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CHO细胞无血清结团灌流培养:超声-沉降柱二合一灌流系统被引量：2: 2008年; 利用CHO细胞能在培养过程中自然结团的特性,采用超声—沉降柱二合一灌流系统能促进细胞结团和加强截留的特性,用无血清培养基连续灌流培养基因重组CHO细胞MK3-A2株,分泌表达rhTNK-tPA获得了成功。培养周期为77～110天,细胞结团率为90%左右,直径在285～570μm之间,细胞截留率保持在95%左右,成活率为85%以上,细胞密度达到2×107/ml左右,rhTNK-tPA生产率平均为89mg/L/d,最高时达216mg/L/d。结果表明,使用该灌流系统进行细胞结团培养可以取代微载体培养用于动物细胞制药的规模化生产。; 李智肖成祖杨琴黄小乐梁倩茹陈小飞郑敦武陈晓铭; 关键词：无血清培养基 CHO细胞

一种大规模快速分离纯化rhTNK-tPA I/II型的方法: 本发明属于蛋白分离纯化技术领域，具体涉及一种大规模快速分离纯化rhTNK‑tPA I/II型的方法。本发明提供了一种适合分离rhTNK‑tPA I/II型的层析方法，使得分离同等量的rhTNK‑tPA I/II型的层析时...; 李桂花卢俊裕王森

一种rhTNK-tPA细胞收获液的纯化方法: 本发明属于蛋白分离纯化技术领域，具体涉及一种rhTNK‑tPA细胞收获液的纯化方法。本发明其中一个关键点在于将所述rhTNK‑tPA细胞收获液在进行柱层析前先进行深层过滤和除菌过滤，能够有效地解决以往过滤后柱层析填料容易...; 吴宜南董珣钟勤陈军区叶才文; 文献传递

一种用于动物细胞无血清结团灌流培养的方法: 本发明公开了一种用于动物细胞无血清结团灌流培养的方法，该方法包括以下步骤：(1)工程细胞在无血清培养基的搅拌培养中驯化；(2)工程细胞在转瓶、方瓶和搅拌瓶的无血清培养基培养中初步结团；(3)细胞在反应罐中用超声-沉降双结...; 肖成祖杨琴李智黄小乐梁倩茹陈小飞郑敦武陈晓铭; 文献传递

一种降血脂药物组合物及其用途: 本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种降血脂药物组合物及其用途。所述的降血脂药物组合物包含有重组人组织型纤溶酶原激活剂TNK突变体rhTNK‑tPA、藻酸双酯钠和泛硫乙胺。所述的重组人组织型纤溶酶原激活剂TNK突变体rhT...; 杨琴胡家华王森穆国会曹靖文; 文献传递

利用高效液相色谱测定铭复乐中精氨酸含量的方法: 本发明属于生物医药领域，具体涉及利用高效液相色谱测定铭复乐中精氨酸含量的方法。其色谱条件为：色谱柱：C8柱；流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液：乙腈＝(20～60)：(30～80)；检测波长：200～220mm；柱温...; 赵宇清何志辉霍碧桃张毛秀穆国会曹靖文; 文献传递

重组人组织型纤溶酶原激活剂TNK突变体rhTNK-tPA的纯化方法: 一种重组人组织型纤溶酶原激活剂TNK突变体rhTNK-tPA的纯化方法，其包含以下步骤：(1)将rhTNK-tPA的细胞培养液过滤后取上清液，经Blue Sepharose 6Fast Flow亲和柱层析后，用洗脱液a洗...; 杨琴曹凤兰王志坚吴宜南董珣梁银冰; 文献传递

bFGF与VEGF抗原表位筛选及复合肽的表达鉴定被引量：7: 2010年; 目的筛选bFGF与VEGF抗原表位,构建复合肽进行原核表达,并对复合肽免疫原性及抑瘤效果进行研究。方法生物信息学方法分别预测bFGF和VEGF抗原表位,筛选优势表位,通过柔性Linker连接各表位构建复合肽,合成引物,重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE PCR)方法合成复合肽cDNA序列,克隆入原核表达载体pET32a进行表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-Blot鉴定,Ni-NTA柱纯化复合肽并免疫小鼠,间接ELISA法测定抗bFGF抗体和抗VEGF抗体滴度。构建黑色素移植瘤C57BL/6小鼠模型,研究复合肽免疫后肿瘤生长情况。结果生物信息学方法筛选获得3个bFGF表位和2个VEGF表位连同一个噬菌体多肽库筛选表位构建成复合肽,SOEPCR方法成功合成复合肽cDNA序列,构建原核表达载体表达bFGF与VEGF复合肽,纯化的复合肽免疫小鼠产生抗bFGF抗体和抗VEGF抗体;并且体内能有效抑制黑色素瘤生长。结论生物信息学方法筛选bFGF和VEGF获得的抗原表位构建的复合肽在体内同时激发抗bFGF抗体和抗VEGF抗体,并且能抑制肿瘤的生长,为研究bFGF与VEGF表位的抗肿瘤作用奠定基础。; 王宏朱中松杨琴向军俭杨红宇邓宁; 关键词：生物信息学 BFGF VEGF 原核表达重叠延伸PCR 肿瘤

一种检测I、II型rhTNK-tPA含量的方法: 本发明提供了一种检测I、II型rhTNK‑tPA含量的方法，涉及分析化学技术领域。该方法包括(1)将I、II型rhTNK‑tPA标准品按不同百分比含量配制混合溶液，进行样品前处理，然后采用反相高效液相色谱法进行分析检测，...; 蒋凡王森李桂花卢俊裕

重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂纯度的控制方法: 2018年; 目的建立分析重组人TNK组织型纤溶酶原激活剂(recombinant human TNK tissue type plasminogen activator,rh TNKt PA)纯度的方法。方法单体、聚合体直接采用分子排阻色谱法(size-exclusion high performance liquid chromatography,SECHPLC)测定;双链含量的检测需用二硫苏糖醇(DDT)打开二硫键,再采用分子排阻色谱法(SEC-HPLC)测定。色谱柱:TSKgel G3000SWXL;流动相:3%NaH2PO4-0.1%SDS(p H6.8)水溶液;流速:0.3 mL·min-1;检测波长:214 nm;柱温:25℃;检测时间:50 min;进样量:10μL。结果方法的专属性和精密度良好; 3批原液的单体含量为98.8%、98.9%、99.0%;聚合体的含量为1.2%、1.1%、1.0%;双链含量为8.0%、7.5%、7.5%。结论此方法准确、全面,经方法学验证可严格控制本品质量。; 赵宇清曾根辉霍碧桃钟丹彤穆国会吴敏杨琴; 关键词：纯度双链高效液相色谱法

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