国家自然科学基金(30171077)
- 作品数：11 被引量：30H指数：3
- 相关作者：郭政东李智王海波刘洪瑞王昊更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国医科大学附属第一医院沈阳市中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同配体对m_5乙酰胆碱受体-G蛋白亚单位G_(11)融合蛋白表达和功能的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 制备毒蕈碱乙酰胆碱受体m5亚型与G 蛋白亚单位G1 1 (m5AChR G1 1 )融合蛋白 ,探索m5AChR与G1 1 之间的耦联功能、相互作用及其影响因素。方法 两步PCR法建立m5AChR与G1 1 融合cDNAs,并在Sf9细胞内表达。 [3 H]QNB和 [3 5S]GTPγS结合实验检测m5AChR与G1 1 融合蛋白的功能。结果m5AChR G1 1 融合蛋白的表达水平为 (60 .4± 2 .0 )nmol·g-1 膜蛋白。不同配体存在使融合蛋白中G1 1 与GDP的亲和力发生变化。乙酰胆碱(ACh)、卡巴胆碱、毛果芸香碱、异丙铵、异丙嗪及阿托品存在时 ,GDP的IC50值分别为 1 35,63 ,1 82 ,4.1 ,8.9和 5.9μmol·L-1 ,无配体存在时 ,GDP的IC50 值为 2 3.4μmol·L-1 。结论 杆状病毒Sf9细胞系统表达的m5AChR G1 1 融合蛋白具备m受体配体结合特性和组分间耦联的功能。m5AChR G1 1 融合蛋白对GDP亲和力取决于m受体配体的性质 。
- 郭政东王海波李智刘洪瑞郭政礼赵立斌
- 关键词：配体毒蕈碱融合蛋白胆碱能激动剂胆碱能拮抗剂乙酰胆碱受体
- 毒蕈碱样乙酰胆碱受体及其信号转导被引量：16
- 2002年
- 毒蕈碱样乙酰胆碱受体 (MAChRs)是G蛋白偶联受体 (GPCRs)超家族中的一员 ,具有该家族特征性的结构和信号转导方式。GTP结合蛋白 (G proteins)是一类具有GTP酶活性的蛋白质 ,由α、β、γ三个亚基构成。其中α亚基结合GDP或GTP ,分别代表G蛋白的非活化和活化状态。M受体与Gi/Go或Gq/ 11间的作用机制仍在探讨中 ,但基本过程与Gs介导的信号转导模式相似。激动剂持续作用后 。
- 王昊郭政东李智
- 关键词：M受体GTP结合蛋白信号转导
- M受体-G蛋白信号转导途径研究进展被引量：7
- 2008年
- 毒蕈碱乙酰胆碱受体(mAChR)是G蛋白偶联受体超家族中的一员,具有该家族特征性的结构和信号转导方式。GTP结合蛋白(G protein)是一类具有GTP酶活性的蛋白质,由α、β和γ三个亚基构成。mAChR可以与G蛋白偶联,引起GTP与α亚基结合,导致Gα与Gβγ分离。近年来发现,不但Gα-GTP可以调节效应分子,Gβγ也可以调节许多效应分子如腺苷酸环化酶、磷脂酶C、K+通道、Ca2+通道、MAPK和受体激酶等,介导一系列的生物学效应,在信号转导过程中发挥重要的作用。
- 孙科郭政东
- 关键词：毒蕈碱GTP结合蛋白信号转导效应分子
- m_5 AChR-G_(11)融合蛋白筛选m_5受体配体的研究
- 2005年
- 目的:以m5AChR-G11融合蛋白为工具,筛选m5受体亚型特异性配体,并且探讨m5AChR-G11融合蛋白中两组分相互作用的机制。方法:采用杆状病毒Sf 9细胞表达系统,制备m5AChR-G11融合蛋白;通过[3H]QNB放射配体结合实验和[35S]GTPγS替代结合实验,检测m5AChR-G11融合蛋白的功能。结果:m5AChR-G11融合蛋白的表达水平为(60.39±1.95)pmol.mg-1蛋白。不同配体存在时使融合蛋白中G11与GDP的亲和力发生变化,ace-tylcholine,M cN-A-343,AF-102B,R-(+)-hyoscyam ine,trop icam ide,alcuron ium和atrop ine存在时以及无配体时,GDP的IC50值分别是134.90,46.77,38.02,10.00,13.80,18.62,5.89,23.40μmol/L。结论:杆状病毒Sf 9细胞表达系统表达的m5AChR-G11融合蛋白具备m受体配体结合特性和两组分间的偶联功能。乙酰胆碱是m5受体的完全激动剂,M cN-A-343和AF-102B是部分激动剂,R-(+)-hyoscyam ine,trop icam ide,alcuron ium和阿托品是拮抗剂。
