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葡萄VvWDR1生物信息学分析及其互作蛋白分析: 2022年; [目的]探究葡萄WDR1蛋白的作用机理,丰富原花青素和花青苷物质合成调控机理。[方法]采用PCR技术克隆葡萄WDR1基因CDS区,运用生物信息学分析对其编码蛋白理化性质、亲疏水性、信号肽及跨膜结构域、二级结构、三级结构、保守结构域等进行预测;将VvWDR1的CDS全长克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,转化酵母感受态细胞并进行毒性及自激活检测分析;通过酵母双杂系统对葡萄WDR1与MYBPA2、MYC2蛋白互作机制进行研究。[结果]WDR1基因cDNA全长1011 bp,编码366个氨基酸,分子量37.8 kD,等电点5.07,分子式为C1671H2588N458O518S11;无信号肽且不具有跨膜结构域,其编码蛋白的二级结构中无规则卷曲39.29%,β-折叠26.79%,α-螺旋22.02%,β-转角11.90%;该蛋白含有5个WD40基序。同时对葡萄WDR1蛋白进行系统进化分析,发现与PhAN11、AtTTG1的同源性较高;成功构建表达载体pGBKT7-WDR1、pGBKT7-MYC2、pGADT7-MYC2,并鉴定出VvWDR1在酵母细胞中无自激活活性且无毒性;酵母双杂交试验结果显示,共转化pGBKT7-WDR1/pGADT7-MYBPA2与pGBKT7-WDR1/pGADT7-MYC2的酵母菌可以在SD/-Trp-Leu-His-Ade的四缺培养基上正常生长。[结论]克隆得到葡萄WDR1基因,对其进行生物信息学分析,且通过酵母双杂交证明VvWDR1与VvMYBPA2、VvMYC2编码的蛋白之间存在相互作用。; 郭建勇杨波梁长梅张鹏飞温鹏飞; 关键词：葡萄酵母双杂交

SO4砧木对赤霞珠葡萄果实品质的影响被引量：10: 2019年; 选择SO4砧木与赤霞珠进行嫁接,以赤霞珠自根苗为对照,对赤霞珠果实的单粒质量、果形指数、可滴定酸、还原糖、总酚等生理指标的动态进行实时测定,以探究SO4砧木对赤霞珠果实品质的影响差异。结果表明,嫁接于SO4砧木上的赤霞珠果实的单粒质量显著高于对照9.3%;果形指数高于对照,但差异不显著;可滴定酸含量高于对照24.3%;还原糖含量显著低于对照11.2%;总酚含量无明显差异。SO4砧木显著降低了赤霞珠果实的还原糖含量,显著增加了可滴定酸含量。; 牛冬青卫颖张小军温鹏飞温鹏飞; 关键词：赤霞珠葡萄砧木果实品质

亚硫酸氢钠对夏黑葡萄果实品质的影响被引量：4: 2016年; 通过对夏黑葡萄喷施不同浓度的Na HSO3溶液,探究其对葡萄果实品质的影响。结果表明,250 mg/L的Na HSO3对夏黑葡萄的果实品质影响较大,果实可溶性固形物含量、还原糖、Vc含量分别提高了3.6%,2.9%,7.8%,有机酸含量下降了9.8%。方差分析表明,300,350 mg/L处理与对照相比,果实可溶性固形物含量差异达显著水平;在还原糖含量上,250 mg/L处理与对照差异显著;在有机酸含量上,200,250,300,350 mg/L处理与对照差异均达显著水平;各处理间果实Vc含量差异不显著。; 马振云翟妍凤丁改秀王保明武晋琦温鹏飞; 关键词：NAHSO3 夏黑葡萄果实品质

高压静电场对采后葡萄果实总黄烷-3-醇及隐色花色素还原酶表达的影响被引量：4: 2014年; 目的：阐明葡萄果实采后用高压静电场（HVEF）处理对总黄烷-3-醇含量和隐色花色素还原酶（LAR）表达的影响。方法：赤霞珠葡萄成熟果实经-2 kV/cm高压静电场处理,分别于30,60,120,240 min取样,采用分光光度计法、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR对果实中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、总酚、黄烷醇类多酚、总黄烷-3-醇含量及其LAR表达进行分析,从底物、酶活性、酶蛋白含量及基因转录水平揭示HVEF对Vv lar1、Vv lar2表达的影响。结果：HVEF诱导葡萄果实中SOD活性增强,抑制果实中MDA的积累;诱导果实中总黄烷-3-醇含量增加,而对总酚、黄烷醇类多酚含量无明显作用。HVEF处理60 min后,LAR酶活性明显增强。蛋白质印迹法结果表明,HVEF明显诱导LAR1、LAR2新蛋白的合成,特别是在处理后30 min和60 min。实时荧光定量PCR结果表明,HVEF处理后30~60 min,Vv lar1、Vv lar2表达明显增强。结论：HVEF诱导Vv lar1、Vv lar2表达,LAR1、LAR2新蛋白合成,LAR酶活性增强,从而导致葡萄果实中总黄烷-3-醇积累。; 温鹏飞王敏高美英牛铁泉郜志栋冀铮春王愈; 关键词：高压静电场葡萄果实 LAR

