国家自然科学基金(30171008) 作品数:22 被引量:94 H指数:7 相关作者: 孙开来 富伟能 黄带发 李福才 赵旭 更多>> 相关机构: 中国医科大学 沈阳军区总医院 中国人民解放军第463医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 更多>>
喉癌细胞中S100A8新的相互作用蛋白质的鉴定 被引量:3 2007年 目的探索S100A8相互作用蛋白在喉癌发生、发展中的可能机制。方法应用抗S100A8抗体通过免疫沉淀的方法从喉癌细胞系Hep-2中分离与S100A8相互作用的蛋白质。用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪分析目的蛋白条带。根据这些目的蛋白条带的肽指纹谱,用Mascot软件预测其相应的蛋白质。用P-Match软件预测这些蛋白质的NF-kappa B结合位点。用免疫共沉淀方法证实其中一个蛋白质与S100A8相互结合的能力。结果获得了4种与S100A8相互作用的新的蛋白质,它们分别是假想蛋白质LOC80154(hypothetical protein LOC80154)、MHCclass Ⅰ HLA-B、T-box1异构体C相似蛋白质(similar to T-box1 isoformC)和肌纤维膜相关蛋白1(sarcolemmal associated protein 1)。这4种蛋白质均具有NF-kappa B的结合位点,其中MHCclass Ⅰ HLA-B是NF-kappa B通路中的一个成员,我们首次证实该蛋白质具有结合S100A8的能力。结论本研究获得的S100A8新的伴侣可能是NF-kappa B通路的成员。MHCclass Ⅰ HLA-B与S100A8的结合提示S100A8可能作为新成员与包括HLA-B在内的其他蛋白质在NF-kappa B通路中发挥作用。这些发现为进一步研究S100A8在喉癌发生中的分子机制提供了新线索。 富伟能 郭艳 黄带发 尚超 孙开来关键词:喉癌 NF-KAPPA 6q25区域内一个新基因MTLC的克隆及特性分析 被引量:24 2003年 目的 克隆 6q2 5区域内喉癌相关新基因。方法 以表达序列标签为电子探针 ,在人类基因组数据库中进行电子杂交 ,钓出相应基因组DNA克隆后进行基因预测。根据获得的基因序列设计引物 ,逆转录 聚合酶链反应扩增新基因cDNA。结果 克隆了 1个 6q2 5区域内的新基因。该基因全长约 2 1kb ,含两个外显子 ,其cDNA序列长 10 0 6bp ,编码蛋白包括 2 3 5个氨基酸。其 5′侧翼序列存在癌蛋白c Myc的结合位点 ,将其命名为MTLC (c Myctargetfromlaryngealcancercells)基因。同源性分析表明该基因编码蛋白与小鼠MT MC1蛋白同源性达 78%。MTLC蛋白一级结构含有一个核定位信号结构域 ,亚细胞定位实验证实该基因主要在细胞核表达 ,Northern印迹分析表明MTLC基因在心肌、肝、肾、脑等多个组织有表达。结论 成功克隆了 1个新基因MTLC ,该基因可能作为c Myc的靶基因以转录因子形式参与维持细胞正常生理功能。 邱广斌 邱广蓉 徐振明 黄带发 宫立国 李春义 孙兴和 孙开来关键词:喉癌 基因克隆 人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2中心体扩增与染色体不稳定的研究 目的:为研究人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2中心体扩增与染色体不稳定。方法:以正常人胚肺成纤维细胞系WI-38为对照,应用免疫荧光的方法检测Hep-2细胞系中心体扩增情况;应用常规和高分辨G显带的方法检测Hep-2细胞系的... 李英慧 李福才 王曦 赵旭 孙开来关键词:HEP-2细胞系 中心体扩增 染色体不稳定 文献传递 喉癌中p15、p16基因纯合缺失与EGFR基因扩增相关性研究 被引量:5 2004年 研究p15、p16基因缺失和EGFR基因扩增的相关性及其与喉癌发生、发展的关系。提取喉癌新鲜组织中基因组DNA ,采用聚合酶链反应技术 ,分别对 3 0例喉癌进行p15基因第 2外显子 (p15E2 )和p16基因第 2外显子(p16E2 )进行纯合缺失研究 ;应用FISH方法进行喉癌实体瘤EGFR基因扩增研究。p15E2纯合缺失率为 13 3 % (4 3 0 ) ,p16E2纯合缺失率为 16 7% (5 3 0 ) ,p15E2、p16E2共同缺失率为 6 7% (2 3 0 )。在 3 0例喉癌实体瘤EGFR基因扩增频率为 3 0 % (9 3 0 ) ,扩增 2~ 8倍。