浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所
- 作品数：153 被引量：236H指数：7
- 相关作者：朱丽萍郑青亮陈琛张文伶龙晓辉更多>>
- 相关机构：浙江大学生命科学学院浙江大学生命科学学院生物化学研究所中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 家蚕JAB1/CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位被引量：4
- 2009年
- JAB1/CSN5是COP9信号复合体(constitutive photomorphogenic signalosome CSN)的第5个亚基,内嵌的JAMM基序是CSN参与蛋白的泛素化降解途径并调控生物体生长发育过程的异构酶活性位点。在家蚕蛹cDNA文库中筛选到的一条基因序列,其ORF长度为1047 bp,预测编码蛋白含有JAB1/CSN5保守结构域JAB-MPN,因此命名为BmJM。将BmJM基因的ORF插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmJM,于E.coliRosetta菌中进行原核表达,重组蛋白以包涵体形式存在。以纯化后的重组蛋白为抗原免疫大白兔获得BmJM的多克隆抗体,采用RT-PCR、Western blotting方法对BmJM基因在家蚕不同发育时期和组织中的转录及蛋白表达水平进行分析,发现BmJM蛋白在家蚕5龄幼虫的生殖腺表达量最高,而在其他组织中表达量较少,由此初步揭示了JAB1/CSN5在家蚕生长发育过程中的作用。亚细胞定位测定表明BmJM蛋白在细胞质近核区域含量最高,在细胞核中也有分布。
- 许红姚斐盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘立丽沈红丹舒建洪舒特俊陈剑清吴祥甫张耀洲
- 关键词：家蚕基因克隆荧光定量PCR亚细胞定位
- 死亡素在裂殖酵母中表达及工程菌发酵条件的探索
- 在斑腹刺益蝽(Podisus maculiventris)中发现的死亡素由21个氨基酸残基组成(thanatin),根据其一级结构及密码子偏爱性,通过PCR方法人工合成死亡素基因,将所合成的死亡素基因克隆于pMD18T ...
- 吕正兵蒋彩英刘立丽孔祥东张耀洲钱坤文良柱沈子龙
- 关键词：裂殖酵母生物活性
- 文献传递
- 深海嗜压菌水通道蛋白AqpSS9在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中表达被引量：2
- 2011年
- 利用家蚕杆状病毒表达系统合成深海嗜压菌Photobacterium profundum SS9的新型水通道蛋白AqpSS9。首先通过家蚕核型多角体病毒BmNPV的Bac-to-Bac系统构建重组转移载体pFasBac HTB-AqpSS9,将其转化到含穿梭载体Bm-Bacmid的大肠杆菌Bm-DH10Bac中进行转座作用,白斑筛选得到重组穿梭载体Bacmid-AqpSS9。用脂质体介导将Bacmid-AqpSS9转染家蚕BmN细胞,在细胞内包装形成重组的BmNPV病毒rBm AqpSS9。利用SDS-PAGE及Western blot检测重组蛋白AqpSS9在家蚕培养细胞中的表达,结果显示目标蛋白被成功表达。该实验为新型水通道蛋白AqpSS9的进一步应用研究奠定了基础。
- 陈旭陈健黄磊蔡谨吕正兵张耀洲徐志南
- 关键词：SS9
- 病毒感染条件下家蚕ORC的表达变化
- 2010年
- DNA复制原点识别复合体(origin recognition complex,ORC)识别并结合在DNA复制原点上,募集其他相关的复制因子组成复制前复合体(pre-replication complex,pre-RC)。ORC各个独立的亚基还具有非复制相关的功能。利用荧光定量PCR技术监测感染核型多角体病毒(BmNPV)后,家蚕五龄起蚕脂肪体组织中ORC各个亚基的表达的变化。在感染早期,ORC的拷贝数有所下降,随后表达量增加,并出现两个峰值。病毒感染36 h后,ORC各个亚基的表达量均下降。家蚕感染病毒后,脂肪体组织中ORC的表达趋势与病毒DNA复制的趋势相近,推测BmORC参与了病毒DNA的复制。
- 杨慧鹏罗素娟李轶女张志芳沈桂芳张耀洲
- 关键词：家蚕ORC实时荧光定量PCR家蚕核型多角体病毒
- 家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究
- 2009年
