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重庆大学生物医学工程联合学院功能基因及调控技术实验室: 作品数：19 被引量：152H指数：7; 相关作者：田圣超张宝鹏俞和韦陈阶刘莉更多>>; 相关机构：重庆邮电大学生物信息学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>

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重庆邮电大学生物信息学院

中国不同地区亚洲韧皮杆菌遗传多样性分析被引量：17: 2009年; 柑桔黄龙病是最严重的柑桔病害之一,现已威胁世界柑桔产业。已被证实在中国南部该病害通过嫁接和木虱传播。因此黄龙病的流行病学研究就显得尤为重要。本研究中,基于外膜蛋白(omp)基因的PCR-RFLP的方法被用来研究中国南部各柑桔主产区的亚洲韧皮部杆菌的遗传多样性。研究采用不同的限制性内切酶消化各地区的亚洲韧皮部杆菌的omp基因产生了不同的RFLP指纹图谱,并对各地亚洲韧皮部杆菌的omp基因进行克隆测序然后构建系统发育树。结果显示:中国不同地理区域的亚洲韧皮部杆菌具有一定的遗传多样性,即便在某一特定的地区也有一定的差异。序列分析显示中国地区的亚洲韧皮部杆菌有很高的同源性。这些结果对揭示中国柑桔黄龙病的流行病学及制定科学有效的防治策略具有一定的指导意义。; 王中康周彬彬田圣超石小刚贤家旭陈世伟殷幼平; 关键词：黄龙病 RFLP 系统进化分析

贡嘎蝠蛾幼虫肠道细菌多样性分析被引量：31: 2008年; 【目的】对实验室养殖条件下的重要经济昆虫冬虫夏草寄主—贡嘎蝠蛾(Hepialus gonggaensis,Hg)幼虫肠道微生物群落的多样性进行了研究。【方法】采用常规分离培养与分子鉴定的方法和基于16SrRNA作为分子标记的变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)的方法。【结果】用常规分离与分子鉴定方法获得8个属的细菌类群,其中肠杆菌属(Enterobacter)是优势菌群,肉食杆菌属(Carnobacterium)是次优势菌群。对通过DGGE方法得到的11条16SrRNA优势条带序列进行了比对和系统进化树分析,结果表明肉食杆菌属(Carnobacterium)的丰度最高,是肠道细菌中主要的优势菌群,芽孢杆菌属(Bacillus)是次优势菌群。DGGE图谱还显示Hg幼虫不同虫龄肠道细菌菌群的结构存在差异,推测可能与其发育生理状态的差异有关系。【结论】结合常规分离法与DGGE法能够更有效的分析肠道微生物的多样性,获得更多更全面的微生物多样性信息。; 刘莉王中康俞和韦陈仕江阎光凡夏玉先殷幼平; 关键词：RRNA 变性梯度凝胶电泳群落多样性

人工饲养条件下眼斑芫菁不同发育阶段斑蝥素含量的变化被引量：13: 2008年; 【目的】分析人工饲养条件下眼斑芫菁Mylabris cichorii Linnaeus不同发育阶段体内斑蝥素含量的变化。【方法】收集不同发育阶段的眼斑芫菁,通过热碱浸提法提取斑蝥素,而后以气相色谱法检测含量。【结果】在幼虫期,1龄幼虫斑蝥素相对含量最高,2龄幼虫斑蝥素相对含量降到最低点;以后随着虫体的发育,幼虫体重和斑蝥素含量都逐渐增加。羽化后的成虫经隔离饲养,雄虫在羽化后5～30天大量合成斑蝥素,而雌虫体内斑蝥素含量则极低,具有典型的性二型现象;雌雄混合饲养组中,20～30天雌虫体内可以检测到大量斑蝥素,而同期雄虫斑蝥素含量远低于隔离饲养组。【结论】幼虫期斑蝥素含量随虫体发育而增加;成虫期主要由雄虫合成斑蝥素。混合饲养组成虫平均单头斑蝥素含量高于隔离饲养组雌雄虫平均斑蝥素含量。成虫身体各部位的斑蝥素含量以腹部最高,胸部次之。; 汪会荣王中康陈阶杨迎武曹月青夏玉先殷幼平; 关键词：斑蝥素性二型人工饲养

