华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室
- 作品数：55 被引量：211H指数：8
- 相关作者：贺东生琚春梅罗永文郝建勇张艳萍更多>>
- 相关机构：河南农业大学牧医工程学院宜春学院生命科学与资源环境学院广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 禽腺病毒血清4型广东株的分离鉴定及致病性研究被引量：9
- 2018年
- 2016年本实验室从广东省分离到1株禽腺病毒血清4型（FAd V-4）,被命名为HZ-06-01。为研究该毒株的生物学特性,首先将它在鸡肝癌细胞（LMH）上进行传代及蚀斑纯化,然后对该病毒的hexon、ORF19及ORF27基因进行序列分析;结果显示,该毒株与国内代表毒株HB1510、JSJ13的hexon基因的序列相似性为100%,且存在ORF19和ORF27基因的缺失。将HZ-06-01株通过肌肉注射和灌喂两种途径对3周龄SPF鸡攻毒,结果,肌肉注射组死亡率为100%（10/10）,且在病死鸡的多个脏器中均能检测到病毒;灌喂组死亡率为0（0/10）,但攻毒后第2周能检测到抗体;病理组织学观察可见病死鸡肝有明显的核内包涵体、脾淋巴细胞减少等病变。结果表明,HZ-06-01株属于FAd V-4,且注射途径攻毒可以使SPF鸡表现出典型的心包积液综合症。本试验结果为心包积液综合症的诊断及防控提供了基础数据。
- 申祖杰黎世彬林华源任行星洪艳芬廖佳钰张建民廖明徐成刚
- 关键词：HEXON
- 基于转录组测序技术分析猪德尔塔冠状病毒感染ST细胞机制的初步研究被引量：1
- 2024年
- 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染可导致仔猪出现水样腹泻和死亡,严重危害猪的健康。为研究PDCo V感染引起宿主细胞基因转录水平的变化及初步研究其感染机制,本研究提取PDCo V感染组和不感染该病毒的阴性对照组ST细胞样品总RNA,构建二者的cDNA文库后采用Illumina HiSeq 6000高通量测序平台进行转录组测序(RNA-Seq)。结果显示,所有样品的测序错误率均≤0.03%;Q20/%和Q30/%分别达98%和94%以上;GC含量在51.09%~55.15%;相关性分析结果显示,阴性对照组及感染组细胞样品各组内的R值均>0.9,上述结果表明测序数据可靠,可用于后续转录组学数据分析。采用ggplot2软件分析两组细胞组内测序结果的相关性,并以相关系数R>0.9判定各组内测序数据的准确性;采用DESeq2软件并以P<0.05和log2(Fold change)>1为条件筛选两组细胞中转录显著差异基因;采用ClusterProfiler R软件对转录显著差异基因进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析;采用Pheatmap软件对各组ST细胞中与免疫反应相关的转录显著差异基因进行聚类分析;随机选择9个转录显著差异基因经RT-q PCR验证RNA-Seq的结果。筛选结果显示,与阴性对照组细胞相比,共筛选出5719个转录显著差异基因,其中3573个转录显著上调基因,2146个转录显著下调基因。GO功能和KEGG信号通路富集分析结果显示,转录显著上调的基因与ST细胞的免疫应答、防御反应等功能有关;转录显著下调的基因与细胞的氧化还原和新陈代谢等功能有关;转录显著上调的基因参与细胞因子受体互作、天然免疫反应相关、肿瘤坏死因子等的信号通路;转录显著下调的基因与细胞物质代谢信号通路有关,包括氨基酸代谢、脂代谢、乙醛酸和二羧酸代谢等信号通路。与免疫反应相关的转录显著差异基因的聚类分析结果显示,与阴性对照组细胞相比,PDCo V感染的ST细胞中白细胞介素基因(IL-1R1、1L-6、IL-10R
- 谢永生张昆丽张建峰贺东生
- 关键词：转录组测序
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因RT-LAMP检测方法的建立被引量：14
- 2009年
- 本研究根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)M基因保守序列6个特异性部位设计了2对引物,建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法。结果表明,该方法灵敏度比RT-PCR高100倍;全部反应可在1 h内完成并可得到其特有的阶梯状条带,而且猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光而直接判定结果。该方法灵敏度高、特异性好,可作为猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速诊断方法。
