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中国医科大学转化医学研究院: 作品数：27 被引量：54H指数：4; 相关作者：李小曼孙威羿菲白宁张文宇更多>>; 相关机构：湖州师范学院医学院吉林大学药学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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活体小鼠脂肪来源干细胞的获取与鉴定被引量：2: 2021年; 目的探究一种从活体小鼠身上提取脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的实验方法。方法自2020年3月至2020年7月,中国医科大学附属第一医院整形外科麻醉C57小鼠后从其腹膜外及腹股沟处分离脂肪组织,采用胶原酶消化,获得ADSCs。传至3代后,使用流式细胞仪分别检测其表面标志物表达情况,并对其进行诱导分化,验证其成脂肪,成骨分化的能力。结果从小鼠腹膜外及腹股沟部位可获得大量脂肪组织,且小鼠麻醉苏醒后生命体征平稳。ADSCs提取成功,14 d后观察小鼠生命体征平稳。流式细胞仪检测提示其CD29、CD44阳性,CD34阴性,成功对细胞进行成脂及成骨诱导,表明提取的ADSCs具有多向分化能力。结论本研究证实,可以从活体小鼠获取纯度较高的ADSCs且具有成脂肪、成骨分化能力。; 董雨晴吕梦竹曹流郭澍; 关键词：脂肪来源干细胞 C57小鼠活体

高通量筛选酸敏感离子通道1a抑制剂研究: 2016年; 目的建立体外稳定过表达酸敏感离子通道1a(ASIC1a)的Fisher大鼠甲状腺上皮细胞(FRT细胞),采用Ca^(2+)敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测〔乳酸脱氢酶(LDH)释放法〕测定ASIC1a活性,探讨高通量筛选ASIC1a抑制剂的可行性。方法2014年1月—2016年2月,利用分子生物学方法,构建ASIC1a过表达载体pc DNA3.1/myc-His-m ASIC1a,通过细胞转染技术建立了稳定过表达ASIC1a的Fisher大鼠FRT细胞。将细胞分成两组,对照组(FRT细胞)和实验组(稳定过表达ASIC1a的FRT细胞),并分别未负载和负载Ca^(2+)敏感荧光染料Fura-2/AM,采用酶标检测仪测定双波长(340 nm和380 nm)的值,计算F340/F380。对照组和实验组细胞经不同p H值酸液(p H值7.5、7.0、6.5、6.0、5.5)刺激后,采用酶标检测仪测定450 nm波长处LDH释放量。结果对照组与实验组未负载Fura-2/AM细胞F340/F380比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较对照组升高(P<0.05);对照组和实验组负载Fura-2/AM细胞F340/F380较未负载Fura-2/AM细胞升高(P<0.05)。p H值6.5、6.0、5.5时,实验组细胞LDH释放量大于对照组(P<0.05);对照组和实验组细胞不同p H值时LDH释放量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功建立稳定过表达ASIC1a的FRT细胞,Ca^(2+)敏感荧光染料Fura-2/AM和细胞毒性检测(LDH释放法)两种方法测定ASIC1a活性,使高通量筛选ASIC1a抑制剂成为可能,为发现高选择性和高活性的天然小分子ASIC1a抑制剂奠定了基础。; 羿菲李小曼白宁孙威姜波张莹宋晓宇; 关键词：上皮细胞乳酸脱氢酶

槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷对阿霉素致体外心肌细胞损伤的保护作用被引量：1: 2017年; 目的观察槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷对阿霉素(ADR)致心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法实验选用出生24 h内的Wistar大鼠6只,雌雄不限,分离心肌细胞。采用纯化培养的心肌细胞建立ADR损伤模型,实验分为6组:空白对照组(正常细胞培养,加入等数量的MEM培养基,不加入任何药物)、二甲基亚砜(DMSO)对照组(加入含DMSO浓度为5μg/ml的MEM培养液)、ADR损伤组(加AOR浓度为1μg/ml的MEM培养液)、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷保护组(分别为低剂量12.5μg/ml、中剂量25μg/ml、高剂量50μg/ml槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷保护组)。分组给药后孵育24 h。显微镜下观察心肌细胞形态,MTT法测定心肌细胞存活率,应用试剂盒分别检测样品中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果与ADR损伤组比较,低、中、高剂量保护组均可使心肌细胞存活率增高(P<0.01),LOH活性降低(P<0.01或P<0.05),NO活性降低(P<0.01),SOD活性增强(P<0.01)。结论 12.5~50μg/ml槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷均能减轻ADR对心肌细胞损伤,具有明显的心肌细胞保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。; 李希宁吴璇周余来杨锦竹姜波; 关键词：阿霉素心肌细胞损伤

染色体结构维持蛋白SMC1对细胞多极的影响被引量：1: 2019年; 目的研究染色体结构维持蛋白SMC1不同表达水平对细胞多极形成的影响。方法分别采用分子生物学和慢病毒包装的方法建立稳定过表达SMC1和稳定沉默SMC1 (shSMC1)-HCT116细胞系,而后用Western Blot的方法检测稳定细胞株的构建是否成功,最后应用免疫荧光方法检测过表达与低表达SMC1两种情况对细胞多极分裂的影响。结果 Western blot及免疫荧光结果显示HCT116细胞在过表达SMC1与低表达SMC1两种情况与正常HCT116细胞相比均显著增加了细胞多极的比例且有统计学意义(P<0.05)。结论 SMC1与细胞的多极行为密切相关,对基因组稳定性的维持发挥了重要作用。; 王志军李子威王卓羿菲曹流