p15E2和p16E2纯合缺失以及二者共同缺失与EGFR基因扩增相关 ,可能引起细胞周期失控而导致细胞增殖紊乱 。 李福才 李英慧 赵旭 富伟能 徐振明 李增刚 孙开来关键词:喉癌 P15基因 P16基因 表皮生长因子受体 S100A8 mediates the activation of P65/HLA-B/S100A8/BCL-2/Caspase-9 (-3) pathway in laryngeal carcinogenesis 被引量:2 2008年 S100 calcium binding protein A8 (S100A8),a possible novel member of NF-kappa B signal pathway in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC),interacts with human leukocyte antigen B (HLA-B) which carries an NF-kappa B binding site within the enhancer A. The objective of this study was to explore the molecular mechanism of S100A8 in laryngeal carcinogenesis. RT-PCR,Western blotting and immuno-histochemistry staining were applied to evaluate the expression levels of IKKα,P65,REL-B,S100A8,APAF-1 and BCL-2 genes. The signal transduction passway in which S100A8 might participate was explored by RNA interference. Flow cytometry,TUNEL assay and cell invasion in vitro were used to detect the biological behavior of Hep2 cells induced by S100A8 gene. Our results showed that high expression of S100A8 was related to tumorigenesis in LSCC and negatively correlated with the degree of differentiation,indicating that S100A8 gene could inhibit apoptosis and promote metastasis in LSCC. Additionally,the suppression of S100A8 by RNA interference down-regulated BCL-2 but not APAF-1,P65 and IKKα,while,the suppression of P65 could significantly down-regulate the expression of S100A8 gene. In conclusion,S100A8 plays an important role in P65/HLA-B/S100A8/BCL-2/Caspase-9 (-3) pathway in laryngeal carcinoma. HUANG DaiFa FU WeiNeng GUO Yan XU ZhenMing SUN XingHe SUN KaiLai关键词:S100A8 RNAi抑制NF-κB通路相关基因对喉鳞癌凋亡及转移的影响 被引量:1 2008年 目的:用RNA干涉方法探讨NF-κB通路参与喉癌发生、发展的可能机制。方法:RT-PCR、Western Blot检测喉鳞癌组织中NF-κB通路中相关基因表达,RNA干涉方法抑制p65,p50表达,流式细胞仪,TUNEL方法检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭力。结果:36例喉鳞癌组织中21例p65mRNA表达上调(58.33%)高于癌旁组织(P=0.012),13例出现p50mRNA表达上调(36.11%),但与癌旁组织比较无显著差异(P=0.602)。喉鳞癌组织的p65蛋白表达明显较癌旁组织增强(P=0.044),而p50蛋白表达无显著差异。特异siRNA转染Hep2细胞明显抑制p50,p65基因表达,该作用可持续10天。