- 赵彦宗张显浩余小利苏丹萍贺东生
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因
- 广东地区5种优势血清型猪大肠杆菌的外膜蛋白型研究被引量：1
- 2012年
- 对从广东地区部分猪场分离的大肠杆菌进行血清型鉴定后,选取优势血清型O_9、O_(26)、O_(60)、O_(101)和O_(107)的8个致病性较强的分离株,采用超声波裂解、N-十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取大肠杆菌的外膜蛋白(OMP),利用SDS-PAGE电泳进行OMP分型。结果8个菌株共有3个OMP型(Ⅰ～Ⅲ型),其中O_(26)、O_(101)、O_(107)型的3个分离株的外膜蛋白型由1条带组成,为OMP-Ⅰ型;O_(60)、O_(101)、O_(107)型的4个分离株的外膜蛋白型由2条带组成,为OMP-Ⅱ型;O_9型的1个分离株的外膜蛋白型由3条带组成,为OMP-Ⅲ型。这表明,优势血清型O_9、O_(26)、O_(60)、O_(101)、O_(107)的分离株OMP型不单一;同一血清型的分离株,存在不同OMP型;而不同血清型的分离株却可有相同的OMP型。
- 张丹琳王文豪贺东生
- 关键词：大肠杆菌O血清型外膜蛋白
- 类禽H1N1亚型与Pdm/09H1N1亚型猪流感重组病毒的分离鉴定及其遗传进化分析被引量：1
- 2018年
- 为了解猪流感病毒（SIV）的流行情况，本试验在2014年10月-2015年9月期间在广东省各地区采集猪的鼻拭子和肺脏病料，将样品处理之后进行鸡胚分离和RT-PCR检测，分离到1株SIV，对其进行全基因组测序和遗传进化分析，结果表明为H1N1亚型SIV，病毒HA，NA，M和NS基因片段属于类禽分支（EA），病毒PB2、PB1、PA和NP基因片段属于Pdm／09分支。HA基因序列同源性结果显示，核苷酸相似性为93．2％～99．1％，其中与A／swine／Jiangxi／3858／2011（H1N1）SIV同源性最高。抗原位点分析结果表明，分离毒株的抗原位点基本保守。本研究通对广东省各地区分离的SIV分析，为SIV的重组和变异趋势及公共卫生安全的防控提供依据。
- 秦锋蔡孟楷黄俊明方博卜德新罗永峰付新亮曹振鹏马俊张桂红
- 关键词：猪流感病毒遗传进化分析重组病毒抗原位点
- 基于DNA-launched的猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统的建立被引量：3
- 2016年
- 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)反向遗传操作系统,将PRRSV全基因组分6段克隆,构建获得6个重组质粒,先由A1和A2片段或B1和B2片段连接构成A片段或B片段,然后D、C、B和A片段依次亚克隆入pOKq载体。在基因组5′端和3′端分别加上CMV启动子序列和BGH终止信号肽,全基因组510位核苷酸突变引入遗传标记位点FseⅠ。测序正确的全基因组质粒命名为pOK-A2BCD。再将pOK-A2BCD质粒转染BHK-21细胞,拯救病毒通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,结果表明拯救病毒成功,为进一步研究PRRSV致病性等相关分子机制奠定了基础。
- 曹宗喜焦培荣谭树义叶保国亓文宝张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒YA株的分离鉴定及动物回归试验被引量：5
- 2009年
- 广东省某猪场暴发以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染病。采集该猪场濒死猪的肺脏,接种Marc-145细胞,产生典型的细胞病变,收集病毒液并命名该病毒为PRRSV YA株。实时荧光RT-PCR试验显示YA株是基因缺失型变异株。扩增YA株的Nsp2基因的部分序列并进行核苷酸克隆、测序,结果显示Nsp2基因缺失第481位和第532-560位氨基酸。扩增Gp5基因序列并测序,绘制遗传进化树,结果显示YA株属于美洲型毒株,与其他7株已发表的高致病性PRRSV同源性达98.8%以上。用YA株病毒接种4头仔猪,其发病率和死亡率分别为100%（4/4）和75%（3/4）。
