝癌细胞增殖的抑制被引量：1
- 2008年
- 研究肿瘤特异性增殖腺病毒联合不同浓度化疗药物阿霉素（ADM）对肝癌细胞增殖的抑制作用。肿瘤特异性增殖腺病AdCN103分别联合不同浓度的阿霉素处理肝癌细胞和正常肝细胞，用实时定量PCR分析腺病毒增殖能力，MTT法检测细胞存活率。结果表明，对于试验细胞株，不同浓度阿霉素存在时AdCN103的复制能力与AdCN103单独感染均没有显著差异。0．6．1～16ng／mL ADM对肿瘤杀伤力弱；80～400ng／mL ADM杀伤肿瘤细胞作用随浓度升高增强，并显著高于AdCN103或ADM单独施药组（p〈0．05）；但是过高浓度的ADM对正常细胞毒性大，并且与溶瘤病毒联用时失去协同作用。所以，溶瘤腺病毒与适当浓度阿霉素联合用药能显著提高对肝癌细胞的杀伤作用。
- 吕晨钱程
- 关键词：阿霉素肝癌细胞
- 顺铂增强携带IL-24基因的双调控溶瘤腺病毒对结肠癌细胞株的杀伤作用
- 2008年
- 研究端粒酶逆转录酶启动子hTERT启动子和缺氧反应元件HRE双调控的溶瘤腺病毒SG500-IL24联合化疗药物对人结肠癌细胞株的体外杀伤作用。采用MTT法检测病毒联合化疗对结肠癌细胞株HCT-116、SW620以及人正常细胞株L02增殖的抑制作用;利用Hoechst 33342染色对病毒-化疗疗法诱导的HCT-116细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测病毒-化疗疗法诱导的HCT-116细胞凋亡信号通路的变化。结果表明SG500-IL24或不携带外源基因的SG500联合低剂量的顺铂后,其对结肠癌细胞株HCT-116、SW620的杀伤作用显著提高(p<0.05);相同条件下对人正常细胞株L02无明显抑制作用。通过Western blot对联合疗法作用机制的初步探索表明,联合疗法增强caspase依赖性细胞凋亡通路的信号。
- 于德彬仲苏阳刘新垣
- 关键词：IL-24顺铂结肠癌
- SYBR Green实时定量PCR检测外源基因拷贝数被引量：12
- 2010年
- 以SYBR Green为荧光染料,通过携带双基因GFP和IL-24的质粒标准品绘制双标准曲线,并以绝对定量的方法检测GFP在稳定细胞株Hela-GFP基因组中的整合拷贝数。结果证实,该方法能有效检测外源基因在基因组上的整合拷贝数。从而建立起一种高效且廉价的检测外源基因拷贝数的通用方法来广泛应用于各种实验。
- 庄强钱程刘立
- 关键词：实时荧光定量PCRSYBR
- 构建多顺反子表达载体系统的新策略被引量：4
- 2009年
- 利用pSM155-GFP载体为骨架质粒,构造IRES-2A联用结构,成功实现该结构向2A结构的简单切换,得到可以同时表达shRNA和多基因、可切换多功能的真核表达载体。克服目前在单基因或多基因功能机制的研究中,普遍需要构建多个真核表达载体才能完成的研究过程。并进一步将p53基因克隆至载体中,通过多种方法证实构建得到的IRES-2A和2A元件均能有效介导多顺反子的表达,且表达的蛋白具有完好的生物活性。
- 沈俊杰单娟娟骆菁菁刘立钱程
- 关键词：多顺反子IRESSHRNA
- 携带mda-7/IL-24的双调控溶瘤腺病毒和丝裂霉素联合治疗癌症的研究
- 2009年