不同的G四链体结构对DNAzyme活性的影响被引量：3: 2016年; 富含鸟嘌呤的DNA序列在金属离子(通常是钠、钾离子)存在的条件下,可以形成稳定的G-四链体(G-quadruplex)。该G-四链体能够结合hemin(氯高铁血红素)形成具有过氧化物酶的活性的G四链体-hemin复合物DNAzyme。将这一原理联合滚环扩增技术可以对核酸进行可视化的检测。本研究旨在探索G-四链体-hemin复合物中,G-四链体结构以及两个G-四链体之间的链接长度与DNAzyme过氧化物酶活性之间的关系。实验分别选取了平行、反平行和混合结构的G-四链体,通过热差异光谱、紫外光谱、圆二色光谱对结构进行分析,不断加长链接序列并测定3种结构形成的DNAzyme活性,发现正平行结构的G-四链体具有更高的DNAzyme活性和更明显的可视化效果。综上所述,平行G-四链体结构可以用来满足裸眼可视化检测的需求,为无需复杂仪器的核酸检测奠定了方法基础。; 卢宇关一夫; 关键词：DNAZYME

自噬在多板层小体形成中的作用: 2016年; 自噬是一种存在于所有真核细胞中进化上高度保守的溶酶体依赖性物质降解过程,通过处理与回收细胞内异常的蛋白、核酸、糖原、细胞器等"废旧物",以维持细胞内稳态。多板层小体(MLBs)是Ⅱ型肺泡细胞所特有的一种细胞器,主要参与肺泡表面活性物质的储存与分泌,对肺结构和功能的维持十分重要。至今为止,MLBs的来源仍是未解之谜,但在自噬研究过程中发现自噬与MLBs的形成密切相关。本文就二者的关系作一综述。; 吴昌静李斯慧李小曼; 关键词：板层小体自噬溶酶体酶物质降解过磷酸化

组蛋白H2A/H2B泛素化参与基因转录调控及肿瘤发生发展被引量：2: 2016年; 组蛋白H2A和H2B泛素化由一系列酶类催化介导,在基因转录调控当中存在重要的作用。H2A泛素化及相关酶类可能主要通过调节RNA聚合酶Ⅱ的延伸参与基因转录抑制,H2B泛素化及相关酶类对基因转录调控既存在抑制作用又具有促进作用,而且其在肿瘤发生发展中具有重要的调节作用。; 周婷婷董想宋晓宇; 关键词：泛素化肿瘤抑制作用基因转录调控组蛋白转录延伸

细胞自噬在乳腺癌中研究进展被引量：1: 2016年; 细胞自噬(Autophagy)的功能异常可引起许多疾病,恶性肿瘤是最早被发现与自噬有关的疾病之一。自噬在乳腺癌形成早期起到抑制作用,延迟细胞凋亡,而自噬缺陷会激活乳腺肿瘤中的DNA损伤反应,促进基因扩增,并协同凋亡缺陷加速乳腺肿瘤生长。本文将从自噬与乳腺癌的关系、在乳腺癌中beclin1基因的缺失或下调机制、利用自噬治疗不同病理分型乳腺癌的策略等方面进行综述。; 刘汀李小曼白宁关奕; 关键词：乳腺癌细胞细胞自噬乳腺肿瘤细胞凋亡基因扩增人乳腺癌

稳定过表达人源SAMHD1基因细胞株的建立及其抗病毒活性的研究被引量：1: 2019年; 目的建立慢病毒介导的稳定过表达人源SAMHD1基因的结肠癌细胞株,观察SAMHD1对细胞抗1型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染能力的影响。方法利用pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP慢病毒载体新构建了p CDH-EF1-MCS-SAMHD1-T2A-GFP重组质粒,测序鉴定成功后,将重组质粒和慢病毒包装质粒共转染293T细胞,收集病毒液,浓缩后感染人结肠癌细胞,构建过表达细胞株。利用HSV-1感染过表达细胞株并与对照组比较,通过Western blotting和免疫荧光检测病毒感染效率。结果基因测序结果显示成功构建了重组质粒;Western blotting检测稳定过表达人源SAMHD1结肠癌细胞株构建成功;Western blotting和免疫荧光结果显示过表达人源SAMHD1的细胞株能够有效抑制HSV-1病毒感染和复制。结论成功构建慢病毒介导的稳定过表达人源SAMHD1基因细胞株,过表达人源SAMHD1的细胞株能有效抑制HSV-1病毒复制,为进一步深入研究SAMHD1蛋白生物学功能提供保障。; 武晋英张洲李子威王昊然操孙润李宇恒宋晓宇曹流; 关键词：慢病毒 1型单纯疱疹病毒

NMDA受体亚单位NR2D与MOCA相互作用的鉴定: 2016年; 目的:寻找N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚单位NR2D的结合蛋白,为探讨NR2D在视网膜兴奋性毒性损伤中的作用提供依据。方法:构建了包含NR2D细胞内C末端的cDNA片段为诱饵质粒,应用酵母双杂交技术筛选小鼠脑cDNA文库,并用免疫共沉淀实验进一步验证NR2D与其结合蛋白之间的相互作用,免疫荧光显微镜观察NR2D和目的蛋白在视网膜中的共表达。结果:酵母双杂交筛选到细胞黏附修饰因子(modifier of cell adhesion,MOCA)为NR2D可能的相互作用蛋白,两者在视网膜有共定位。结论:MOCA能特异结合谷氨酸受体NR2D,这为进一步研究谷氨酸的兴奋性毒性参与视网膜退行性变的机制奠定了实验基础。; 白宁羿菲刘汀李小曼; 关键词：NMDA受体酵母双杂交技术蛋白相互作用

中国医科大学转化医学研究院

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