国家自然科学基金(30400180)
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
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- 血管紧张素Ⅱ2型受体在体可调控表达对大鼠颈动脉新生内膜增生的影响
- 2011年
- 目的血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R)基因转染可减轻血管损伤后新生内膜的过度增生,但如何主动调控转入体内基因的表达有着重要的临床意义。文中以四环素可调控系统下的AT2R基因转染的骨髓间充质干细胞(m esenchymal stem cell,MSC)为载体,探讨AT2R在体可调控表达及对大鼠颈动脉新生内膜的影响。方法大鼠颈动脉球囊损伤后,分别将PBS液、常规培养的大鼠MSC、四环素可调控系统下的AT2R基因转染的MSC局部灌注,后者又分为给予强力霉素(deoxycyline,Dox)及不给予强力霉素组。于术后14、28 d取材,分析新生内膜增生情况,免疫组化法及逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测AT2R在大鼠颈动脉壁中的表达变化。结果导入转染AT2R-MSC+Dox组大鼠颈动脉新生内膜面积较其他各损伤组显著降低(P<0.01),同时AT2R的表达显著增高;MSC对血管内膜增生无明显影响。结论四环素可调控AT2R基因在体可调控表达系统受到Dox的有效控制,可显著抑制动脉损伤后新生内膜的增生。
- 苗莉罗先润景涛张辉刘安丰娄云霄何国祥
- 关键词：新生内膜强力霉素
- 体外诱导骨髓间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)与血管平滑肌细胞直接接触培养后向血管成分细胞的分化及超微结构改变。方法将MSCs(DAPI标记)与血管平滑肌细胞按一定的比例混合培养后,用平滑肌细胞抗体SM-α-actin、calponin免疫荧光染色,并用透射电镜观察MSCs的超微结构改变,检测MSCs的分化情况。结果MSCs与血管平滑肌细胞混合培养5d后免疫荧光染色,可见胞核蓝染的MSCs与抗SM-α-actin、抗calponin(绿色)的双标细胞出现;而单独培养的MSCs抗SM-α-actin阳性,抗calponin为阴性。并且混合培养后的MSCs电镜下可见肌丝状结构。结论血管平滑肌细胞直接接触可以诱导MSCs向血管平滑肌细胞分化。
- 苗莉何国祥景涛刘建平蒋清安江明宏
- 关键词：骨髓间充质干细胞血管平滑肌细胞共培养分化
- 血管紧张素Ⅱ2型受体基因可调控体外培养的血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2的表达被引量：4
- 2007年
- 目的利用强力霉素—开放可调控哺乳动物表达系统,对体外培养血管平滑肌细胞的血管紧张素Ⅱ2型受体表达进行有效调控,在此基础上对基质金属蛋白酶2的表达受血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂的影响进行研究。方法建立强力霉素可调控表达血管紧张素Ⅱ2型受体基因的双重稳定大鼠血管平滑肌细胞。观察该血管平滑肌细胞中血管紧张素Ⅱ2型受体受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ及其1型、2型其受体拮抗剂干预上述细胞后基质金属蛋白酶2的表达情况变化。结果强力霉素—开放可调控哺乳动物表达系统可成功介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因在原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞的表达,该表达受到强力霉素给予/去除的紧密调控;强力霉素干预可在48h内迅速诱导该血管平滑肌细胞表达血管紧张素Ⅱ2型受体,该表达在强力霉素干预后72h进一步增强(P<0.01)。血管紧张素Ⅱ2型受体基因的可调控表达抑制由于血管紧张素Ⅱ干预后引起的基质金属蛋白酶2表达的增强(P<0.01)。这一作用被血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂进一步增强(P<0.01);而被加入2型受体拮抗剂干预取消;同时给予上述两种拮抗剂时基质金属蛋白酶2的表达与基础状态时的情况一致。结论血管紧张素Ⅱ干预增强基质金属蛋白酶2的表达,该作用是通过血管紧张素Ⅱ1型受体介导的;经强力霉素诱导表达血管紧张素Ⅱ2型受体基因可以明显抑制这一生物学作用,说明血管紧张素Ⅱ2型受体基因经诱导后表达可以有效调控血管平滑肌细胞细胞外基质合成和降解。
- 景涛何国祥王海东刘建平苗莉冉擘力
- 关键词：病理学与病理生理学血管平滑肌细胞强力霉素基质金属蛋白酶
- 可调控基因表达系统与心血管疾病
- 2008年
- 目的基因的有效调控表达在功能失调性疾病的基因治疗中具有重要意义。利用可调控表达系统可以使目的基因仅在特定范围内表达或仅表达一定的剂量或时间,现对近年出现的各种可调控表达系统及其在心血管系统疾病研究中的可能应用作一综述。
- 景涛王海东何国祥
- 关键词：心血管疾病