- 研究端粒酶逆转录酶启动子和缺失24bp双调控的溶瘤腺病毒联合化疗药物对人肺癌、宫颈癌的体外杀伤作用。采用流式细胞术检测化疗药物对病毒感染宫颈癌细胞株Hela、肺癌细胞株H460的影响;采用MTT法检测病毒联合化疗对两种肿瘤细胞以及人正常细胞株L02增殖的抑制作用;利用Hoechst 33342染色对病毒联合化疗疗法诱导的肿瘤细胞凋亡进行形态学观察;用实时定量PCR分析丝裂霉素对腺病毒增殖能力的影响。结果表明AdCN205-IL-24或携带报告基因的AdCN205-EGFP联合适当剂量的丝裂霉素后,其对Hela、H460的杀伤作用显著提高(P<0.05),相同条件下对L02无明显抑制作用,并且其复制能力不因丝裂霉素的存在而发生明显变化。
- 张磊骆菁菁庄强田雪君钱程刘立
- 关键词：肿瘤治疗实时定量PCR
- Gadd45a基因真核表达载体及其RNA干扰载体的构建被引量：1
- 2009年
- 采用反转录PCR的方法,从人类肝组织细胞系L02中扩增Gadd45a基因的全长读码框,并将其克隆到pCDNA3.0上,该重组质粒命名为pC/Gadd45a。同时,采用化学方法合成Gadd45a基因的干扰序列,经退火后克隆至pCDNA3.0,命名为pC/shRNA。实验结果证实重组质粒pC/Gadd45a和pC/shRNA构建成功。然后,将pC/Gadd45a和pC/shRNA转染L02细胞后发现,Gadd45a基因在mRNA水平和蛋白水平上分别提高表达和降低表达。Gadd45a真核表达载体及其干扰载体的成功构建,为深入研究Gadd45a蛋白对肿瘤发生发展的作用以及该蛋白在细胞信号网络中的作用提供参考。
- 郭艳合刘立钱程
- 关键词：GADD45A癌症PCDNA3.0
- 表观遗传与microRNA相互调控机制以及在抗肿瘤领域内的应用被引量：7
- 2008年
- DNA甲基化和组蛋白修饰等表观遗传机制是恶性肿瘤发生发展的重要原因之一.然而近年来研究发现,microRNA表达水平改变也参与恶性肿瘤的形成.最新研究资料揭示,表观遗传可调控microRNA表达,而一些种类的microRNA也可调节表观遗传,并且二者之间相互作用可调控组织细胞内基因表达以及诱导体内恶性肿瘤产生.研究资料还显示,表观遗传主要通过DNA甲基化、组蛋白修饰等方式调控microRNA表达,而microRNA则通过调节DNA甲基化转移酶、维持细胞中DNA甲基化水平或改变组蛋白修饰等途径调控表观遗传.对microRNA与表观遗传之间的调控关系以及在抗肿瘤领域内的应用进行全面而系统的论述.
- 徐艳敏郭艳合刘立蔡荣钱程
- 关键词：MIRNA表观遗传肿瘤发生
- 溶瘤腺病毒AdCN103联合紫杉醇抗癌研究
- 2009年
- 紫杉醇(paclitaxel,Taxol)通过抑制人或动物细胞微管蛋白和组成微管蛋白的二聚体的动态平衡来抑制肿瘤细胞生长。通过AdCN103联合使用不同浓度Taxol及单纯使用Taxol对不同癌细胞的杀伤效应进行对比研究。结果表明,Taxol对AdCN103在癌细胞中的复制能力没有显著影响。当Taxol浓度增高至4μmol/L以上,Taxo联合AdCN103杀伤肿瘤细胞的能力明显好于单纯使用Taxol。
- 张义玲钱程刘立
- 关键词：紫杉醇癌细胞抗癌作用
- IRES连接双基因在溶瘤腺病毒中的抗肝癌作用被引量：5
- 2007年
- 单基因治疗癌症可能杀伤力还嫌不够,故使用两个基因在癌症治疗中具有重要价值。利用IRES将双基因连接起来在溶瘤腺病毒中表达,构成ZD55-IL-24-IRES-TRAIL。研究发现,该病毒在多种肝癌细胞中能有效地介导外源双基因表达,并在很大程度上杀死肿瘤细胞,而对正常细胞WI38无明显杀伤力。并且,该病毒可以有效地抑制体内肿瘤生长,有的肿瘤甚至完全消失。
- 刘金刘必胜刘新垣
- 关键词：基因治疗
