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河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A180850)

作品数:5 被引量:4H指数:1
相关作者:林俊堂栗炳南李卫东丰慧根原志庆更多>>
相关机构:新乡医学院更多>>
发文基金:河南省教育厅科学技术研究重点项目河南省科技攻关计划河南省省院科技合作项目更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 5篇真核
  • 4篇位点
  • 4篇内部核糖体进...
  • 4篇核糖
  • 4篇核糖体
  • 3篇神经营养
  • 3篇神经营养素
  • 3篇神经营养素3
  • 2篇血管
  • 2篇血管内皮
  • 2篇血管内皮生长...
  • 2篇血管内皮生长...
  • 2篇营养因子
  • 2篇源性
  • 2篇源性神经营养...
  • 2篇真核表达
  • 2篇真核表达载体
  • 2篇神经营养因子
  • 2篇内皮
  • 2篇内皮生长因子

机构

  • 5篇新乡医学院

作者

  • 5篇丰慧根
  • 5篇李卫东
  • 5篇栗炳南
  • 5篇林俊堂
  • 2篇原志庆

传媒

  • 3篇中国组织工程...
  • 1篇生命科学研究
  • 1篇现代生物医学...

年份

  • 4篇2014
  • 1篇2013
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
pIRES_2-BDNF-VEGF_(165)真核表达载体的构建与鉴定(英文)
2013年
背景:人脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor165,VEGF165)在细胞分化过程中有重要作用。病毒载体临床应用存在安全隐患,利用真核表达载体表达蛋白为解决安全性问题提供了一种方法。目的:构建双基因共表达载体pIRES2-BDNF-VEGF165并对其进行鉴定。方法:采用PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取人脑源性神经营养因子基因,然后将人脑源性神经营养因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建为pIRES2-BDNF-EGFP。人血管内皮生长因子165 cDNA片段是通过双PCR的方法从pIRES2-VEGF165-EGFP质粒中获取,接着将血管内皮生长因子165 cDNA片段以替换EGFP的方式插入pIRES2-BDNF-EGFP中,最后构建成为含有即内部核糖体进入位点的pIRES2-BDNF-VEGF165双基因共表达载体。通过双酶切和DNA测序方法对其鉴定,将重组的双基因共表达载体感染HEK293细胞,利用RT-PCR与Western-blot方法检测双基因的表达。结果与结论:DNA测序显示,提取的人脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子165均与基因库报道序列一致,片段长度分别为744 bp和576 bp。构建的pIRES2-BDNF-VEGF165双基因共表达载体经Eco RⅠ/Bam HⅠ切出BDNF条带,经BDNF/NotⅠ双酶切后可见IRESVEGF165基因片段,经Eco RⅠ/NotⅠ双酶切后可见BDNF-IRES-VEGF165基因片段。RT-PCR与Western-blot方法检测显示,此载体转染后,HEK293细胞均能表达人脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白。结果证实,实验成功构建了人脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体。
栗炳南李卫东林俊堂丰慧根
关键词:血管内皮生长因子165内部核糖体进入位点
pIRES2-NGF-NT-3真核表达载体的构建与鉴定被引量:2
2014年
构建双基因共表达载体pIRES2-NGF-NT-3并检测其在HEK293细胞中的表达。人神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)是采用直接PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取,将人神经生长因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-NGF-EGFP。神经营养素3 cDNA片段通过替换绿色荧光蛋白基因(EGFP)的方式插入到pIRES2-NGFEGFP中构建成为pIRES2-NGF-NT-3双基因共表达载体,将pIRES2-NGF-NT-3用脂质体转染HEK293细胞并采用RT-PCR与Western-blot的方法检测其表达。人神经生长因子和神经营养素3被克隆,通过测序和酶切鉴定的得知与基因库报道序列一致。pIRES2-NGF-NT-3转染HEK293细胞后双基因在mRNA和蛋白水平均得到了表达。人神经生长因子和神经营养素3双基因真核表达载体成功构建,它提供了一个新的表达系统,为进一步研究双基因的功能奠定了基础。
栗炳南李卫东林俊堂丰慧根原志庆
关键词:人神经生长因子神经营养素3内部核糖体进入位点
人脑源性神经营养因子和神经营养素3真核双表达载体的构建与鉴定(英文)被引量:1
