深圳市宝舜泰生物医药股份有限公司 作品数:16 被引量:28 H指数:3 相关机构: 深圳出入境检验检疫局 华南农业大学 湖南农业大学 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 国家级星火计划 广西壮族自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
一种鸡蛋黄复合饲料添加剂及其制备方法 本发明公开了一种蛋黄复合饲料添加剂及其制备方法,所述饲料添加剂由包含蛋黄液、微晶纤维素和低聚木糖的原料混合物制备而成,其制备方法简单,成本低,使用方便,免疫活性高。 祁振强 卢超水疱性口炎病毒免提取核酸荧光定量PCR鉴别检测方法的建立 被引量:3 2018年 为建立可快速鉴别水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)免提核酸的荧光定量PCR检测方法,根据VSV-IND和VSV-NJ两种血清型相对保守的L基因序列,设计2对特异性引物和2条探针,探针用不同的荧光基团进行标记。经过对各反应条件的优化,建立了直接从样品中鉴别VSV-IND和VSV-NJ的荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行分析。结果显示,该直扩荧光定量PCR能准确鉴别VSV-IND和VSV-NJ,两者没有交叉反应现象,对其他几种相似病原的灭活抗原,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪水疱病病毒(SVDV)、蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等检测均呈阴性。对10倍系列稀释的水疱性口炎灭活病毒液的检测敏感性可达10-5,与传统的荧光定量PCR的检测敏感性相当。该方法无需提取核酸,可在2h内完成对样品的检测,结果准确、快速、灵敏,为印第安纳型和新泽西型水疱性口炎病毒的特异性鉴别提供了一种切实可行的方法。 张彩虹 林彦星 杨俊兴 曹琛福 吕建强 黄超华 祁振强 林庆燕 花群义关键词:水疱性口炎病毒 抗幽门螺旋杆菌FlaA蛋白抗体IgY、其制备方法及应用 本发明公开了一种抗幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)FlaA蛋白抗体IgY、其制备方法及应用。所述IgY是通过使用所述FlaA蛋白作为抗原免疫产蛋禽类,并从其卵的卵黄中提取的,能够与所述FlaA蛋白特... 彭姣 卢超 祁振强文献传递 幽门螺杆菌菌毛蛋白FLaA IgY的制备及体外抑菌实验 被引量:1 2014年 目的:制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)菌毛蛋白FlaA卵黄免疫球蛋白(yolk immunoglobulin,IgY),并进行体外抑菌实验,为治疗H.pylori口服药物的研发奠定基础.方法:采用原核表达制备的FlaA蛋白,将重组FlaA菌毛蛋白免疫蛋鸡获取FlaA IgY,采用间接ELISA的方法检测FlaA IgY的效价.通过将其与肠道中常见菌群乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌进行抗体抗原结合反应,检测其是否与肠道中其他菌群存在交叉反应.评价0.1、1、5 mg/mL低、中、高3种不同浓度的FlaA IgY的体外抑菌实验效果.结果:纯化后的FlaA蛋白浓度为2.97 mg/mL.经重组FlaA IgY免疫制备IgY在第3次免疫1 wk后效价可达到1∶12800,特异性检测结果显示,FlaA IgY不与肠道中常见菌发生交叉反应,与H.pylori全菌和重组FlaA反应强烈.体外抑菌结果显示,0.1、1、5 mg/mL的FlaA IgY处理后的H.pylori菌液浓度与对照组菌液浓度相比具有显著差异(0.324±0.033,0.078±0.012,0.014±0.003 vs 0.539±0.023,P<0.01),表明低、中、高3组浓度的FlaA IgY均能一定程度的抑制H.pylori的生长.0.1 mg/mL IgY的抑菌作用主要表现在1-6 h之间,6 h后抑菌作用基本丧失.1 mg/mL FlaA IgY处理组的H.pylori在1-24 h之间生长较为缓慢,5 mg/mL FlaA IgY处理组菌液浓度在1-24 h之间基本无变化.108 CFU/mL H.pylori经3组不同浓度FlaA IgY处理24h后,低IgY浓度组菌液浓度与其余2组菌液浓度相比差异显著(0.078±0.012,0.014±0.003 vs 0.324±0.033,P<0.01),5 mg/mL FlaA IgY在24 h内能彻底抑制H.pylori的生长.结论:制备的FlaA IgY效价较高,特异性强,不与肠道常见菌群发生交叉反应.5 mg/mL的FlaA IgY在体外对H.pylori具有很强的抑制作用. 彭姣 卢超 祁振强 张国海关键词:幽门螺杆菌 卵黄抗体 抑菌试验 猪流行性腹泻病毒ELISA检测试剂盒及其制备方法 本发明涉及一种猪流行性腹泻病毒ELISA检测试剂盒及其制备方法。所述猪流行性腹泻病毒ELISA检测试剂盒包括:酶标板、检测抗体和酶标二抗,其中所述酶标板上包被有抗猪流行性腹泻病毒的特异性卵黄抗体,所述检测抗体为抗猪流行性... 