RNAi抑制p65基因表达使Hep2细胞凋亡率增加,在转染后第7天最高达29.89%,与对照组比较升高超过10倍(P=0.020);同时使Hep2细胞侵袭力明显下降(P=0.003),而干涉p50基因对细胞凋亡及细胞侵袭性影响不明显。结论:RNAi抑制p65表达诱导Hep2细胞凋亡、抑制细胞侵袭力,提示抑制p65表达与常规治疗结合可能成为改善喉癌预后的选择。 黄带发 富伟能 孙开来 徐振明 董卫东关键词:RNA干涉 S100A8基因在喉鳞癌发生中作用机制的研究 被引量:2 2010年 目的:研究S100A8与喉癌发生的关系,揭示炎症在喉癌发生中的作用。方法:应用RT-PCR、Western Blot、免疫组化检测S100A8表达,RNAi方法检测其功能、Transwell检测细胞侵袭力,TUNEL和流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT检测细胞生长活性。结果:36例喉鳞癌组织中17例出现S100A8 mRNA表达上调(47.2%),而7例喉部良性肿瘤中2例出现表达上调(28.5%)。13例病人喉鳞癌组织中7例S100A8蛋白表达增高。免疫组化分析喉鳞癌组织S100A8蛋白阳性率为54.3%。在高分化喉鳞癌组织为71.4%,而分化程度差的喉癌组织中阳性率为12.8%(P=0.023)。RNAi抑制S100A8基因使Hep2细胞凋亡率增高近9倍,使Hep2细胞侵袭力下降,影响Bcl-2基因表达,但对Hep2细胞的IKKα表达无明显影响。结论:S100A8与喉鳞癌发生相关并参与喉鳞癌分化,S100A8基因具有抑制喉癌细胞凋亡,促进Hep2细胞侵袭的作用。S100A8基因可能部分通过NF-κB通路参与喉癌发生、发展,在此通路中S100A8基因位于p65下游。 黄带发 富伟能 尚超 徐振明 孙开来关键词:喉鳞状细胞癌 RNA干涉 NF-ΚB通路 p53突变和STK15过表达与肿瘤中心体不稳定的相关性 被引量:3 2003年 中心体异常与肿瘤发生的相关性已越来越受到人们的重视。本文综述了中心体异常与肿瘤发生的关系 ,论述了与中心体异常和肿瘤发生相关的基因 p5 3和 STK1 5以及二者相关性 ,对研究中心体在肿瘤的发生机制、诊断、治疗中的应用前景作以展望 。 赵旭 李福才关键词:P53突变 中心体异常 肿瘤 声门上喉癌的染色体异常和重要相关基因的研究(英文) 被引量:6 2006年 目的筛查声门上喉癌发生、发展及转移相关的异常染色体和重要基因。方法应用比较基因组杂交(comparative ge-nomic hybridization,CGH)分析喉声门上鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell cancer,LSCC)癌组织和癌旁组织DNA拷贝数的差异。应用cDNA芯片结合聚类分析研究喉声门上癌癌旁组织、癌组织和转移淋巴组织中差异表达的基因。结果CGH结果表明每例喉癌平均涉及12.9个染色体的异常,其中出现高频率扩增的染色体区集中在3q15-21(14/18)、5p12-13(11/18)、8q22-24(6/18)、11q12-13(8/18)、15q21-23(7/18)and18p11(8/18),而高频率缺失的染色体区集中在1p13-21(8/18)、3p21-23(14/18)、5q21-22(14/18)、9p12-pter(11/18)and13q21-31(8/18)。聚类分析将表达差异的基因分为3组。表达差异在5倍以上的基因12个,在由癌旁至癌阶段、癌至转移阶段均存在表达异常的基因3个。这15个重要基因是喉癌新的相关基因,其中4个基因cytochrome C oxidaseⅤa,PPBP,EPHX2and PON1与喉癌相关性的研究未见报道,而且,SH3GL2位于高频率缺失的染色体区9p12-pter。结论我们发现的特异染色体区和重要基因将为喉癌发生、发展和转移的研究提供重要线索。 富伟能 尚超 黄带发 徐振明 孙兴和 孙开来关键词:比较基因组杂交 CDNA芯片 喉鳞状细胞癌 癌发生 人喉癌新的相关基因cDNA片段的克隆与鉴定 2006年 目的:寻找喉癌新的相关基因,阐明喉癌发生的分子机制,为喉癌的基因诊治提供研究的靶基因。方法:应用mRNA差异显示方法对喉癌患者的癌旁、癌及颈部转移淋巴结组织差异cDNA进行了筛选、克隆和测序,并对其进行了鉴定和同源性分析。结果:筛选出7个差异cDNA片段,克隆并鉴定了其中两个与喉癌发生相关的cDNA片段,它们与多种肿瘤相关基因的cDNA序列同源。结论:克隆的两个cDNA片段可能是喉癌新的相关基因cDNA片段,全长cDNA克隆及深入研究其功能有助于发现喉癌新的相关基因。 富伟能 娄毅 徐振明 孙兴和 孙开来关键词:喉肿瘤