上海市科学技术发展基金(064909007)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- 小鼠肝炎病毒N蛋白间接ELISA方法的建立被引量：1
- 2008年
- 目的运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。方法将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。结果确定其包被抗原的浓度为300 ng/mL,血清稀释度为1∶200,山羊抗小鼠酶标抗体的稀释浓度为1∶3000。S/P≥0.386则为阳性,S/P<0.308为阴性,两者之间为可疑。经阻断试验、交叉试验和重复性实验,表明该方法特异性强,重复性好。与国家实验动物检测中心的MHV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为94.1%、93.3%和93.9%。用该融合蛋白包被聚苯乙烯板后在-20℃下可保存5个月,应用该方法检测了98份送检的血清样品,有10份检测为阳性。结论本研究建立的间接ELISA特异性强,重复性好,为进一步开发MHV血清抗体诊断试剂盒奠定了基础。
- 周艳胡建华高诚周洁
- 关键词：小鼠肝炎病毒重组N蛋白间接ELISA
- 小鼠肝炎病毒N基因的原核表达和免疫活性初步分析被引量：1
- 2008年
- 目的对小鼠肝炎病毒(mouse hapetitis virus)A59毒株核蛋白(N)基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析。方法根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列(AY700211),设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS,将目的片段纯化后与pGEM-T-easy载体连接得到重组质粒pTN,双酶切回收目的基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组质粒pGEX-NS,转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行了诱导表达。对表达裂解物进行SDS-PAGE和Western-blotting验证。结果表达产物相对分子质量约56×103与预期相符;能与MHV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的NP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测小鼠肝炎病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。
- 周艳胡建华高诚王宗耀
- 关键词：小鼠肝炎病毒N基因克隆原核表达
- 呼肠孤病毒3型S1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2008年
- 采用RT-PCR方法从呼肠孤病毒3型(Reo-3)中扩增S1基因的主要抗原片段SR,并将其克隆到原核表达载体pQE-31中诱导表达,融合蛋白SR-δ1纯化后被用作包被抗原,建立了检测呼肠孤病毒3型抗体的间接ELISA。对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析的结果表明,表达蛋白SR-δ1的分子质量约为32ku,具有很好的抗原性。建立的ELISA与鼠痘病毒、仙台病毒、小鼠肝炎病毒、小鼠肺炎病毒均无交叉试验,具有良好的特异性、重复性和敏感性,与国家实验动物检测中心的ELISA检测试剂盒的符合率为98.7%,证实该方法可用于Reo-3抗体的检测。
- 冷雪梅胡建华高诚谢建云
- 关键词：S1基因原核表达间接酶联免疫吸附试验