柑桔溃疡病菌滚环扩增检测体系的建立被引量：25: 2008年; 根据柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac)独有的蛋白基因序列和锁式探针公共连接序列分别设计特异性的锁式探针及其扩增引物,优化系列反应条件,建立了特异性的柑桔溃疡病菌滚环扩增体系。初步检测结果表明该体系能够特异性地检出Xac的菌体细胞及其DNA,而检测不出供试的其它植物病原细菌和柑桔叶面常见的多种附生细菌;对Xac靶片段克隆质粒DNA的检测灵敏度为102copy/μL,对Xac菌悬液的检测灵敏度为20cfu/μL,比常规PCR的检测灵敏度稍高。用滚环扩增技术和常规PCR技术对田间采集的实际样品进行了检测,两种方法的检测结果没有显著差异(P>0.01)。由于锁式探针的公共连接序列对扩增的条件要求一致,本体系的建立可以为植物病原微生物多靶标检测和病害检疫检验提供新的技术支撑。; 黄冠军殷幼平张仑李小焦葛建军陈洪俊王中康; 关键词：柑桔溃疡病菌锁式探针滚环扩增

环介导等温扩增技术的研究进展被引量：18: 2009年; 环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是利用2对特殊设计的引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效地扩增DNA的新技术,扩增产物为一系列反向重复的靶序列构成的茎环结构和多环花椰菜样结构的DNA片段混合物,电泳图谱呈阶梯式带状分布,反应伴有白色的副产物焦磷酸镁沉淀产生,可通过肉眼定性判断反应结果。LAMP技术已在核酸的科学研究、疾病诊断和动物胚胎性别的鉴定等领域得到了广泛的应用。从LAMP技术的原理、引物组成及反应过程、技术特点、方法延伸和应用等方面对其进行了概述,以期为同类研究提供参考。; 张仑殷幼平王中康; 关键词：环介导等温扩增检验检疫

眼斑芫菁卵滞育条件及滞育关联蛋白被引量：2: 2011年; 探讨眼斑芫菁(Mylabris cichorii Linnaeus)滞育条件以及分析滞育卵中的差异表达蛋白。该研究以不同温度和光周期处理眼斑芫菁成虫和卵,观察卵滞育和滞育解除的条件,采用SDS-PAGE电泳分析眼斑芫菁滞育卵中的滞育关联蛋白。结果显示:短光照可诱导眼斑芫菁成虫产滞育卵,在28℃条件下其滞育临界光周期在L11∶D13与L10∶D14之间(每天光照10～11 h);滞育卵胚胎发育至萼片腹节期后进入滞育,10℃低温处理10 d可有效解除卵的滞育;滞育卵中分离出分子量为8.0×104左右的滞育关联蛋白,而且分子量为4.5×104和2.3×104的蛋白质表达也显著上调。表明影响眼斑芫菁滞育的关键因素是亲代成虫所处的光周期。; 高贵芳王中康王宇钟威殷幼平; 关键词：滞育光周期

中国部分地区柑桔木虱体内感染Wolbachia的检测及其系统发育分析被引量：2: 2010年; Wolbachia是一种广泛分布于节肢动物体内的共生细菌,该共生菌经寄主卵的细胞质传播并参与多种寄主生殖活动调控,对节肢动物的物种进化有着重要意义并可能应用于害虫的生物防治。本研究以柑桔黄龙病(Huanglongbing,HLB)的主要传播媒介——柑桔木虱Diaphorina citri为研究对象,通过Wolbachia的16S rDNA、细胞分裂基因(ftsZ)、表面蛋白基因(wsp)的特异引物对来自于中国广西北海、广西柳州、广东深圳、广东阳春、福建福州5个地区的柑桔木虱进行PCR扩增,并对扩增产物进行克隆测序,与GenBank中相关序列进行比对分析,建立了柑桔木虱共生Wolbachia的系统发育树。结果显示上述5个地区的柑桔木虱均存在Wolbachia感染,通过Wolbachia的16S rDNA,ftsZ基因和wsp基因DNA序列的系统发育分析表明,5个地区的柑桔木虱体内的Wolbachia均属于B组;基于wsp基因的系统发育分析进一步表明5个地区的亚洲柑桔木虱体内的Wolbachia属于B组的Con亚组,且不同地区柑桔木虱体内的Wolbachia的16S rDNA,ftsZ基因和wsp基因序列差异不明显。研究结果为认识柑桔黄龙病传播媒介昆虫的进化及其综合防治提供了重要的参考依据。; 王中康田圣超贤家旭陈世伟刘婷婷殷幼平; 关键词：WOLBACHIA FTSZ WSP 系统发育柑桔黄龙病