葡萄果实MYBA1与UFGT、DFR的作用机制被引量：7: 2018年; 【目的】MYBA1转录因子在花色苷生物合成中扮演着重要角色,通过对葡萄果实发育过程中VvMYBA1、VvUFGT、VvDFR的表达和花色苷的积累模式以及VvMYBA1与VvUFGT、VvDFR作用机制的分析,阐明花色苷合成调控机制。【方法】利用实时荧光PCR检测VvMYBA1、VvUFGT、VvDFR在葡萄果实发育过程中的表达模式;采用分光光度计测定葡萄中花色苷积累量的变化规律;用SAS8.0软件分析VvMYBA1、VvUFGT、VvDFR不同时期表达量及花色苷积累量之间的相关性;通过酵母杂交系统检测VvMYBA1转录激活活性及其与VvUFGT、VvDFR间的作用。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,VvMYBA1、VvUFGT、VvDFR在葡萄果实发育过程中呈现先上升后下降的趋势,在转色期(花后60—80 d)达到最大值。葡萄果实发育过程中花色苷积累量表现为先上升后趋于稳定,转色期(花后80d)达到最大值。相关性分析结果表明,VvMYBA1表达量与VvUFGT、VvDFR表达量呈显著正相关,花色苷积累量与VvMYBA1、VvUFGT、VvDFR表达量呈显著正相关。酵母杂交系统检测表明,VvMYBA1具有转录激活功能,能够特异结合VvUFGT、VvDFR启动子,与VvUFGT、VvDFR编码的蛋白不具有相互作用。【结论】花色苷含量与VvMYBA1、VvUFGT、VvDFR表达量呈显著正相关,VvMYBA1具有转录激活功能且能特异性结合VvUFGT、VvDFR的启动子,表明VvMYBA1通过激活VvUFGT、VvDFR的启动子来调节其表达,从而调控花色苷的合成积累。; 牛铁泉董燕梅刘海霞张小军高燕高燕梁长梅张鹏飞; 关键词：葡萄

树形对酿酒葡萄果实糖含量及蔗糖代谢相关酶活性的影响被引量：5: 2021年; 研究厂字形和扇形2种树形对酿酒葡萄(赤霞珠、霞多丽)果实糖代谢与积累的影响,为其标准化栽培提供理论基础。采用离子色谱法测定葡萄果实中葡萄糖、果糖、蔗糖3种单糖的含量;采用生理生化方法测定总糖含量以及酸性转化酶(AI)、中性转化酶(NI)、蔗糖合成酶(SS)、蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性。结果表明,厂字形树形有利于赤霞珠葡萄糖、果糖、蔗糖的积累和霞多丽果糖、蔗糖的积累,扇形树形有利于霞多丽果实中葡萄糖的积累;但赤霞珠和霞多丽果实成熟期总糖含量都表现为扇形树形高于厂字形树形。树形对赤霞珠葡萄AI和SPS活性具有明显影响,且在转色期和成熟期差异达显著水平,厂字形树形中AI活性明显高于扇形,而扇形树形的NI、SS、SPS活性优于厂字形。扇形树形霞多丽葡萄中AI、NI、SS、SPS活性皆优于厂字形。扇形树形有利于酿酒葡萄总糖的积累和酶活性的升高,而厂字形树形有利于赤霞珠葡萄糖、果糖、蔗糖的积累和霞多丽果糖、蔗糖的积累。; 赵旗峰郭文娇荀志丽牛冬青梁长梅温鹏飞; 关键词：树形酿酒葡萄霞多丽蔗糖代谢酶

