湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室
- 作品数：14 被引量：51H指数：4
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- 相关机构：宜春学院化学与生物工程学院宜春学院化学与生物工程学院生物工程系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划湖北省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- glyA基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
- 2006年
- 根据已知的序列设计引物,以大肠杆菌XL10-Gold总DNA为模板进行梯度PCR,并进行DNA序列测定,其序列与已经报道的glyA基因完全一致。将其克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pHBM905C上,获得表达质粒pHBM1001.该质粒转化毕赤酵母GS115所得重组子经PCR验证后成功进行了诱导表达,并初步测定了酶活力。
- 王博祝林马立新
- 关键词：毕赤酵母基因克隆分泌表达
- 番茄质体多顺反子定点整合表达载体的构建及其转烟草的研究被引量：4
- 2006年
- 根据烟草叶绿体高频同源重组片段的已知序列(GenBank Z00044.1)设计引物,用PCR的方法克隆到1个3.663 kb的番茄叶绿体DNA片段(psbD/trnG),命名为ctDNA。该片段与GenBank中烟草的相应片段有96.7%同源性,与本文所用的烟草的相应片段有95.8%同源性。以其为外源多顺反子定点整合介导的同源重组片段,与来自烟草叶绿体的强启动子Prrn和终止子psbA3′,以及甘露聚糖酶基因man、绿荧光蛋白基因gfp、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因aadA构建番茄质体多顺反子定点整合表达载体pLM2(-psbD-Prrn-RBS-man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3′t-rnG-)。将该载体用基因枪轰击烟草叶片,用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选,获得质体转基因烟草3株。用PCR、激光扫描、Western blot、RFLP等方法检测都证实man、gfp、aadA基因已整合到烟草质体基因组中,且均得到表达。用番茄质体多顺反子定点整合表达载体成功实现在烟草质体中的表达。
- 陆云华马立新蒋思婧
- 关键词：多顺反子基因枪法
- 番茄叶片再生系统建立的研究被引量：8
- 2005年
- 比较了不同基本培养基、不同激素及其不同浓度组合对4个番茄栽培品种叶片诱导愈伤组织、不定芽分化及其生根的效果.结果表明:MS+6-BA 3.0mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30 mg/L(pH=5.8)对愈伤组织诱导及诱导愈伤组织分化不定芽的效果最佳;MS+IAA 0.1mg/L+蔗糖20mg/L培养基对生根最好。
- 陆云华张新马立新
- 关键词：番茄幼叶培养基优化
- rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体的构建和应用研究
- rDNA介导整合在细胞内可达到180个拷贝,外源基因在酵母细胞内的表达会由于剂量效应而实现高效表达。因此,利用rDNA介导整合对酵母菌进行改造,具有重要的应用前景。将一段含有质粒Co1E1复制起始区(ori)和氨苄青霉素...
- 张桂敏曾毓芳陈雅兰屠俊马立新
- 文献传递
- 水稻质体多顺反子表达载体的构建及其对烟草质体的转化被引量：5
- 2006年
- 目的尝试水稻质体多顺反子定点整合表达载体转化到烟草质体中表达。方法根据已发表的相关序列,分别设计引物,通过PCR技术克隆了一系列构建水稻质体多顺反子定点整合表达载体所需的元件:质体核糖体(16S)RNA操纵元启动子(Prrn)、质体psbA基因3′端终止子(psbA3′)、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因(aadA)、水稻质体基因组高频同源重组片段(psbC/trnG,大小3362bp),命名为crDNA、甘露聚糖酶基因(man)、绿荧光蛋白基因(gfp)。构建了水稻质体多顺反子定点整合表达载体pLM21(-psbC-Prrn-RBS-man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3′-trnG-)。将该载体用基因枪轰击烟草叶片5枪,用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选。结果获得质体转基因烟草4株。用PCR、激光扫描和Westernblot等方法检测都证实man、gfp、aadA三个基因且均得到表达,用RFLP证实表达盒整合到烟草质体基因组中。结论水稻质体多顺反子定点整合表达载体已整合到烟草质体基因组中,并得到表达。
- 陆云华马立新严红
- 关键词：水稻多顺反子基因枪转化
- 甘露聚糖酶基因在烟草中的表达
- 2006年
- 构建了携带湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室克隆的甘露聚糖酶基因的重组植物表达载体pLM50,转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404),再用农杆菌介导的叶圆盘法对烟草(Nicotiana tabacumL.)叶片进行遗传转化,在含卡那霉素的MS筛选分化培养基上筛选。结果获基因转化烟草植株4株;经PCR、Western blot等方法检测,证明man基因在烟草转化植株中得了表达。
- 陆云华张新马立新
- 关键词：烟草
- 烟草质体多顺反子定点整合表达载体的构建和转化被引量：3
- 2005年
- 构建了烟草质体多顺反子定点整合表达载体pLM4(-psaA-Prrn-RBS-man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3'-psbC-)。用基因枪将该载体轰击烟草叶片5次,用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选,获得质体转基因烟草6株。用PCR、激光扫描、Westernblot和RFLP等方法检测都证实多顺反子表达盒中的3个基因甘露聚糖酶基因(man)、绿荧光蛋白基因(gfp)、氨基糖苷3'-腺苷酰基转移酶基因(aadA)已整合到烟草质体基因组中,且均得到表达。
- 陆云华马立新陈俊蒋思婧
- 关键词：多顺反子烟草叶绿体基因枪法
- 大豆叶绿体多顺反子单交换表达载体的构建被引量：3
- 2005年
- 根据已知序列(GeneBankX076075),设计引物,用PCR方法获得了一段大豆叶绿体DNA片段,命名为soy。将来源于质粒pBluescriptSK( +)的含氨苄抗性基因Ampr和大肠杆菌质粒复制起始点ColE1ori的一段DNA片段克隆到这段大豆叶绿体DNA片段中,然后与由三个基因(壮观霉素抗性基因aadA、甘露聚糖酶基因man及绿色荧光蛋白基因gfp)串联的表达盒相连,以构建大豆叶绿体多顺反子表达载体pCS。并在大肠杆菌中通过平板定性分析和Western印迹的方法对所构建载体上的表达盒进行了功能鉴定,结果表明同一多顺反子的三个基因均得到了表达。
- 常玲张江陈俊张银波马立新
- 关键词：大豆叶绿体多顺反子
- 菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因在烟草中的表达被引量：4
- 2006年
- 构建了含菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因BADH基因的重组植物表达载体pLM46,转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404),用农杆菌介导的叶圆盘法对烟草(Nicotiana tabacumL.)叶片进行遗传转化。在含有潮霉素的MS筛选分化培养基上筛选,获基因转化烟草植株4株。经W estern blot等方法检测,证明BADH基因在烟草转化植株中得到了表达。
- 陆云华马立新张新
- 关键词：BADH基因烟草
- 大肠杆菌甜菜碱醛脱氢酶基因的克隆及其在烟草中的表达被引量：2
- 2006年
- 利用PCR克隆了大肠杆菌甜菜碱醛脱氢酶基因(betB),构建了含betB基因的重组植物表达质粒载体pLM47,并用农杆菌介导的叶圆盘法对烟草叶片进行遗传转化。结果表明,在含有潮霉素的MS筛选分化培养基上筛选,获得基因转化烟草植株3株;经报告基因GVS的组织化学检测和Western blot检测,证明betB基因在烟草转化植株中得到了表达。
- 陆云华马立新张新
- 关键词：烟草
