深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室
- 作品数：111 被引量：444H指数：11
- 相关作者：刘刚李冉辉何曼文余玉雯黎科更多>>
- 相关机构：中国科学院长春应用化学研究所武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室南京大学化学化工学院现代配位化学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)
- 2008年
- 利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒.质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因,pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明,与pSIREN-siRNA1相比,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达.为了沉默全长MRP1基因的表达,pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞.Western印迹和MTT分析表明,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能有效抑制190kDMRP1在HEK293细胞中的表达,而pSIREN-siRNA1则不能.pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性.RNA二级结构预测结果分析表明,siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数,siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3.这些数据提示,siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用.
- 田生礼刘桂云郑硕梁惠卿刘士德张建华
- 关键词：RNA干涉多药耐药相关蛋白1RNA二级结构
- 高温逆境胁迫对月季3个品种光合特性的影响研究
- 使用Li-6400光合测定系统,对深圳市人民公园3种月季('黑夫人'、'香欢喜'、'美斯泰')的光合特性进行了比较,探究月季光合作用与相关生理生态因子的关系,以期为不同月季的合理栽培提供理论依据.
- 李庭海何亨辉黄俊颖刘晓黎科张永夏
- 多头绒泡菌微原质团瞬时表达系统的构建
- 2009年
- 真核生物多头绒泡菌的原质团是研究细胞周期的好材料。但尚无合适的表达体系可供选择。本研究用多头绒泡菌ardC actin基因启动子和终止子分别替换哺乳动物细胞表达质粒pDsRed1-N1的CMVIE和SV40 polyA片段,构建了多头绒泡菌红色荧光蛋白(RFP)表达质粒pXM1;用PardC-MCS-DsRed1-TardC替换pTB38表达盒PardC-hph-TardC,构建了多头绒泡菌RFP表达质粒pXM2。将多头绒泡菌转录延伸因子类似蛋白(PELF1)基因与质粒pXM2重组,构建了PELF1红色荧光融合蛋白(PELF1-RFP)表达质粒pXM2-pelf1。通过荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察RFP表达发现,电转参数为4kV/cm(电场)、1A(电流)、70μs(电击时间)时,质粒pXM1和pXM2电转多头绒泡菌微原质团(≤500μm)后24～48h内,RFP荧光最显著;而PELF1-RFP则主要聚集在多头绒泡菌细胞核,说明本试验建立的表达系统可以用于研究特定蛋白在多头绒泡菌内的瞬时表达。
- 刘士德程彩霞林子扬张建华李明华周卓龙田生礼邢苗
- 关键词：多头绒泡菌
- 雌激素样化合物对人细胞色素氧化酶2A6基因的转录调控
- 2014年
- 目的建立尼古丁代谢酶CYP2A6报告基因高容量筛选系统,分析环境和天然雌激素样化合物对CYP2A6基因转录的影响。方法构建3种CYP2A6基因转录上游-2460^+1全长、增强子-启动子串联和3倍增强子-启动子串联的荧光素酶报告基因重组体pGL3-2A6 3UP,GL3-2A6 EP和pGL3-2A63EP,分别与雌激素受体α(ERα)及海肾荧光蛋白表达载体三重共转染人肝HepG2细胞。用双荧光素酶报告基因分析技术,选择确认对雌二醇诱导应答最强的CYP2A6报告基因系统;分别用氰戊菊酯、2,2',4,4'-四溴联苯醚、4-二羟基二苯基丙烷、全氟辛酸铵、淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素等7种拟雌激素化合物处理转染报告基因的HepG2细胞,同时设置雌二醇10 nmo·lL-1阳性和0.1%DMSO阴性对照,48 h后测定各组细胞相对荧光强度,分析评估拟雌激素物质对CYP2A6基因转录的诱导作用。结果 3种CYP2A6报告基因重组体中pGL3-2A6 3EP对雌二醇诱导应答最强,且呈显著量效依赖关系。7种拟雌激素化合物对CYP2A6报告基因均具显著诱导作用,其中,2,2',4,4'-四溴联苯醚1.0~100.0 nmol·L-1诱导倍变值为1.45±0.13~3.30±0.13(P<0.01),诱导效应最强。表现出相似的量效诱导关系,淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素10μmo·lL-1时的诱导倍变值为2.41~2.83(P<0.01)。结论建立灵敏可靠、重复性强的CYP2A6报告基因高容量筛选系统,证实多种拟雌激素物质通过激活ERα诱导CYP2A6报告基因转录。提示环境拟雌激素污染物和药材食材雌激素样活性物质可诱导个体尼古丁代谢酶基因表达,从而干扰个体尼古丁代谢清除活性及其对环境化合物致癌代谢活化水平。
- 黄春玲邓寒柯雪娥韩霜雪何晓阳
- 关键词：细胞色素P450CYP2A6
- 一种大豆lea1基因在原核细胞中的表达及其在抗渗透胁迫保护中的作用
- ＜正＞ 干旱、盐、低温是影响农作物产量的主要非生物因素。随着植物分子生物学技术的发展,克隆抗旱基因,研究抗旱相关基因的功能成为人们不断探索的热点问题之一。胚胎发育晚期丰富蛋白（late embryogenesis abu...
