河北北方学院医学检验学院病原生物与免疫学研究所
- 作品数：17 被引量：18H指数：3
- 相关作者：张辉何荣志贾晓军高晓丽更多>>
- 相关机构：河北医科大学实验动物学部更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家高技术研究发展计划河北省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。
- 张培星李涓窦倩倩贾晓晖
- 关键词：多克隆抗体免疫印迹
- 感染CPn人群中CPn0308免疫原性分析研究
- ＜正＞目的分析Cpn感染ICVD患者中CPn0308的免疫原性。方法收集临床血液标本,分离血浆,从外周血单个核细胞中提取DNA。使用EIA法检测Cpn IgG、IgM;PCR法检测CPn DNA;Western
- 贾晓晖程健君何多姣李双霞田颖新贾天军
- 关键词：融合蛋白免疫原性
- 文献传递
- Cpn0308基因真核载体构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建Cpn0308基因真核表达重组质粒,为肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)核酸疫苗的研制做准备。方法:用PCR技术从Cpn AR39株基因组DNA中扩增Cpn 0308基因,经双酶切、连接等反应,重组入pcDNA3.1/HisA真核表达载体,转化到感受态细胞,再经含氨苄青霉素的LB培养基筛选,酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果:从Cpn AR39株基因组DNA中扩增出特异的Cpn 0308基因,约400bp;酶切、重组、转化、筛选鉴定出pcDNA3.1/HisA-Cpn0308重组质粒;序列测定证实与GenBank登录的肺炎衣原体Cpn AR39株Cpn0308基因一致。结论:功地构建了pcDNA3.1/HisA-Cpn0308重组质粒,为肺炎衣原体核酸疫苗的研制奠定了基础。
- 贾晓晖童伟田颖新贾天军
- 关键词：肺炎衣原体真核表达载体基因克隆
- 衣原体分泌性蛋白研究进展
- 2008年
- 衣原体分泌性蛋白是由衣原体基因编码并分泌到宿主细胞胞浆中的具有酶活性蛋白,研究最多的是蛋白酶体样活性因子即CPAF。CPAF能抑制IFN-γ诱导的MHC分子的表达、裂解角蛋白-8并通过裂解宿主细胞唯BH3域蛋白参与抗凋亡作用。2005年又发现两种肺炎嗜衣原体的分泌性蛋白CPn0796和CPn0797,但对其研究不多。
- 童伟贾晓军贾天军
- 肺炎衣原体Cpn0147基因的克隆、表达与定位及其重组蛋白的生物信息学分析被引量：3
- 2009年
- 目的重组表达肺炎衣原体Cpn0147基因,并对表达的内源性蛋白进行细胞内定位,对重组蛋白进行生物信息学分析。方法使用PCR方法从肺炎衣原体菌株AR39基因组中扩增第0147段开放读码区基因,使用限制性内切酶BamHⅠ和NotⅠ酶切目的片段和载体PGEX-6P2,T4连接酶连接后转化入大肠埃希菌感受态XL-Blue,并诱导表达融合蛋白GST-Cpn0147。用融合蛋白免疫小鼠,制备抗体,应用IFA方法对衣原体感染细胞内Cpn0147基因表达的内源性蛋白进行定位。利用软件Expasy对重组蛋白进行生物信息学分析。结果克隆出肺炎衣原体基因Cpn0147,全长450 bp,编码蛋白分子质量单位为14.727 ku,表达的融合蛋白GST-Cpn0147分子质量单位约为43 ku;用制备的抗体做IFA,显示现该蛋白定位于肺炎衣原体包涵体膜上。生物信息学分析该蛋白含2个抗原决定簇,具有良好的抗原性和亲水性。结论肺炎衣原体Cpn0147基因编码蛋白为一包涵体膜蛋白,抗原性和亲水性较好。
- 童伟张战军贾天军
- 关键词：肺炎衣原体克隆生物信息学分析
- Cpn0147真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达
- 目的：构建Cpn0147 基因真核表达重组质粒,检测其在真核细胞内的表达,为进一步研制肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cpn)核酸疫苗提供前期准备。
- 赵霞贾天军贾晓辉李婷程永婷
- 关键词：肺炎衣原体间接免疫荧光免疫沉淀
- 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2片段多克隆抗体的制备及鉴定被引量：5
- 2015年
- 目的原核表达甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)的CUB1、CUB2功能区蛋白,制备其功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定。方法利用带有CUB1、CUB2基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-CUB1和GST-CUB2融合蛋白并进行纯化,将纯化后的融合蛋白作为抗原,与Freund佐剂充分混合后免疫5周龄BALB/c雌性小鼠,制备多克隆抗体;应用Western blot法检测多克隆抗体特异性,应用ELISA检测多克隆抗体效价。结果成功表达并纯化GST-CUB1和GST-CUB2蛋白;应用其作为抗原对小鼠进行免疫后,成功制备出与其相应的多克隆抗体,且特异性强,与其他蛋白无交叉反应;间接ELISA测得CUB1抗体效价大于1∶32 000,CUB2抗体效价大于1∶16 000。结论成功制备了特异性强,效价高的GST-CUB1和GST-CUB2蛋白多克隆抗体。
- 韩小东贾天军贾晓晖李婷赵霞
- 关键词：多克隆抗体
- Cpn0308基因真核载体构建及鉴定
- ＜正＞目的通过基因克隆技术,构建Cpn0308基因真核表达重组质粒,为肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae,Cpn）核酸疫苗的研制做准备。方法用PCR技术从CpnAR39株基因组DNA中扩
- 贾晓晖贾天军
- 关键词：肺炎衣原体真核表达载体基因克隆
- 文献传递
- FXYD5基因真核表达载体的构建
- 目的：构建人高尔基复合体相关蛋白(FXYD5)基因真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达,研究肺炎衣原体0147基因与其相互作用方法：提取Hela 细胞的全部RNA,反转录成cDNA,以其作为模板,设计含特异性酶切位点...
- 程永婷贾晓晖赵霞李婷贾天军
- 甘露糖结合凝集素与缺血性脑血管病的相关性
- 2011年
- 目的检测缺血性脑血管病(ICVD)与甘露糖结合凝集素(MBL)基因单倍型、基因型频率及血浆含量的相关性。方法采集100例ICVD患者(ICVD组)和60例健康人群(对照组)抗凝血,序列特异性引物-聚合酶链反应(SSP-PCR)法检测MBL单倍型,ELISA法检测血浆MBL含量。结果 ICVD组与对照组MBL基因单倍型和基因型构成比均不同(P<0.05);ICVD组血浆MBL含量明显高于对照组[(3372.18±660.90)μg/L vs.(2065.29±195.67)μg/L](P<0.01)。结论 MBL可能参与ICVD发生发展过程。
- 程健君辇晓峰李静刘静佩高晓丽刘雪晴康少平杨新玲贾天军
- 关键词：缺血性脑血管病甘露糖结合凝集素
