泉州师范学院化学与生命科学学院模式生物研究中心
- 作品数：19 被引量：77H指数：6
- 相关作者：张昌松陈顺燕陈碧强更多>>
- 相关机构：山东农业大学动物科技学院江西农业大学动物科学技术学院宜春学院生命科学与资源环境学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省博士后创新项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种高质量蜜蜂核酸的快速提取方法被引量：10
- 2005年
- 基因组DNA的提取是蜜蜂分子生物学研究的一项基本而重要的技术.但由于蜜蜂样品具有脂肪、蛋白、几丁质含量很高的特点,所以用常规方法无法获得较高质量的DNA.文章研究对蜜蜂基因组DNA的提取方法作了重要改进,可以从不同发育时期的蜜蜂中快速、大量提取高质量的蜜蜂基因组DNA.此外,对蜜蜂总RNA的提取方法也进行了探索.
- 郭冬生孙亮先张巧利曾志将
- 关键词：蜜蜂总RNA基因组DNA
- 水稻幼苗SAGE文库的构建和测序
- 2006年
- 基因表达系列分析(Serial analysis of gene expression,SAGE)是功能基因组学研究中的一项功能强大的工具.对水稻幼苗SAGE文库的构建进行了探索试验,其主要操作步骤为:以磁珠法提取PolyA mRNA用于合成双链cDNA,再经过一系列的酶切、加接头序列、连接、PCR扩增,获得到26-bp的水稻双标签体,再将26-bp Ditag连接成标签链接体,并将其克隆进pZero-1载体中用于测序.DNA测序结果证明获得了水稻的SAGE标签.试验的各个中间步骤的结果均经过PCR验证.
- 孙亮先
- 关键词：水稻基因表达系列分析基因文库构建测序
- 蜜蜂转基因技术被引量：5
- 2005年
- 简述了建立蜜蜂转基因技术体系的方法和筛选标记.以显微注射法将改造过的pig-gyBac、mariner等转座子转基因载体导入受精卵是蜜蜂转基因工作的最佳候选方案,精子介导法和病毒载体法也值得尝试.增强型荧光蛋白(EGFP)基因是转基因蜜蜂的最佳筛选标记.并对蜜蜂转基因技术体系在基因功能研究和生物反应器的开发等方面的应用前景进行了探讨.
- 张巧利孙亮先郭冬生胥保华
- 关键词：蜜蜂转基因显微注射转座子精子
- 蛋白酶水解鳕鱼粉条件的研究被引量：1
- 2007年
- 对比研究pH、水解温度、时间、底物浓度、产物浓度等条件因子对4种商品蛋白酶水解鳕鱼粉的影响，为利用蛋白酶水解鳕鱼粉提供理论基础．试验结果表明：碱性蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为8．0，温度为45℃，时间为20mia，鳕鱼粉浓度为6％，氨基酸含量不超过1．95mg·mL^-1；复合蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为6．5，温度为50℃，时间为25mia，鳕鱼粉浓度为6％，氨基酸含量不超过2．08mg·mL^-1；中性蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为7．0，温度为40℃，时间为20min，鳕鱼粉浓度为6％～8％，氨基酸含量不超过2．29mg·mL^-1；酸性蛋白酶水解鳕鱼粉的适宜pH为3．0，温度为40℃，时间为20min，鳕鱼粉浓度为6％～8％，氨基酸含量不超过2．82mg·mL^-1．
- 张其标孙亮先杨远帆倪辉蔡慧农
- 关键词：蛋白酶水解水解条件
- 利用egfp基因对中华蜜蜂卵进行显微注射的初步研究被引量：1
- 2008年
- 利用显微注射法对中华蜜蜂0～12h卵注射绿色荧光蛋白基因,注射后的卵采取人工繁殖和蜂群自然培养两种方式饲养,结果蜜蜂卵注射后存活率低,绿色荧光蛋白基因表达不理想;实验探讨了中华蜜蜂卵显微注射转基因技术,为今后蜜蜂显微注射转基因研究和改进提供了一定参考价值。
- 郭冬生孙亮先陈碧强
- 关键词：中华蜜蜂显微注射绿色荧光蛋白基因
- 西方蜜蜂肌动蛋白基因启动子的克隆与序列分析
- 为研究适合蜜蜂转基因需要的启动子，本研究利用生物信息学知识和现有的生物信息资源，在NCBI数据库查询了西方蜜蜂肌动蛋白基因的编码序列，与西方蜜蜂基因组对比后,克隆、分析了西方蜜蜂肌动蛋白基因序列。该肌动蛋白基因有起始密码...
