军事医学科学院生物工程研究所蛋白质组学国家重点实验室
- 作品数：10 被引量：38H指数：4
- 相关作者：谭晓红范开吉王丽娟孙耀兰赵士林更多>>
- 相关机构：广西大学生命科学与技术学院广西大学生命科学与技术学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室兰州大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家科技支撑计划更多>>
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- 人Fkbp19的多克隆抗体的制备
- 2010年
- 目的:制备针对人Fkbp19的多克隆抗体,为进一步研究Fkbp19基因的功能奠定基础。方法:利用鉴定正确的重组原核表达载体pET21a-Fkbp19,在大肠杆菌BL21-DE3中诱导表达,应用Ni-NTA亲和层析法获得纯度较高的原核表达蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot及免疫荧光的方法检测抗体对乳腺癌细胞中内源性Fkbp19蛋白的识别能力。结果:成功地在大肠杆菌中实现了His-Fkbp19融合蛋白的表达,经纯化后免疫家兔得到了高滴度的多克隆抗体,该抗体可以用Western blot的方法检测内源性Fkbp19蛋白。结论:所制备的多克隆抗体可以用于Fkbp19的Western blot检测。
- 范开吉张彦刘迺发孙强杨晓
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 条件基因打靶研究存在的主要问题及对策被引量：4
- 2011年
- 基于Cre-loxP等位点特异性重组系统的条件基因打靶技术在解析基因功能和制备疾病小鼠模型方面发挥着极其重要的作用。但包括Cre重组酶转基因的表达模式不理想、重组效率存在差异、Cre重组酶的毒性等在内的Cre-loxP重组系统相关的缺陷以及条件基因打靶技术本身存在的问题,如遗传背景、育种策略、实验对照、基因代偿等方面的影响往往被忽略,严重影响基因功能和小鼠表型解析的准确性。针对这些问题,精细调控实现Cre重组酶的理想时空特异性表达、详尽地分析Cre重组酶的重组效率、降低Cre重组酶的毒性、遗传背景单一化、优化育种策略、设立严格实验对照、多基因联合条件基因打靶等诸多解决方案应予以采纳。
- 林福玉杨晓
- 关键词：CRE-LOXP位点特异性重组
- TGF-β/Smad4信号通路维持组织稳态的生理功能和机制
- 组织稳态失衡是许多疾病发生的重要原因，但对于组织稳态遗传调控机制的认识还非常有限。我们实验室近年来一直研究TGF-β/Smad4信号通路维持组织稳态抑制疾病的生理功能和机制。利用组织特异性条件基因敲除技术，发现了Smad...
- 杨晓
- 表皮干细胞研究进展被引量：10
- 2010年
- 哺乳动物表皮中包含有多种不同类型的表皮干细胞,它们共同维持了表皮组织结构的稳态并在皮肤创伤的修复中起重要作用。表皮干细胞具备干细胞两大基本特征:自我更新和分化,两者间平衡的破坏通常是皮肤肿瘤和其他皮肤疾病的根源。文章着重叙述了表皮干细胞存在的证据、两大基本特征、分裂模式、调节表皮干细胞的信号通路以及维持其稳态的微观和宏观环境。
- 王丽娟王友亮杨晓
- 关键词：表皮干细胞自我更新分化信号通路
- 小鼠表皮干细胞的分离与培养
- 2011年
- 目的:探讨体外分离和培养小鼠表皮干细胞和分析表皮干细胞克隆形成能力的方法。方法:采用中性蛋白酶和胰酶消化新生小鼠表皮基底层细胞,将细胞直接接种在细胞瓶中,在无滋养层条件下培育;利用表皮干细胞标记物K15和α6整联蛋白进行免疫荧光鉴定;以小鼠胚胎成纤维细胞作为滋养层与成年小鼠角质细胞共培养,进而分析表皮干细胞的克隆形成能力。结果:新生小鼠表皮干细胞克隆在培养2～3 d后开始形成,细胞核质较小,细胞呈小而圆的形态特征;传代后的细胞可以被K15和α6整联蛋白特异性标记。结论:利用该方法能够实现对小鼠表皮干细胞的体外培养和传代。
- 王丽娟孙耀兰杨雪王友亮杨晓
- 关键词：传代克隆形成
- 非小细胞肺癌靶向治疗的临床前研究进展被引量：6
- 2011年