UV-C照射对霞多丽葡萄果实品质和叶片光合生理的影响被引量：1: 2017年; [目的]初步研究UV-C照射对霞多丽葡萄果实品质形成及叶片光合生理的影响。[方法]以8年生霞多丽葡萄(Vitis vinifera L. cv Chardonnay)为试材,定期对植物进行紫外(UV-C)照射,分别采用质量法、游标卡尺测量法、分光光度计法、滴定法、光合仪测量法对果实的质量、纵横径、糖、酸、维生素C、叶片组织结构、叶绿素含量及相关的光合生理指标进行测量。[结果]葡萄果实生长发育的过程中,紫外线照射,没有改变果实单粒重、横径以及纵径的增长规律和可溶性总糖及有机酸的积累规律,也并未明显改变霞多丽叶片栅栏组织与海绵组织结构,但显著影响着果实的内在品质,明显促进叶绿素含量增加,光合速率增加。UV-C照射导致霞多丽果实总糖含量分别提高3.25%(花后20d)、8.27%(花后80d),有机酸含量降低34.18%(花后80d),且在果实成熟期内,Vc含量降低5.89%(花后80d),叶绿素增加23.87%,光合速率增加139.24%。[结论]UV-C照射可促进总糖含量增加,有机酸含量降低,叶绿素含量增加,导致果实的内在品质提高。; 董燕梅牛艳丽牛冬青代伟娜李孟欣温鹏飞; 关键词：霞多丽葡萄果实品质叶绿素光合生理

叶面喷施水杨酸对极早蜜葡萄果实有机酸含量的影响被引量：2: 2017年; 以鲜食葡萄极早蜜为试材,探讨了不同浓度水杨酸对葡萄果实有机酸含量的影响。葡萄盛花20,40,70,100 d后喷施不同浓度(0,1,3,5 mmol/L)的水杨酸,采用HPLC法测定果实中有机酸含量。结果表明,极早蜜成熟果实总酸含量为19.15 mg/g,以酒石酸为主,占总酸含量的48.41%;酒石酸含量随极早蜜果实发育呈下降趋势,苹果酸则表现为先升高再降低。叶面喷施3个浓度水杨酸导致果实中总酸分别比对照增加5.36%,0.55%,6.05%,但差异不显著。3 mmol/L水杨酸处理花后60 d酒石酸降低15.05%,苹果酸降低18.09%;5 mmol/L水杨酸处理花后80 d酒石酸增加17.07%,花后100 d苹果酸增加30.06%。; 牛艳丽董燕梅张鹏飞牛铁泉温鹏飞; 关键词：葡萄果实水杨酸有机酸

酵母双杂诱饵表达载体pGBKT7-ufgt的构建与表达被引量：1: 2018年; 构建葡萄赤霞珠(Vitis vinifera L.cv Cabernet Sauvignon)花色苷合成前体酶——类黄酮葡萄糖基转移酶(UDPG-flavonoid-3-O-glycosyltranferase,Ufgt)诱饵表达载体。通过RT-PCR扩增获得葡萄ufgt基因CDS序列,与p GBKT7酵母诱饵载体连接;经测序和双酶切鉴定后,转化酵母菌株AH109,分析Ufgt蛋白在酵母菌株中的表达情况。成功扩增出ufgt基因CDS全长,并成功构建了p GBKT7-ufgt,重组载体p GBKT7-ufgt成功的转化到AH109酵母菌株中,且无毒和自激活性,能够正确稳定的表达。p GBKT7-ufgt酵母诱饵蛋白表达载体被成功构建,为后续Ufgt蛋白互作筛选奠定基础。; 董燕梅张鹏飞张小军高燕温鹏飞; 关键词：诱饵蛋白酵母双杂交

葡萄DFR蛋白的生物信息学分析及自激活检测: 2018年; [目的]生物信息学分析葡萄DFR蛋白的功能结构域和蛋白互作预测,构建DFR酵母双杂交诱饵载体,并检测其自激活活性。[方法]利用NCBI中的CDD分析DFR蛋白保守区域,STRING在线软件对DFR蛋白互作情况进行预测,采用PCR技术扩增出葡萄DFR基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,PEG/LiAc法将阳性质粒pGBKT7-DFR转化至酵母AH109中,通过缺陷型培养基培养进行自激活检测。[结果]DFR蛋白保守区域有NADP结合位点,预测到DFR蛋白与MybPA1蛋白有互作关系。成功构建了诱饵载体pGBKT7-DFR,并且对酵母菌无毒性,对报告基因无自激活功能。[结论]本研究通过生物信息学分析得出,酵母诱饵蛋白表达载体pGBKT7-DFR,可以作为酵母双杂交诱饵载体筛选与DFR相互作用的蛋白,进而对其进行功能性研究。; 刘海霞温灏宇杨波李晓慧张鹏飞温鹏飞; 关键词：生物信息学诱饵载体酵母双杂交

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国家自然科学基金(31372013)

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