国家自然科学基金(30400272)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：军事医学科学院第二军医大学无锡市第三人民医院更多>>
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- 蛇毒类凝血酶基因在大肠埃希菌中诱导表达及影响因素被引量：2
- 2006年
- 将蛇毒类凝血酶基因(TLE)亚克隆到原核表达载体pMAL-p2X上,对重组表达质粒鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21进行诱导表达;同时采用不同的OD值、诱导时间I、PTG浓度和诱导温度对尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶基因重组表达质粒pMAL-p2X进行了条件优化。研究发现,不同的诱导时间、IPTG诱导浓度和诱导温度与融合蛋白表达量有很大关系。SDS-PAGE结果显示,当OD值为0.5,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为37℃时,诱导3 h后蛋白表达量最高,超出此范围可使表达量显著减少。在优化诱导条件后,融合蛋白的表达量可达全菌总蛋白量的66%。
- 闫强何桂梅陆一鸣陈明勇孙树汉
- 关键词：原核表达影响因素
- 尖吻蝮蛇去整合素基因克隆与功能分析
- 2006年
- 目的:获得尖吻蝮蛇去整合素基因,并分析重组蛋白生物学活性。方法:提取尖吻蝮蛇毒腺组织总RNA,经RT-PCR获得去整合素基因片段,将该去整合素基因片段重组入pMAL-p2x载体中诱导表达,以直链淀粉树脂柱亲和纯化,并检测融合蛋白的抑制血小板聚集活性。结果:该片段编码的氨基酸序列中含有去整合素保守的RGD三肽序列及12个Cys残基,与GenBank中其他蛇毒去整合素氨基酸序列最高同源性为86%,重组融合蛋白具有抑制ADP诱导的血小板聚集活性。结论:发现了一个新的去整合素基因,该基因编码蛋白具有抑制血小板聚集的功能。
- 姜升阳张艳宇马平吕丽萍周锡鹏许金波
- 关键词：尖吻蝮蛇去整合素基因工程血小板聚集
- 尖吻蝮蛇类凝血酶基因的克隆及生物信息学分析被引量：4
- 2005年
- 为了获得蛇毒类凝血酶基因,本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5'和3'保守性序列设计了引物;通过RT-PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段,将该cDNA重组到pMD18-T载体中,利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析。结果表明:该特异性片段中有一个783bp的开放阅读框架,其编码蛋白质序列与蛇的类凝血酶序列有98.5%的同源性,也具有蛇毒类凝血酶的典型特征。结论:本实验获得了一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶基因。
- 张艳宇马平陆一鸣吕丽萍姜升阳周锡鹏孙树汉许金波
- 关键词：尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶RT-PCR生物信息学
- 蛇毒金属蛋白酶及去整合素的结构与功能被引量：4
- 2006年
- 蛇毒金属蛋白酶是蛇毒主要功能性蛋白质之一,它直接作用于局部组织的毛细血管,影响毛细血管内皮细胞与基底膜之间的相互作用;蛇毒去整合素与蛇毒金属蛋白酶来自共同的前金属蛋白酶原,这些酶原都含有4个共同的结构域:信号肽、前导肽、蛋白酶结构域、间隔区。去整合素因能特异性识别整合素而得名,蛇毒去整合素为低分子量蛋白质,含有多个Cys残基,它能阻断整合素与其配体的结合,抑制整合素介导的细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的黏附反应,在血小板聚集、感染、炎症反应、肿瘤转移等病理过程中发挥重要作用。
- 姜东林姜升阳张艳宇许金波
- 关键词：蛇毒金属蛋白酶去整合素
