金华市科技计划项目(2010-3-030)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- SiRNA干扰靶向抑制酪氨酸蛋白激酶Lck对哮喘小鼠T细胞功能的影响被引量：1
- 2011年
- 目的通过siRNA技术靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达，研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠T细胞功能的影响。方法化学法合成小鼠T细胞Lck基因21—23bp的RNA片段，以INTERFERinTMsiRNA Transfection Reagent作为转染试剂，将合成的siRNA片段转染哮喘小鼠脾脏来源的T细胞，作用48h后再与哮喘小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC）混合反应48h，收集细胞上清液，ELISA法检测细胞因子IL4、IL-13、IL-2、INF-1；Western Blot法检测T细胞Lck蛋白的含量，判断其表达是否被沉默。结果siRNA干扰组T细胞中几乎检测不到Lck蛋白的表达，且其细胞上清液中IL-4、IL-13的水平（10．19±1．66、12．34±0．79）较非siRNA干扰组（28．06±2．88、27．87±1．61）及对照组（22．07±2．51、20．47±2．37）明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论特定的21—23bp的RNA片段能够以siRNA干扰的方式有效的抑制特定基因的表达，Lck特异性siRNA可以阻断哮喘小鼠T细胞的激活和分化，减少哮喘炎症因子的释放。
- 季巧英方双燕舒彩敏杨琼芳宋东莉郑永华
- 关键词：小分子干扰
- SiRNA靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的体内研究
- 2011年
- 目的 通过siRNA的方法体内靶向抑制哮喘小鼠T细胞非受体酪氨酸蛋白激酶Lck的基因表达,研究Lck特异性siRNA对哮喘小鼠的治疗作用.方法 化学法合成小鼠T细胞Lck基因特异的siRNA片段,以in vivo-jetPEITM作为转染试剂,将合成的RNA片段与转染试剂混合后通过尾静脉注射到哮喘小鼠体内,48 h后处死小鼠,ELISA法检测肺泡灌洗液（BALF）中细胞因子IL-4、IL-17的含量；HE染色观察肺组织病理改变情况；免疫组织化学法检测肺组织中Lck表达的变化；Western Blot法检测肺组织匀浆中Lck蛋白的含量.结果 SiRNA干扰组哮喘小鼠BALF中IL-4、IL-17[（ 142.62±15.57） pg/ml,（74.18 ±5.36）pg/ml]的水平较哮喘组[（234.68±11.15） pg/ml,（96.76±8.28） pg/ml]明显下降（P＜0.01）,肺组织炎症病理改变有所减轻,免疫组化提示肺组织中Lck蛋白表达下降,肺组织匀浆中Lck蛋白的表达下降（P＜0.05）.结论 Lck特异性siRNA可以降低哮喘小鼠肺组织中炎症因子IL-4、IL-17的水平,减轻肺部炎症反应,具有一定的治疗作用.
- 方双燕舒彩敏杨琼芳陶雪飞郑永华季巧英
