北京农学院动物科学技术学院兽医学（中医药）北京市重点实验室
- 作品数：126 被引量：283H指数：9
- 相关作者：鲍宇晖曹玉桃梁宏伟张鹏鹏李琼更多>>
- 相关机构：中国农业大学动物医学院河北农业大学动物科技学院中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市教委资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- 赤芍与抗生素联用对MRSA-ST9活性和毒力因子分泌的影响
- [目的]随着抗生素的大量滥用，细菌耐药性的问题日益突出，不仅显著降低了抗生素的疗效，限制了抗生素的应用，也严重威胁着人和动物的健康与安全。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染导致的感染性疾病已成为全世界三大难解决的感...
- 张亚飞冯烁孙英健伍一军
- 关键词：抗生素赤芍毒力因子
- 不同固定剂对体外培养微血管内皮细胞四种凝集素着色模式的影响
- 本试验以体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(microvascular endothelial cells,MVECs)为对象,研究了7种固定剂对4种凝集素荧光染色特点的影响.结果显示,Con A和WGA在任一种固定剂处理...
- 孙雄杨重锦穆祥张涛
- 关键词：动物医学微血管内皮细胞凝集素体外培养固定剂
- 文献传递
- NTE基因ShRNA慢病毒载体的构建与鉴定
- 2017年
- 【目的】构建神经病靶酯酶(NTE)蛋白低表达的ShRNA重组慢病毒表达系统。【方法】依照ShRNA序列设计原则设计带酶切位点的NTE ShRNA序列,与表达载体pLL3.7连接构建NTE ShRNA重组表达质粒,转染DH5α菌观察重组表达状况,与pCVM-VSV-G包膜质粒和pCMV-dr8.2dvpr表达质粒共转染293T细胞,包装得到重组慢病毒。用病毒稀释法以绿色荧光蛋白(GFP)为标记,确定转染效率及病毒含量。【结果】经酶切及测序鉴定结果显示成功构建pLL3.7-NTE ShRNA慢病毒载体。重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染293T细胞后获得高表达的细胞,共转染48h后,收集病毒液检测病毒滴度达4.5×10~4/mL。【结论】成功构建NTE ShRNA慢病毒重组表达系统。
- 张银花李秋明孙英健沈红
- 关键词：慢病毒载体
- 霉菌毒素对不同细胞的毒性评价
- 目的：评价赭曲霉毒素A(OTA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)三种霉菌毒素分别对人结直肠腺癌细胞HCT116、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2的毒性作用.
方法：采用MTT法检测...
- 邱思奇徐贞贞沈红
- 关键词：霉菌毒素细胞活力毒性评价
- 牛抑制素α亚基基因克隆及表达载体的构建
- 2015年
- 为克隆牛抑制素α亚基基因,构建抑制素p ET32a-成熟肽表达载体,从河北大厂县屠宰场采集卵巢,提取总RNA并反转录成c DNA,根据Gen Bank NM_174094.4设计一对引物扩增出成熟肽c DNA,将所扩增基因插入到p ET32a表达载体Bam HⅠ与HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒抑制素p ET32a-成熟肽。结果成功构建出抑制素α亚基基因。笔者初步得到了抑制素重组质粒,为今后重组蛋白原核表达的研究奠定了基础。
- 吴迪邢书涵齐晓龙刘云海郭勇倪和民
- 关键词：成熟肽
- 牛角地黄汤对金葡菌外毒素分泌的影响及调控作用被引量：2
- 2018年
- 牛角地黄汤是用于清热解毒、凉血化瘀的基础方剂,由水牛角、地黄、赤芍、丹皮等主要成分组成。【目的】本研究旨在探讨牛角地黄汤对金黄色葡萄球菌外毒素分泌的影响。【方法】将亚抑菌剂量的牛角地黄汤水煎液与金黄色葡萄球菌共同培养,用Western blotting检测培养液上清中外毒素蛋白的表达,用RT-q-PCR法检测细菌相关基因mRNA表达水平。【结果】牛角地黄汤水煎液在40.0mg/mL以上剂量对金黄色葡萄球菌的增殖有明显抑制作用。亚抑菌剂量的牛角地黄汤水煎液能抑制金葡菌毒素蛋白HLα、SEA、SPA的转录和蛋白分泌。同时抑制金葡菌agr系统和SarA调控系统相关基因的表达。【结论】牛角地黄汤在亚抑菌剂量下能抑制金葡菌毒力因子的转录和蛋白表达。其作用机制可能与牛角地黄汤剂抑制金葡菌agr二元调控系统及SarA蛋白家族中毒素相关的调控子转录表达有关。