- 王海波秦兴军郭政东杨君兰
- 关键词：G蛋白偶联受体拮抗剂
- M_2-G_(i1α)融合蛋白在Sf9细胞中的表达及M_2AChR特异性药物的鉴别
- 2010年
- 目的通过杆状病毒-Sf9细胞系统表达M2-Gi1α融合蛋白,并利用M2-Gi1α融合蛋白为工具筛选毒蕈碱性乙酰胆碱受体亚型2(M2AChR)特异性配体,探讨M2-Gi1α融合蛋白中两组分相互作用的机制。方法通过两步PCR反应建立M2AChR与Gi1α融合cDNAs,并在Sf9昆虫细胞中表达M2-Gi1α融合蛋白。通过[3H]羟苯二乙酸奎宁酯([3H]QNB)配体饱和结合实验及[35S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测M2-Gi1α融合蛋白表达水平,并筛选M2AChR的特异性配体。结果 M2-Gi1α融合蛋白的表达水平为(8.44±0.39)nmol·g-1膜蛋白。不同配体使M2-Gi1α融合蛋白中Gi1α与GDP的亲和力发生变化,乙酰胆碱、氧化震颤素、槟榔碱、阿托品、fangchinoline、levitimide的IC50值分别为:21.35,23.86,11.91,0.13,1.05,1.75μmol·L-1,无配体存在时为2.50μmol·L-1。结论杆状病毒-Sf9细胞表达系统表达的M2-Gi1α融合蛋白具备M受体与配体结合的特性和组分间的耦联功能,通过检测GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别M2受体亚型特异性药物。
- 张雪薇郭政东白立川姜爱民孙科
- 关键词：融合蛋白G蛋白耦联受体拮抗剂
- m_4AChR-Gilα融合蛋白的建立、表达及几种配体对其机能的影响
- 2004年
- 目的通过Baculovirus Sf9细胞系统制备并表达m4AChR Gilα融合蛋白 ,检测几种配体对融合蛋白质中m4AChR与Gilα间相互作用 ,并以该融合蛋白质为工具 ,筛选m4AChR的特异性配体。方法两步聚合酶链反应建立m4AChR Gilα融合cDNAs,并在Sf9细胞内表达。通过 [3 H]QNB和 [3 5S]GTPγS替代结合实验研究几种配体乙酰胆碱、卡巴胆碱、AF 10 2B、prifinium、AF DX116和阿托品对m4AChR Gilα融合蛋白的作用。结果m4AChR Gilα融合蛋白表达水平为 (4 7.0 4± 1.5 8)pmol/g蛋白 ,不同配体使融合蛋白质中Gilα与二磷酸鸟苷的亲和力发生变化。结论杆状病毒表达的m4AChR Gilα融合蛋白具备m受体配体结合特性和组分间的偶联功能。配体通过改变融合蛋白质中Gilα与二磷酸鸟苷的亲和力 ,活化该融合蛋白质。
- 王海波郭政东张海鹏赵立斌郭政礼
- 关键词：G-蛋白配体
- 应用m_5AChR-G_(11α)融合蛋白鉴别M_5受体亚型的特异性药物被引量：2
- 2006年
- 目的采用Sf9细胞系统表达m5AChRG11α融合蛋白,通过检测GDP与m5AChRG11α融合蛋白的亲和力大小来鉴别m5AChR的特异性激动剂和拮抗剂。方法用两步PCR反应重组m5AChRG11α融合蛋白cDNAs,并插入到pBacPAK9病毒载体中,利用Sf9细胞表达m5AChR受体蛋白和m5AChRG11α融合蛋白,通过[3H]QNB结合饱和实验及[35S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测受体表达水平及GDP与m5AChRG11α融合蛋白的亲和力。结果m5AChRG11α融合蛋白表达水平是(47.6±3.2)nmol·g-1膜蛋白。不同配体的存在使融合蛋白中G11α与GDP的亲和力发生变化。ACh、YM796、Oxotremorine、Methixene、Dextimide及atropine存在以及无配体存在时,GDP的IC50值分别是128.0,72.1,68.5,16.2,14.9,9.7和20.8μmol·L-1。结论Sf9细胞系统表达的m5AChRG11α融合蛋白具备M受体配体结合的特性和组分间偶联功能。m5AChRG11α融合蛋白对GDP的亲和性决定于M受体配体的性质。对于m5AChRG11α融合蛋白,ACh是m5AChR完全激动剂,YM796和Oxotremorine是部分激动剂;atropine,Methixene和Dextimide是拮抗剂。