小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑粉菌检测标准分子构建被引量：3: 2010年; 以小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑粉菌为研究对象,采用分子克隆技术,分别构建了该两种真菌分子检测的标准分子。前者包括线粒体2297 bp的DNA序列以及rDNA710 bp的ITS序列,后者包括线粒体2.3kb的DNA序列以及rDNA710 bp的ITS序列。分别对该两个标准分子进行了性能评估试验,测试结果显示所构建的标准分子具有良好的特异性、均匀性和稳定性,能够满足小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑粉菌分子检测需求。; 李小焦王中康章桂明陈枝楠殷幼平程颖慧王颖向才玉缪建锟; 关键词：克隆分子检测

基于16S rDNA序列的柑桔木虱体内共生菌多样性研究被引量：8: 2011年; 昆虫消化道内是一个复杂的微生态系统,有大量的微生物存在。这些微生物对寄主发育、营养吸收和防御方面都起着重要的作用。本文利用基于16S rRNA基因的PCR-RFLP指纹图谱法和变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)的方法对柑桔黄龙病虫-媒柑桔木虱Diaphorina citri体内细菌菌群多样性进行了研究。经PCR-RFLP分析显示31条序列与变形菌门的假单胞菌科、肠杆菌科、黄单胞菌科、伯克氏菌科、立克次氏菌科和根瘤菌科细菌具有较高同源性。柑桔木虱内共生细菌的优势菌群依次为合胞体共生菌(syncytium endosymbiont)(同源性99%,5条序列,分离频率31%)、Candidatus Carsonella ruddii和Mycetocyte内共生菌(同源性98%,5条序列,分离频率31%)以及亚洲韧皮杆菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)和内共生菌Wolbachia。对柑桔木虱内生细菌16S rDNA V3区序列的PCR-DGGE分析,条带相似性的UPMAGA聚类分析表明,采自九里香Murraya paniculata的柑桔木虱内生细菌大多聚为一支,而来自柑桔的聚在另一支,说明寄主差异对柑桔木虱内生细菌菌群构成的影响大于地理位置的影响。将PCR-DGGE条带测序,序列经GenBank序列比对发现柑桔木虱内生细菌主要属于变形菌门假单胞菌科、立克次氏菌科、肠杆菌科、黄单胞菌科以及厚壁菌门链球菌科和芽孢杆菌科。合胞体共生菌(条带3-4)因其稳定存在于木虱体内且不随柑桔木虱寄主和地理位置的改变而变化,可能是柑桔木虱体内的优势共生菌;内共生细菌Wolbachia也在柑桔木虱内稳定存在,表明我国柑桔木虱感染Wolbachia是普遍现象。PCR-RFLP和PCR-DGGE两种方法相结合较好地反映了柑桔木虱内生细菌菌群的多样性,而且均显示出柑桔木虱内的合胞体共生菌是主要的优势菌群。; 殷幼平刘婷婷田圣超胡修峰吴东王中康; 关键词：柑桔木虱共生菌 RFLP分析

抗柑橘溃疡病菌三结构域稳定性重组抗体(sc-dsFv)的研制与原核表达: 以鼠源抗柑橘溃疡病表面脂多糖的二硫键稳定性抗体dsFv为模板,利用重叠延伸PCR在重链可变区VH和轻链可变区VL之间引入一条人类抗体重链恒定区1(CH1)5’端12个氨基酸的序列作为连接肽,成功构建了单链二硫键稳定重组抗...; 李蒙殷幼平于红吴瑜佳王中康; 关键词：柑桔溃疡病菌复性 BIACORE; 文献传递

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