- 针对表皮生长因子受体(EGFR)和血管生成(angiogenesis)信号通路的靶向治疗已经在晚期非小细胞肺癌的治疗上取得成功,但由于抗药性的存在,大多数晚期患者的生存时间仍然提高有限。继发性的EGFR T790M突变和原癌基因肝细胞生长因子受体(MET)的扩增被鉴定为两种主要的抗药机制。最近转化生长因子-β(TGF-β)/白介素-6信号通路被报道能介导选择性和适应性地对erlotinib的抗药。另一方面,Kras突变所致肺癌的靶向治疗方面也取得了一些进展。双重抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和促分裂素原活化蛋白激酶激酶(MEK)信号通路可导致Kras突变肿瘤的显著消退,联合抑制SRC、PI3K和MEK可使丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11(Lkb1)缺失,Kras突变的肺癌小鼠的肿瘤明显消退,抑制核因子-κB(NF-κB)信号通路导致p53缺失,Kras突变的肿瘤发展显著减慢。这些发现都为发展非小细胞肺癌患者的靶向治疗提供了有力的支持。
- 谭晓红杨晓
- 关键词：非小细胞肺癌EGFRKRAS靶向治疗
- 接头蛋白Gab1的结构及功能研究进展被引量：2
- 2009年
- Gab1蛋白属于接头蛋白Gab家族,该家族蛋白因能与生长因子受体结合蛋白2(Grb2)相结合而得名。作为接头蛋白,Gab1蛋白能被多种受体酪氨酸激酶或非受体酪氨酸激酶激活,接受胞外多种生长因子、细胞因子和一些T/B细胞抗原受体的刺激,介导PI3K/Akt和Ras/MAPK等多条信号转导途径,具有促进细胞生长、迁移、调节免疫等多种生物学功能,与糖尿病、肿瘤、心血管疾病等的发生发展密切相关。
- 胥传飞卢晟盛王友亮杨晓
- 关键词：信号通路PI3K-AKT
- p16在HBsAg和HBx转基因小鼠肝脏肿瘤中的表达
- 2012年
- 目的:探讨p16基因在由乙型肝炎病毒基因整合引起的小鼠肝细胞癌发生发展中的表达变化规律。方法:以乙肝病毒表面抗原基因(HBsAg)及X基因(HBx)定位整合转基因小鼠及对照小鼠的肝脏组织为标本,利用North-ern印迹、Western印迹及免疫组织化学检测p16在乙肝病毒基因定位整合转基因小鼠肝脏正常组织与肿瘤组织中的差异表达。结果:p16主要在小鼠胚胎期的肝脏中表达,在新生小鼠和成年小鼠的肝脏组织中几乎检测不到其表达;在HBsAg转基因小鼠和HBx转基因小鼠的肝脏肿瘤中,p16的表达明显升高。结论:p16基因在HBsAg或HBx诱导的肝细胞癌发生过程中被重新激活,也许发挥重要的作用。
- 孙耀兰赵士林侯宁王丽娟王友亮杨晓
- 关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠P16基因
- p8-应激调节的多功能核蛋白被引量：3
- 2009年
- 1997年,Iovanna等在研究急性胰腺损伤的分子变化中首先克隆得到了p8基因。人的p8分子是一个由82个氨基酸组成的小分子核蛋白,分子内含有一个保守的核定位序列,蛋白质二级结构与HMG-I/Y蛋白十分相似,该分子在包括胰腺、肝脏、肾脏在内的诸多脏器受到损伤刺激后,能够在短时间内迅速、高水平地上调,因此被认为是一个应激分子(stress associated protein)。随后的研究显示该基因具有复杂的表达调节模式,在个体发育、肿瘤形成、组织损伤、心肌肥大以及糖尿病性肾病中都发挥重要作用,并且其功能表现在不同组织、细胞中不尽相同。
- 孙强杨晓
- 关键词：应激蛋白应激反应肿瘤形成
- 心肌细胞过表达miR-27b导致小鼠发生心肌纤维化和线粒体损伤被引量：13
- 2012年
- 以往的miRNA芯片研究结果显示,miR-27b在人类心脏疾病标本和压力负荷引起的小鼠心肌肥厚模型中表达水平明显升高,提示其在心脏疾病发生过程中发挥了重要功能。为研究miR-27b在心脏组织中的功能,文章建立了在心肌细胞特异性-肌球蛋白重链(-MHC)启动子(5.5 kb)控制下过表达miR-27b的转基因小鼠。通过Real-time PCR检测,发现miR-27b前体和成熟体表达水平在转基因小鼠心脏组织中明显升高。miR-27b转基因小鼠不仅出现心肌肥厚,还表现出明显的心肌纤维化。进一步研究表明心肌纤维化的关键调节分子金属基质蛋白酶13(MMP13)是miR-27b的靶分子,在miR-27b转基因小鼠中MMP13显著下调,胶原分子I和III则显著上调。此外,还发现miR-27b转基因小鼠会出现心脏超微结构的损伤。以上研究结果表明,miR-27b可能通过抑制MMP13促进心肌纤维化。
- 侯宁王剑李振华曹阳范开吉杨晓
- 关键词：心肌细胞转基因小鼠心肌纤维化MMP13