- AT2R基因可调控表达对体外培养VSMC纤维黏连蛋白表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的利用Dox-on可调控哺乳动物表达系统,建立起了受四环素类似物Doxycycline(Dox)紧密调控、表达AT2R基因的双重稳定血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC),在此基础上对纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)的表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究。方法建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞,观察该VSMC细胞中AT2R受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及其1型、2型受体拮抗剂干预上述细胞后FN的mRNA及蛋白表达情况变化。结果Dox-on可调控哺乳动物表达系统可成功介导AT2R基因在原代培养大鼠主动脉VSMC的表达,该表达受到Dox给予/去除的紧密调控;Dox干预可在48h内迅速诱导该VSMC细胞表达AT2R,AT2R表达在Dox干预后72h进一步增强(P<0.01)。AT2R基因的可调控表达抑制由于AngⅡ干预VSMC后引起FN表达的增强(P<0.01)。这一作用被AT1R拮抗剂CV-11974进一步增强(P<0.01);而被加入AT2R拮抗剂干预而取消;同时给予AT1R拮抗剂和AT2R拮抗剂时FN的表达与基础状态时的情况一致。结论AngⅡ干预增强FN的表达,该作用是通过AT1R介导的;经Dox诱导表达AT2R基因可以明显抑制这一生物学作用,说明在这一生物学效应上,AT2R具有与AT1R相拮抗的生物学功能。
- 景涛何国祥刘建平王海东苗莉冉擘力
- 关键词：受体平滑肌细胞纤维黏连蛋白
- 强力霉素可调控的双重稳定表达AT2R的骨髓间充质干细胞的建立被引量：3
- 2008年
- 目的构建四环素类抗生素可调控的双重稳定表达AT2R的骨髓间充质干细胞。方法将四环素可调控系统（Tetracycline-on，Tet-on）的4种质粒用脂质体转染法连续两个回合转染体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞并抗性筛选，分别采用发光计检测不同细胞克隆荧光素酶活性改变以及RT-PCR法检测AT2R目的基因表达情况，根据各个细胞克隆受强力霉素调控表达的程度，筛选出高诱导、低背景表达目的基因AT2R的骨髓间充质细胞系，并检测在不同浓度（0～10^4ng／ml）强力霉素干预下以及转染后不同时间（0～8周）目的基因的蛋白表达情况。结果连续两个回合的转染及筛选后获得的引入Tet-on系统的细胞系，高诱导低背景表达AT2R，在强力霉素诱导下48h内可以使AT2R表达显著增加，强力霉素在一定浓度范围内可以诱导AT2R的表达呈剂量依赖性的增加，且至少在8周内保持稳定。结论构建的含四环素调控系统的骨髓间充质干细胞系诱导活性可靠，使外源AT2R基因的表达处于有效的主动控制下。
- 苗莉景涛何国祥蒋清安刘建平冉擘力王海东
- 关键词：AT2R间充质干细胞强力霉素
- 条件表达AT2R基因对体外培养血管平滑肌细胞骨桥蛋白mRNA表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的利用Dox-on可调控哺乳动物表达系统将AT2R基因引入体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC),并经2次抗生素的筛选建立起了受四环素类似物Doxycycline(Dox)紧密调控、表达AT2R基因的双重稳定VSMC细胞系,在此基础上对骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的mRNA表达受AngⅡ及其受体拮抗剂的影响进行研究。了解其在再狭窄防治中的意义。方法本研究通过常规分子生物学方法,建立Dox可调控表达AT2R基因的双重稳定大鼠VSMC细胞系。将该VSMC细胞系随机分为未转染对照组、转染组及AngⅡ、Dox、CV-11974、PD123319分别或同时干预组共8组。应用免疫印迹方法、RT-PCR技术,观察该VSMC细胞系中AT2R受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)及其1型、2型其受体拮抗剂干预上述细胞后OPN的mRNA表达情况变化。结果Dox-on可调控哺乳动物表达系统可成功介导AT2R基因在原代培养大鼠主动脉VSMC的表达,该表达受到Dox给予/去除的紧密调控;Dox干预可在48h内迅速诱导该VSMC细胞系表达AT2R,AT2R表达在Dox干预后72h进一步增强,差异有统计学意义(P<0.01)。AT2R基因的可调控表达抑制由于AngⅡ干预VSMC后引起的OPN表达的增强(P<0.01)。这一作用被AT1R拮抗剂CV-11974进一步增强(P<0.01);而被加入AT2R拮抗剂干预而取消;同时给予AT1R拮抗剂和AT2R拮抗剂时OPN的表达与基础状态时的情况一致。结论AngⅡ干预增强OPN的表达,该作用是通过AT1R介导的;经Dox诱导表达AT2R基因可以明显抑制这一生物学作用,说明在这一生物学效应上,AT2R具有与AT1R相拮抗的生物学功能。AT2R基因经诱导后可以通过调节OPN表达,进而可能对VSMC迁移、增殖和细胞外基质形成进行有效调控。