- 王福广孙彦伟赵志权王连想余小利苏丹萍罗满林贺东生
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2GP5攻毒
- 猪圆环病毒2型ORF2基因的定点突变及其真核表达载体的构建被引量：2
- 2011年
- 根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计并合成引物,采用重叠延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)定点诱变技术对ORF2基因进行定点突变。DNA测序结果表明,ORF2基因片段的372—378 bp处的碱基由TCTAGAT突变为ATTGGAT,从而破坏酶切位点XbaⅠ,成功获得ORF2的突变基因片段。进而将其连接到腺病毒真核表达载体pAD5-Blue中,成功构建真核表达载体,并获得PCV2的Cap蛋白表达产物,为PCV2新型疫苗研究奠定了重要基础。
- 张艳萍苏丹萍贺东生
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因重叠延伸PCRCAP蛋白
- 宏转录组测序技术在一起仔猪病毒性腹泻疾病诊断中的运用及分析
- 2024年
- 为了确定2023年春季广西贺州地区猪场仔猪腹泻病原,采用宏转录组测序技术筛查该地区猪群发病和感染情况,为当地仔猪腹泻疾病的防控提供依据。采集2023年3月广西贺州地区10 km范围内6个相邻并同时暴发腹泻的猪场仔猪的肛拭子和粪便,运用MGISEQ 200测序平台进行宏转录组测序开展猪病原感染组学研究,系统性地筛查该区域仔猪腹泻的病原谱,使用实时荧光定量RT-PCR对最主要病毒进行确认,定量分析各病原的丰度并选取鉴定到的病毒基因序列进行系统发育分析,Pearson分析解析病原混合感染的相关性。结果显示:通过宏转录组测序技术在这些样品中共检测到17种致病性细菌、12种病毒和3种寄生虫。病毒以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)代表的腹泻相关病毒为主,包括猪札幌病毒(porcine sapovirus, SaV)、猪嵴病毒(porcine kobuvirus, PKV)、猪星状病毒(porcine astrovirus, PAstV)、猪猴禽猪肠病毒(porcine sapelovirus, PSV)、轮状病毒A(rotavirus, RVA)等;细菌主要包括3种肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、3种乳杆菌科(Lactobacillaceae)、2种芽胞杆菌科(Bacillaceae)等;寄生虫包括两种滴虫和碘阿米巴原虫。来自5个场区的PEDV刺突基因(spike gene,S基因)系统发育分析显示,毒株均属于G2c簇群,毒株之间核苷酸相似性为99.99%,毒株S基因存在重组情况;其中,一发病猪场还检测到P[6]基因型的rotavirus A部分VP4序列,与人源轮状病毒的核苷酸相似性最高。此外,在4个猪场检测到2种以上的仔猪腹泻相关病毒,系统发育分析结果提示,此区域存在腹泻病原多谱系共同流行的情况。病原相关性分析显示,PEDV/PSV(P<0.001)、PEDV/猪环曲病毒(porcine torovirus, PToV)(P<0.001)和PEDV/PAstV(P<0.05)有显著的负相关,而PEDV/PKV(P<0.05)有显著的正相关。以上结果提示,在该地区相邻养殖区域中,仔猪腹泻的病原谱具有多样性,其中,直接致病病
- 李跃张长春刘光裕高梦源符超俊邢家宝徐思佳邝麒元刘静高校鹏王衡龚浪张桂红张桂红
- 关键词：PEDV遗传进化分析
- 不同免疫途径对猪流行性腹泻血清抗体的影响被引量：1
- 2013年
- 猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种仔猪腹泻、呕吐、脱水和食欲下降的传染病。从2010年春季至今，我国的广东、广西、江西、湖南、福建、浙江、安徽、江苏、湖北、河北和山东、吉林、辽宁、黑龙江等省份的部分地区，甚至泰国、菲律宾、韩国等亚洲国家的规模化猪场发生严重的腹泻病例。应用疫苗进行免疫预防是控制该病最有效的方法，PEDV抗体的检测主要应用间接酶联免疫吸附试验。本试验于2012年9月进行，通过对不同的免疫途径与血清抗体相关性研究，为猪流行性腹泻病的防控提供试验和理论依据。
- 田野张海明贺东生
- 关键词：猪流行性腹泻病毒血清抗体免疫途径间接酶联免疫吸附试验食欲下降