- 王伟孙亮先胥保华
- 关键词：蜜蜂养殖西方蜜蜂肌动蛋白基因克隆
- 文献传递
- 蜜蜂精子介导GFP基因转移研究被引量：4
- 2007年
- 将pGFP-2质粒线性化，利用精子介导，通过人工授精技术导入意大利蜜蜂处女王，然后将授精王介绍到无王群繁殖后代。结果：试验群产生了一群绿色荧光阳性蜜蜂；对阳性蜂群后代分析发现，1-2日龄幼虫能检测到荧光，提取蜜蜂DNA进行PCR扩增得到预想的片断，通过RT-PC分析，从转录水平上证实转导的外源基因获得表达。结论：以绿色荧光蛋白（GFP）基因为报告基因，通过精子介导法能够生产克隆转基因蜜蜂。
- 郭冬生张巧利孙亮先
- 关键词：意大利蜜蜂精子基因转移GFP
- 四个意大利蜜蜂品系RAPD遗传标记的分析被引量：8
- 2004年
- 前期研究中筛选到可在平湖浆蜂 (Ep)、美意 (Em)、澳意 (Eo)和苏意 (Es)中扩增出多态性条带的RAPD -PCR随机引物W18(5’ -CGGACGGCGG - 3’)和W2 3(5’ -GTACCGCCCG - 3’)。本文以群体遗传学方法对这 4个意蜂品系的RAPD多态性扩增条带进行分析。分析结果表明 ,在引物W18扩增出的多态性条带中 ,2 35 2bp和 36 4bp条带仅在美意中检测到 ,其基因频率分别为 0 .0 5 5 9和 0 .0 4 2 0 ;6 32bp条带在平湖浆蜂中出现的基因频率 (0 .90 86 )远高于美意 (0 .0 36 3)、澳意 (0 .0 190 )和苏意 (0 .0 0 0 0 ) ;2 0 92bp条带在美意与澳意中出现的基因频率分别为 0 .0 2 2 3和 0 .0 6 6 7,而在苏意和平湖浆蜂未检测到该条带。在W2 3引物扩增条带中 ,仅在澳意中检测到 6 5 1bp条带 ,其基因频率为 0 .0 348。RAPD多态性扩增条带基因频率的聚类分析结果表明 ,平湖浆蜂与苏意的亲缘关系最近 ,其遗传相关系数为 0 .982 0 ;平湖浆蜂、苏意与美意的遗传系数均为 0 .970 0 ,而与澳意的遗传相关系数均为 0 .96 90 ,表明这两个地方蜂种与美意的亲缘关系略高于澳意。美意与澳意的亲缘关系相对较远 ,其遗传相关系数为 0 .96 90。本研究结果在鉴定意蜂地理亚种下的各品系中具有实际应用价值。
- 孙亮先胥保华
- 关键词：浆蜂品系RAPD多态性亲缘关系意蜂基因频率
- 蜂王浆介导外源基因转移的初步研究被引量：2
- 2008年
- 采用DNA延滞实验研究蜂王浆与DNA的结合能力,然后通过蜂群哺育和人工培育两种方式,对1日龄工蜂幼虫进行短期饲喂,初步研究蜂王浆介导绿色荧光蛋白基因的方法和转移情况。结果表明:在蜂群环境下,蜂王浆中的外源DNA短期内不会完全被分解;但用蜂王浆作媒介并未实现蜜蜂基因转染,蜜蜂能否通过蜂王浆介导实现基因转移,还需进一步探讨。
- 郭冬生孙亮先张巧利
- 关键词：蜂王浆基因转移中华蜜蜂
- 电穿孔作用将外源基因导入中华蜜蜂卵的研究被引量：2
- 2009年
- 将中华蜜蜂卵与带有绿色荧光蛋白基因的质粒DNA混合,经电穿孔作用后,人工孵化蜜蜂卵,并对孵化的幼虫进行检测。结果筛选出一组较理想的中华蜜蜂卵电穿孔参数(750V.cm-1,100μs,1);通过荧光检测,电击卵孵化的幼虫体内可以表达EGFP基因,阳性表达率最高可达1.05%,且外源DNA转染早期卵的效率显著高于晚期卵。结果表明电穿孔作用成功地将外源基因引入中华蜜蜂卵内,质粒DNA转染中华蜜蜂卵的效率与卵的生长时期有关。
- 郭冬生曾志将孙亮先
- 关键词：电穿孔绿色荧光蛋白基因基因转移