- 张亚飞栗云鹏穆祥孙英健
- 关键词：金黄色葡萄球菌
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒-脂多糖刺激对中性粒细胞黏附猪肺微血管内皮细胞的影响被引量：3
- 2022年
- 【目的】研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单独和联合脂多糖(LPS)刺激对肺脏募集中性粒细胞(Neu)的影响,以及猪肺微血管内皮细胞(MVECs)在其中的作用。【方法】取约10日龄仔猪的肺脏组织,采用Ⅱ型胶原酶消化和差速贴壁法,分离培养原代MVECs,采用密度梯度离心法分离猪外周血Neu;以PRRSV HN株或PRRSV-LPS刺激Neu和MVECs后,将Neu加入培养MVECs的培养板,孵育1 h,4%多聚甲醛固定,瑞氏染色,观察并计数分析各组黏附的Neu数量;采用免疫细胞化学染色法检测MVECs对P-选择素和E-选择素的表达;采用虎红溶液染色法测定分析P-选择素和E-选择素抗体封闭MVECs时,PRRSV HN株或PRRSV-LPS刺激对Neu黏附于MVECs数量的影响。【结果】分离培养的MVECs呈CD34免疫荧光染色阳性,阳性率约为92%;PRRSV HN株刺激18 h,黏附于MVECs的Neu数量显著增加(P<0.05);PRRSV-LPS联合刺激时,黏附的Neu数量显著多于LPS单独刺激(P<0.05);PRRSV或PRRSV-LPS刺激Neu和MVECs二者时,黏附Neu数量的增加比单独刺激MVECs或Neu更明显;免疫细胞化学染色显示,MVECs强阳性表达P-选择素和E-选择素;用P-选择素和E-选择素抗体封闭MVECs时,PRRSV或PRRSV-LPS刺激诱导的Neu黏附增加呈不同程度下降,E-选择素封闭时具有显著差异(P<0.05)。【结论】PRRSV感染能促进Neu与MVECs黏附,亦能增加后继LPS刺激时黏附的Neu数量,MVECs表达的E-选择素是介导PRRSV致Neu黏附增加的重要分子之一。
- 王兆丽杨思宇吴艳梅宋晓晓穆祥张涛
- 关键词：选择素
- 大鼠肺微血管内皮细胞原代细胞制备及纯化的方法改进
- 2018年
- 为获得纯度较高的大鼠肺微血管内皮细胞,试验采用以下试验方法.（1）改进组织贴块法制备原代细胞：原代细胞制备分装组织块时,可用血清将过多的组织块吹下继续贴壁,可提高原代细胞的制作效率;与传统方法60h弃组织块相比,50h弃组织块细胞状态更好,主要杂细胞成纤维细胞较少.（2）改进免疫磁珠纯化法纯化细胞：在免疫磁珠纯化的过程中,抗体使用说明书和大量文献表明,抗体在4T：效价较髙,因此在孵育抗体时由标准操作方法中的室温孵育改为4t孵育;摇床摇晃EP管时发现有大量泡沫产生,影响了细胞、抗体、磁珠的充分接触,因此改为3～5min手动摇晃一次;在纯化后的培养基中加入内皮细胞生长支持物（ECGS）易导致细胞形态的变化,影响细胞活性,因此采取在纯化后就加入完全培养基代替纯化后2h加入含有ECGS的完全培养基等手段.结果表明,改进后试验方法较标准法所得细胞数量多,状态佳,因此提髙了细胞纯化的效率和纯化后的细胞质量.
- 陈巧红盛楠孙静冯波胡格
- 关键词：肺微血管内皮细胞
- 连翘酯苷A对感染H9N2-AIV小鼠的炎症基因水平表达的影响被引量：4
- 2020年
- 本研究旨在探究连翘酯苷A对感染H9N2禽流感病毒后小鼠的炎症基因水平表达的影响,探讨连翘酯苷A抗病毒的免疫作用机制。对不同分组处理的小鼠于3、5、7、14d采血(n=3),检测白介素1β(IL-1β)含量;取第7d小鼠肺组织(n=3),通过荧光定量PCR检测髓样分化因子(My D88)与核因子-κB(NF-κB)变化,分析连翘酯苷A对其表达的影响。结果表明连翘酯苷A可减少IL-1β分泌;与模型组相比,连翘酯苷A治疗后My D88与NF-κB基因表达水平降低。研究提示,连翘酯苷A的免疫调节作用可能是通过调控炎症基因表达,降低炎症因子的分泌来实现的。
- 盛楠鲁冠杰付岳胡格
- 关键词：连翘酯苷A小鼠白介素
- 屎肠球菌细菌素Enterocin E9 SPE/HPLC分离纯化方法的建立被引量：2
- 2014年
- 为了获得单一的细菌素Enterocin E9成分,使其发挥最大抑菌活性,建立在线SPE/HPLC分离Enterocin E9的方法。通过细菌培养,上清液收集、浓缩,获得细菌素粗提样品,采用Sepbox 2D-250全自动二维液相分离系统,确认流动相组成,流速和洗脱时间等因素。提取的单一成分其抑菌效果是浓缩样品的2.4倍。该方法省时、省力、精密度高,为细菌素结构与功能的研究提供一条有效途径和方法。
- 鲍宇晖张永红王建舫李佳崔德凤马梦王惠川
- 关键词：ENTEROCIN分离纯化抑菌活性