- 景涛王海东何国祥刘建平苗莉冉擘力
- 关键词：血管紧张素受体血管平滑肌四环素骨桥蛋白
- AT2R基因在体可调控表达对大鼠血管损伤后MMP-2表达的影响
- 2013年
- 目的研究间充质干细胞（MSCs）移植实现血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）基因在体可调控表达对大鼠颈动脉损伤后新生内膜中基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。方法采用常规分子生物学方法连续两个回合转染体外培养的MSCs，获得受到强力霉素（Dox）调控的低背景、高诱导表达AT2R基因的双重稳定MSCs系；建立大鼠颈动脉球囊损伤动物模型，将双重稳定MSCs系种植于动脉损伤局部，通过尾静脉注射Dox，分别于术后14、28d行病理切片，采用免疫印迹、免疫组化法及RT-PCR等技术检测AT2R基因在新生内膜中的表达及其对MMP．2表达的影响。结果成功建立了低背景、高诱导表达AT2R基因的双重稳定MSCs系。该MSCs系受到Dox给予／去除的紧密调控，诱导后48h即可使AT2R显著表达，在Dox干预72h后AT2R表达进一步增强；这种表达的可诱导性至少在8周内维持稳定。免疫印迹、免疫组化及RT-PCR检测显示：球囊损伤大鼠血管后14d及28d，Dox组新生内膜中AT2R的表达显著高于对照组、MSC组、MSC转染组（P〈0．01）；同时，Dox组新生内膜中MMP．2阳性染色较对照组、MSC组和MSC转染组显著减弱（P〈0．01）。结论血管损伤局部导人双重稳定MSCs系后AT2R表达受到Dox的良好调控。Dox诱导AT2R表达后，新生内膜中MMP-2表达减少，可能是MSCs细胞移植实现AT2R基因在体可调控表达有效抑制新生内膜增生的机制之一。
- 景涛刘建平苗莉冯健冉擘力王海东何国祥
- 关键词：间充质干细胞新生内膜增生基质金属蛋白酶
- 骨髓间充质干细胞与血管平滑肌细胞直接接触培养后的分化及超微结构改变被引量：7
- 2007年
- 目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)与血管平滑肌细胞直接接触培养后向血管成分细胞的分化及超微结构改变。方法:将MSC(DAPI标记)与血管平滑肌细胞按一定的比例混合培养后,用平滑肌细胞抗体SM-α-actin、calponin及内皮细胞抗体CD31免疫荧光染色,并用透射电镜观察MSC的超微结构改变,检测MSC的分化情况。结果:MSC与血管平滑肌细胞混合培养5d后免疫荧光染色,可见细胞核蓝染的MSC与抗SM-α-actin(绿色),抗calponin、CD31(红色)的双标细胞出现;而单独培养的MSC抗SM-α-actin阳性,抗calponin、CD31均为阴性。此外,混合培养后的MSC电镜下可见肌丝状结构。结论:与血管平滑肌细胞直接接触可以诱导MSC向血管成分细胞分化。
- 苗莉何国祥景涛刘建平蒋清安江明宏
- 关键词：骨髓间充质干细胞血管平滑肌细胞共培养分化超微结构
- 间充质干细胞移植实现AT2R基因在体可调控表达在再狭窄形成的作用及机制被引量：2
- 2010年
- 目的研究间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)细胞移植实现AT2R基因在体可调控表达在大鼠颈动脉损伤后新生内膜形成中的作用及机制。方法采用常规分子生物学方法连续两个回合转染体外培养的MSCs,获得受到强力霉素(Dox)调控的低背景、高诱导表达AT2R基因的双重稳定MSCs系;建立大鼠颈动脉球囊损伤动物模型,将双重稳定MSCs系种植于动脉损伤局部,通过尾静脉注射强力霉素,分别于术后14天、28天行病理切片,采用免疫组化法及RT-PCR等技术检测AT2R基因在新生内膜中的表达及其对新生内膜形成(intima/media ratio,I/M)及纤维连接蛋白(FN)的影响。结果成功建立低背景、高诱导表达AT2R基因的双重稳定MSCs系。该MSCs系受到Dox给予/去除的紧密调控,诱导后48h就可使AT2R明显表达,在Dox干预72h后AT2R表达进一步增强;这种表达的可诱导性至少在8周内维持稳定。免疫组织化学及RT-PCR检测显示:球囊损伤大鼠血管后14天及28天,Dox组新生内膜中AT2R的表达显著高于对照组、MSC组、MSC转染组(mRNAF=335.746;蛋白F=51.277,P<0.01),而其内膜/中膜面积比(I/M)较其他各手术组显著降低(F=72.417,P<0.01)。同时Dox组新生内膜层及中膜层中FN阳性染色较对照组、MSC组和MSC转染组显著减弱。结论血管损伤局部导入双重稳定MSCs系后AT2R表达受到Dox的良好调控,可有效抑制球囊损伤后大鼠颈动脉新生内膜增生。同时Dox诱导AT2R表达后,新生内膜中FN表达减少,可能是MSCs细胞移植实现AT2R基因在体可调控表达有效抑制新生内膜增生的机制之一。
- 景涛何国祥苗莉刘建平王海东冉擘力
- 关键词：基因表达调控间质干细胞
