国家自然科学基金(39925015)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：耿建国张英汉郭云云钱凯先张娜更多>>
- 相关机构：中国科学院上海生命科学研究院西北农林科技大学浙江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 神经迁移因子在血管系统中的表达与功能被引量：1
- 2004年
- 神经迁移因子是近10年来在发育神经生物学中的研究热点,主要由ephrin、neuropilin、Slit和netrin四大家族成员构成,其主要功能是吸引或排斥神经元轴突的迁移,在神经系统中发挥着重要作用。现在,越来越多的实验证据表明:神经迁移因子的作用不仅仅局限在神经系统发育过程中,在血管发生或新生血管形成中同样具有不可替代的功能。
- 张娜钱凯先耿建国
- 关键词：血管系统血管发生新生血管形成
- 血清淀粉样P成分转基因小鼠模型的建立
- 2006年
- 目的:建立可表达血清淀粉样P成分(SAP)转基因小鼠模型,以研究SAP基因的功能。方法:采用基因重组技术将SAP基因插入到pCMV-Tag5A真核表达载体上。经BciVI限制性内切酶酶切后,琼脂糖凝胶电泳回收2.7 kb目的片断,受精卵原核显微注射法将其注入雄原核,制备转基因小鼠。采用PCR法在基因水平筛选SAP转基因小鼠阳性小鼠;免疫沉淀法结合免疫印迹法在蛋白水平检测SAP基因在PCR阳性转基因小鼠中的表达情况。结果:成功构建了pCMV-Tag5A/mSAP真核表达载体。经显微注射法将2.7 kb线性目的基因片断注射入受精卵雄原核,移植入代孕母鼠,所生127只小鼠,其中PCR鉴定获得10只转基因阳性小鼠。免疫沉淀法和免疫印记法随机检测83#♂founder、7#♀founder与C57 BL/6J小鼠回交F1代PCR阳性转基因小鼠血清中外源SAP基因蛋白水平的表达,发现均有表达。结论:该研究以C57BL/6J小鼠为研究对象,成功地产生能稳定遗传SAP基因的过表达转基因小鼠模型,它将有利于研究SAP基因在炎症、淀粉样沉淀、自身免疫系统中的作用。
- 郭云云张英汉耿建国辛亚平
- 关键词：显微注射转基因小鼠
- 小鼠SAP基因的克隆、表达及多抗制备
- 2006年
- 目的制备小鼠SAP多克隆抗体,为进一步研究其功能和探讨其与炎症、肿瘤等疾病的相关性提供素材。方法PCR扩增小鼠SAP基因编码区的DNA片段,将其重组入原核表达质粒PET30a(+),转化入大肠杆菌BL21中,异丙基-βD硫代办乳糖苷(IPTG)诱导产生His/mSAP融合蛋白,SDS-PAGE分析结果表明,蛋白主要以包涵体形式存在。采用割胶回收的方法纯化目的蛋白,免疫新西兰白兔,制备抗血清。通过ELISA、Western印迹来检测抗血清效价及特异性。结果成功的构建了PET30a(+)/mSAP重组质粒,表达融合蛋白,免疫家兔所获得的mSAP多克隆抗体。结论mSAP多克隆抗体特异性强,效价高。
- 郭云云张英汉耿建国
- 关键词：SAP基因克隆原核表达多克隆抗体