2014年
背景:脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophic factor,BDNF)和神经营养素3(Neurotrophines-3,NT-3)在细胞分化过程中有重要作用。病毒载体临床应用存在安全隐患,利用真核表达载体表达蛋白为解决安全性问题提供了一种方法。目的:构建双基因共表达载体pIRES2-BDNF-NT-3并对其进行鉴定。方法:BDNF和NT-3基因核心序列是通过直接PCR的方法从外周血单个核细胞的基因组DNA中获取。然后将BDNF的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建pIRES2-BDNF-EGFP载体,随后将NT-3 cDNA片段以替换EGFP的方式插入pIRES2-BDNF-EGFP中,最后构建成为含有内部核糖体进入位点(IRES)的pIRES2-BDNF-NT-3双基因共表达载体。实验通过双酶切和DNA测序方法对其鉴定,将重组的双基因共表达载体感染HEK293细胞,利用RT-PCR与Western-blot方法检测双基因的表达。结果与结论:DNA测序显示,提取的BDNF和NT-3均与基因库报道序列一致。构建的pIRES2-BDNF-NT-3双基因共表达载体经Eco RⅠ/Bam HⅠ切出BDNF条带,经Bam HⅠ/NotⅠ双酶切后切出IRES-NT-3片段,经Eco RⅠ/NotⅠ双酶切后切出BDNF-IRES-NT-3片段。RT-PCR与Western-blot方法检测显示,此载体转染后的HEK293细胞均能表达BDNF和NT-3 mRNA和蛋白。结果证实,实验成功采用IRES序列构建了能分别表达的BDNF和NT-3双基因真核表达载体。
栗炳南李卫东林俊堂丰慧根
关键词:脑源性神经营养因子神经营养素3转染
pIRES2-GDNF-NT-3真核表达载体的构建与鉴定(英文)
2014年
目的:采用一种简便和高效的方法构建双基因共表达载体pIRES2-GDNF-NT-3。方法:人胶质细胞源性神经营养因子和神经营养素3是采用PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取,将人胶质细胞源性神经营养因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-GDNF-EGFP.神经营养素3 cDNA片段通过替换EGFP的方式插入到pIRES2-GDNF-EGFP中构建成为pIRES2-GDNF-NT-3双基因共表达载体。结果:人胶质细胞源性神经营养因子和神经营养素3被克隆,通过测序和酶切鉴定的得知与基因库报道序列一致。结论:人神经生长因子和神经营养素3双基因真核表达载体成功构建,它提供了一个新的表达系统,为进一步研究双基因的功能奠定了基础。
栗炳南李卫东林俊堂丰慧根
关键词:胶质细胞源性神经营养因子神经营养素3内部核糖体进入位点
人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体的构建与鉴定被引量:1
2014年
背景:人白血病抑制因子(LIF)和血管内皮生长因子165(VEGF165)对脊髓损伤后神经元存活有重要作用。病毒载体临床应用存在安全隐患,利用真核表达载体表达蛋白为解决安全性问题提供了一种方法。目标:构建双基因共表达载体pIRES2-LIF-VEGF165并对其进行鉴定。方法:是采用直接PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取人白血病抑制因子基因,然后将人白血病抑制因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-LIF-EGFP。人血管内皮生长因子165 cDNA片段是通过双PCR的方法从pIRES2-VEGF165-EGFP质粒中获取,接着将血管内皮生长因子165 cDNA片段以替换EGFP的方式插入pIRES2-LIF-EGFP中,最后构建成为含有IRES(即内部核糖体进入位点)的pIRES2-LIF-VEGF165双基因共表达载体。通过双酶切和DNA测序方法对其鉴定,将重组的双基因共表达载体感染HEK293细胞,利用RT-PCR与Western-blot方法检测双基因的表达。结果与结论:DNA测序显示,提取的人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165均与基因库报道序列一致,片段大小分别为609 bp和576 bp。构建的pIRES2-LIF-VEGF165双基因共表达载体经EcoRI/BamHI切出LIF条带,经BamHI/NotI双酶切后切出IRES-VEGF165片段,经EcoRI/NotI双酶切后切出LIF-IRES-VEGF165片段。RT-PCR与Western-blot方法检测显示,此载体转染后,HEK293细胞均能表达人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白。结果证实,实验成功构建了人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体。
栗炳南李卫东林俊堂丰慧根原志庆
关键词:白血病抑制因子血管内皮生长因子165内部核糖体进入位点
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