- 脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD。经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域,因此将该ORF序列命名为BmPLIN基因。将该基因插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmPLIN,并转化大肠杆菌中进行原核表达得到带有His标签的融合蛋白,表达的融合蛋白以包涵体形式存在。用纯化后的融合蛋白为抗原免疫大白兔获得多克隆抗体,ELISA间接法测定抗体的效价达到1∶12 800以上。通过荧光定量PCR和Western blotting技术对BmPLIN基因及其编码蛋白在家蚕5龄幼虫各个组织器官中的转录、表达水平进行分析的结果是:BmPLIN基因mRNA在家蚕5龄幼虫各组织器官中的转录水平由高到低依次为生殖腺(卵巢和睾丸)、脂肪体、肠、表皮、头部、马氏管、丝腺、气门,在家蚕5龄幼虫的生殖腺(卵巢和睾丸)中有明显的BmPLIN蛋白特异条带。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞实验的结果显示,BmPLIN蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。
- 姚斐许红舒特俊盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘立丽沈红丹舒建洪陈剑清吴祥甫张耀洲
- 关键词：家蚕蛋白纯化亚细胞定位
- 家蚕Mod基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究被引量：1
- 2009年
- 已知多数含BTB/POZ结构域的锌指蛋白对生物体的发育、分化及染色体重组等具有重要的调节作用。从已构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条编码MOD(mdg4)蛋白的基因序列(GenBank登录号:DN237077)。该基因序列的ORF长1 080 bp,编码359个氨基酸残基,蛋白含有BTB保守结构域和FLYWCH保守结构域,与黑腹果蝇、冈比亚按蚊、赤拟谷盗和埃及伊蚊的MOD多序列比对,其同源性不超过40%。表达、纯化带有His标签的家蚕MOD蛋白(BmMOD),并用纯化的融合蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体。实时荧光定量PCR显示BmMod基因mRNA转录水平在家蚕蛾期及5龄幼虫的卵巢最高,推测BmMod基因在家蚕生殖腺发育过程中产生一定作用。利用纯化的BmMOD蛋白多克隆抗体进行Western blotting分析也表明该蛋白在家蚕蛾期及5龄幼虫卵巢中的表达量最高,验证了BmMod在家蚕生殖腺发育中的功能。亚细胞定位结果显示BmMOD蛋白几乎完全定位于家蚕卵巢上皮细胞(BmN)的细胞核中。
- 周秋梅金勇丰张耀洲
- 关键词：家蚕原核表达亚细胞定位
- 家蚕孤雌生殖差异脂蛋白30K lipoprotein precursor基因的克隆与生物信息学分析被引量：5
- 2008年
- 应用二维凝胶电泳（2-DE）技术分离家蚕孤雌生殖蚁蚕总蛋白，并和正常蚁蚕总蛋白进行比较，得到46个可能与家蚕孤雌生殖相关的差异蛋白点。对这些差异蛋白点进行胶内酶解后基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF-TOFMS）分析，经数据库搜索鉴定，确定其中一个差异蛋白点为脂蛋白30Klipoprotein precursor（30KLPP）。通过5′-RACE技术克隆到30KLPP脂蛋白的全长cDNA序列。生物信息学分析显示该差异蛋白基因全长917bp。编码261个氨基酸，理论分子质量为30．013kD，等电点为7．193；结构域和三级结构预测显示该蛋白包含1个Lipoprotein_11结构域和12个β-折叠。预测其信号肽概率为1．000，定位在1～20aa区域，即可能存在信号肽。细胞定位预测显示该蛋白可能分泌到胞外（SP值为0．934）。分析结果有助于进一步研究30KLPP脂蛋白结构与功能的关系。
- 王丹聂作明龙晓辉刘立丽陈健吕正兵陈芳吴祥甫张耀洲
- 关键词：家蚕孤雌生殖LPP
- EF手图像超家族成员——肌钙蛋白C的研究进展被引量：7
- 2007年
- EF手图像超家族蛋白泛指一类含有由螺旋区-泡区-螺旋区构成的EF手图像模体的蛋白。这类蛋白通常都具有金属离子结合能力或者形成二聚体的能力。肌钙蛋白C是一种EF手图像蛋白,它具有钙离子结合能力,可以与肌钙蛋白I、肌钙蛋白T形成复合物调节肌肉收缩。目前,国内外对肌钙蛋白C的研究多数集中在脊椎动物上,而对无脊椎动物的研究较少。主要从EF手图像超家族的特性及其家族成员——肌钙蛋白C的分类、结构及功能等方面进行了阐述,并结合笔者自身的研究方向,简要介绍了家蚕肌钙蛋白C的研究情况及前景。
- 陈剑清张耀洲
- 关键词：肌肉收缩家蚕
- 一个家蚕新基因的克隆与原核表达
- 从家蚕蛹期(青松X皓月)经反转录克隆得到一条全长含696bp的开放阅读框(ORF)的cDNA 序列(基因登录号:DY230615),编码231个氨基酸,blast P分析这段氨基酸序列结果与其它三种功能未知蛋白(蛋白质登...
- 谭爱武张耀洲
- 关键词：家蚕基因
- 文献传递
- 口服家蚕表达的CTB与胰岛素融合蛋白抑制自身免疫性糖尿病
- I型糖尿病(胰岛素依赖性糖尿病,IDDM)由胰岛素分泌缺陷产生,它是一种针对胰岛?细胞的自身免疫性疫病。虽然导致IDDM的自身抗原包括胰岛素谷氨酸脱羧酶、胰岛素、热休克蛋白、羧基肽酶H等多种抗原,但是实验中仅给动物口服一...
- 龚朝辉金勇丰张耀洲
- 文献传递