- 兰英蔡丹彭素杯郑易之
- 文献传递
- 基于双向电泳技术的里氏木霉高效组成型启动子筛选被引量：2
- 2014年
- 获得强启动子是建立高效表达系统的基础。通过蛋白质双向电泳技术从蛋白质水平全面筛选里氏木霉的组成型启动子,获得了3个表达效率较高的启动子,分别是葡萄糖/核糖醇脱氢酶基因的启动子(grdh)、微体蛋白基因的启动子(hex1)和FAD相关蛋白基因的启动子(flo)。通过木聚糖酶Ⅱ(XYN2)的高效同源表达对这些启动子的功能进行了验证,为在里氏木霉中进行同源或异源蛋白的组成型表达提供了有效的工具。
- 禹建腾谢钧王绍文王娟刘刚
- 关键词：里氏木霉蛋白质组学二维电泳木聚糖酶
- 锌指蛋白在丝状真菌纤维素酶基因表达调控中的研究进展被引量：5
- 2014年
- 简要介绍了C2H2型、C4型和C6型三类锌指蛋白,分别从三类锌指蛋白总结了其在丝状真菌纤维素酶基因表达调控中发挥的作用,举例分析了锌指蛋白在纤维二糖水解酶Ⅰ和纤维二糖水解酶Ⅱ编码基因上表达调控的过程,结合相关研究总结了锌指蛋白在丝状真菌产纤维素酶中应用,最后指出通过该方面研究将有助于在分子水平上揭示纤维素酶表达调控的机理,为高效率、低成本生产纤维素酶奠定基础。
- 杨帆王娟
- 关键词：丝状真菌锌指蛋白纤维素酶半纤维素酶基因表达调控
- 莱茵衣藻作为新型高效表达生物反应器模式的研究
- 莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)是单细胞真核绿藻,因其生长速率快、生长周期短、遗传背景清楚而有“光合酵母”之称,是目前少数三套基因组(细胞核、叶绿体、线粒体)都能进行遗传转化的植物。本研究小组...
- 黎双飞雷安平王潮岗吴景霞郑凯静胡章立
- 文献传递
- 人工解析提高串联质谱鉴定肽段的数据利用度
- 2013年
- 为降低蛋白质鉴定的假阴性,利用标准蛋白和实际样品,探讨影响基质辅助激光解吸电离–串联飞行时间质谱数据利用度的原因.发现误差设置偏小、翻译后修饰、异常酶解和氨基酸突变等是导致蛋白质数据库检索不匹配目标肽段的主要原因.实验表明,典型情况下一级和二级质谱误差可设定在0.3Da.对未与数据库匹配的串联质谱进行亚胺离子辅助的人工解析发现,色氨酸双氧化、丝氨酸乙酰胺化和半胱氨酸丙酰胺化等不常见修饰,酪氨酸与苯丙氨酸、天冬氨酸与谷氨酸两两之间的突变和非特异性酶解等现象,该研究可提高质谱鉴定的数据利用度.
- 王勇李水明何曼文冯里茹
- 关键词：蛋白质组学数据库搜索
- 丙酮丁醇梭菌代谢工程菌的构建及其发酵性能被引量：2
- 2014年
- 丙酮丁醇梭菌Clostridium acetobutylicum可以利用葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、纤维二糖等多种底物,发酵糖获得丙酮、丁醇、乙醇等产物,是一种优良的木质纤维素同步糖化发酵菌种。为获得具有更优良发酵性能的木质纤维素发酵菌株,使用代谢工程技术对丙酮丁醇梭菌进行改造。将乙酰乙酰CoA硫解酶基因(thl)的启动子和末端两个同源片段以及醛/醇脱氢酶基因(adhE)的开放阅读框连接到pUC18上,构建成整合型质粒pTAEE,电转化丙酮丁醇梭菌后在红霉素抗性平板筛选转化子。通过PCR扩增及产物序列分析表明,质粒pTAEE中的adhE基因以单交换的方式整合到转化子基因组中,增强adhE的表达。重组菌T4的乙醇得率为2.3%,比野生菌提高了15%,乙醇浓度为0.39 g/L,与野生菌相当;丁醇得率为41.6%,比野生菌提高了69%,丁醇浓度为6.9g/L,比野生菌提高了41%,获得了发酵性能更高的丙酮丁醇梭菌代谢工程菌株。
- 方雪刘刚邢苗王绍文
- 关键词：丙酮丁醇梭菌代谢工程丁醇
