中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所医学分子生物学国家重点实验室
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 相关机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：中国综合性艾滋病研究项目国家高技术研究发展计划更多>>
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- 重组HIV-1 CN54 Nef抗原的制备及鉴定
- 2007年
- 目的原核表达HIV-1CN54调控蛋白Nef,并进行纯化、复性及鉴定。方法将CN54 Nef基因克隆至pThio-HisA载体,构建非融合表达载体,转化大肠杆菌BL21 Codonplus-RIL,IPTG诱导表达,通过尿素梯度洗涤包涵体纯化Nef蛋白,透析复性。Western blot检测目的蛋白的特异性。结果Nef蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上。用尿素洗涤法可直接纯化Nef,纯度达到90%以上。Nef蛋白透析后溶解于PBS缓冲液中。Western blot检测显示了良好的特异性。结论HIV-1 CN54 Nef抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达,采用的纯化和复性Nef蛋白的工艺简便、快捷,为开发针对Nef基因的HIV-1疫苗奠定了基础。
- 马涛李鼎锋傅晶晶李亮助孙茂盛刘勇邵一鸣
- 关键词：NEF蛋白DNA疫苗原核表达