- 刘洪瑞郭政东韩雪松王海波李智
- 关键词：G蛋白融合蛋白激动剂
- m_1AChR-G_(11)和m_4AChR-G_(16)融合蛋白的建立、表达及几种配体的作用
- 2003年
- 目的 :通过Baculovirus-Sf9cells系统制备m1AChR -G11融合蛋白和m4AChR -G16融合蛋白 ,检测几种配体对m1AChR与G11及m4AChR与G16间相互作用的影响 ,并以m1AChR -G11和m4AChR -G16融合蛋白为工具 ,筛选m1和m4受体的特异性配体。方法 :两步PCR建立m1AChR -G11和m4AChR -G16融合DNA ,并在Sf9细胞内表达。通过 [3 H]QNB和 [3 5S]GTPγS结合实验检测m1AChR -G11融合蛋白和m4AChR -G16融合蛋白的药理学特性 ;通过 [3 5S]GTPγS替代结合实验研究几种配体包括acetylcholine(ACh) ,pilocarpine(Pilo)。 4 -hydroxy - 2 -butynyl- 1-trimethylam monium -m -chloro -carbanilatechloride (McN -A - 343) ,tetrandrine ,pirenzepine (PZ) ,alcuronium ,atropine ,R - (+) -hyoscyamine和gallamine对m1AChR -G11融合蛋白和m4AChR -G16融合蛋白作用的方式 ,并以这两种融合蛋白为模型筛选m1和m4受体的特异性配体。结果 :m1AChR -G11融合蛋白和m4AChR -G16融合蛋白表达水平分别为 (45 4±2 6 )nmol/gprotein和 (47 0± 1 6 )nmol/gprotein。不同配体使融合蛋白m1AChR -G11和m4AChR -G16中G11和G16与GDP的亲和力发生变化。结论 :杆状病毒 -Sf9细胞系统表达的m1AChR -G11融合蛋白和m4AChR -G16融合蛋白具备m受体配体结?
- 王海波郭政东张海鹏王娟温华李新鸣
- 关键词：毒蕈碱信号转导配体G蛋白
- m_3AChR-G_(11α)融合蛋白表达及功能检测
- 2010年
- 目的制备m3AChR-G11α融合蛋白,探索m3AChR与G11间的偶联功能、相互作用及其影响因素。方法通过应用两步PCR方法构建m3AChR-G11α融重组的cDNAs,并在Baculovirus-infected Insect cells(Sf9)细胞内表达m3AChR-G11α融合蛋白。BCA法测定Sf9细胞表达的膜蛋白总含量,[3H]QNB和[35S]GTPγS放射性配体结合实验检测融合蛋白的偶联功能。结果 BCA法测定Sf9细胞膜蛋白的总浓度为2.86g·L-1,M3-G11α融合蛋白的表达水平为7.76×10-9mol·g-1protein。不同配体存在时使融合蛋白中的G11α与GDP的亲和力发生变化。ACh,Pilo,CCh,MCN-A-343,Atro,4-Damp,Dafi及无配体存在时,GDP的IC50值分别为:82.21,93.70,12.10,14.30,1.93,1.37,0.72和1.99×10-6mol·L-1。结论 Sf9细胞表达的m3AChR-G11α融合蛋白具有m受体配体结合的特性及两组分间偶联的功能,m3AChR-G11α融合蛋白中的G11亚基对GDP的亲和性取决于m受体配体的性质,分析GDP的亲和性变化有利于筛选和鉴别m3受体亚型特异性配体。
- 白立川郭政东张雪薇孙科姜爱民
- 关键词：M受体G蛋白融合蛋白激动剂拮抗剂