祁振强 卢超两种阴离子交换层析填料去除重组全人源抗程序性死亡配体1单克隆抗体宿主蛋白能力及动态载量的比较 被引量:2 2018年 目的比较两种阴离子交换层析填料Capto Q和Eshmuno Q去除重组全人源抗程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)单克隆抗体宿主蛋白(host cell protein,HCP)的能力以及动态载量。方法采用AKTA avant 25层析系统,通过实验设计(design of experiment,Do E)考查上样量、pH和电导率3个工艺参数变量对HCP去除的影响,设计条件为上样量范围40~60 mg IgG/m L gel,pH范围6.6~7.4,电导率范围1~4 ms/cm,阴离子交换层析采用抗体穿透模式。结果在设计的工艺参数范围内,随着pH的增加和电导率的减小,HCP去除效果有上升趋势;随着pH的减小和电导率的增加,动态载量有上升趋势。在最佳操作范围内当pH=7.0,电导率=1 ms/cm时,Capto Q的HCP去除能力为0.01%,载量为45 mg/m L gel;Eshmuno Q的HCP去除能力为0.02%,载量为35 mg/m L gel。结论阴离子交换层析能有效去除PD-L1单抗的HCP,去除率达50倍以上,动态载量Eshmuno Q达35 mg/m L gel,Capto Q达45 mg/m L gel。 肖宏学 徐丁 韦剑龙 韦俊彦 韦世全 苏龙 祁振强关键词:单克隆抗体 宿主蛋白 一种PA-MSHA菌株IgY及其制备方法和应用 本发明涉及一种甘露糖敏感性绿脓杆菌(PA-MSHA)菌株IgY及其制备方法和应用,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:(S1)制备PA-MSHA菌株的抗原;(S2)利用所述PA-MSHA抗原,对产蛋禽类进行注射免疫,检... 祁振强 卢超文献传递 引起猪腹泻的病毒分离鉴定 被引量:8 2014年 为了对近年来引起仔猪腹泻的主要病毒进行分离鉴定,进而为疫苗的研发奠定基础,自2011年开始,从华南地区猪场连续3年检测出多个引起猪腹泻症状的病毒。其中2011年采用MA-104细胞系从临床样品小肠内容物中分离到猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA),临床样品为2种病毒的混合感染。2012年分离到PEDV、PRoVA和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)3种病毒,临床样品为3种病毒混合感染。2013年从临床样品中只分离到PEDV 1种病毒。通过在Vero-76传代细胞系中前3代加入胰酶和猪胰酶,自第4代仅加入胰酶的方法,成功克服了PEDV的细胞毒性,实现了连续传代,并在第8代出现了细胞病变(CPE)。通过采用IgY抗体对PEDV和PRoVA混合感染的MA-104细胞培养液连续中和和传代,成功分离纯化到猪轮状病毒A。对9个猪场的3年猪腹泻病毒性疾病流行病学调查表明,2011年—2013年主要是以PED流行为主。 林庆燕 陈书琨 孙洁 唐金明 陈兵 卢体康 刘建利 廖立珊 曾少灵 祁振强 阮周曦 吕建强 杨俊兴 曹琛福 张彩虹 花群义 秦智锋关键词:猪流行性腹泻病毒 分离纯化 流行病学调查 猪流行性腹泻病毒双抗夹心ELISA的建立 被引量:3 2014年 用猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫蛋鸡后提取抗猪流行性腹泻病毒的特异性卵黄抗体为捕获抗体,鼠抗猪流行性腹泻病毒多克隆抗体为检测抗体,建立了猪流行性腹泻病毒病原检测的双抗夹心ELISA,其最适包被抗体浓度为1:4000(12.35μg/m L),鼠抗猪流行性腹泻病毒的多克隆抗体最佳浓度为1:6000(10.25μg/m L),样品反应时间为30min,酶标抗体工作浓度为1:6000,并以OD450≥0.130作为阳性判断标准。该方法与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒、猪流感病毒、大肠杆菌K88、K99、987P、F41等病原无交叉反应。对经猪流行性腹泻病毒PCR检测的100份粪便样本进行检测表明,8份PCR检测阳性样本中6份为本法阳性;PCR阴性者本法全部阴性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于猪流行性腹泻病毒的快速检测。 雷利 彭姣 祁振强 秦智峰 卢超关键词:猪流行性腹泻病毒 卵黄抗体 共表达K88/987p菌毛产肠毒素性大肠杆菌的分离鉴定及其卵黄抗体的制备 被引量:4 2015年 为制备针对一些大型养猪场产肠毒素性大肠杆菌(enterotrxigenic Escherichia coli,ETEC)分离株的特异性卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY),试验对从这些养殖场分离的ETEC分离株菌毛基因类型进行了PCR鉴定,纯化该分离株的菌毛蛋白免疫蛋鸡制备IgY,对该IgY的效价、特异性和体外抑菌效果进行了检测。结果表明,该分离株具有K88和987p两种菌毛基因,纯化后的分离株菌毛具有较强的免疫原性,经3次免疫后产生的IgY对K88和987p全菌和菌毛的效价可达到1∶64 000,分离株菌毛IgY能特异地与K88和987p反应,与K99、F41无交叉反应,5mg/mL分离株菌毛IgY在体外具有很好的抑菌效果。 彭姣 李职 祁振强 卢超关键词:K88 共表达 卵黄抗体 体外抑菌