何殿殿
- 作品数：7 被引量：11H指数：3
- 供职机构：南方医科大学生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 柱上切除GST标签制备幽门螺杆菌Lpp20蛋白被引量：1
- 2012年
- 目的表达幽门螺杆菌Lpp20-GST融合蛋白,获取切除GST标签的重组蛋白。方法采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组表达质粒Lpp20/pGEX-4T-1在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,收集菌体并采用反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌3种细胞破碎方法,表达产物在谷胱甘肽琼脂糖树脂4B柱上纯化,利用凝血酶切除GST标签,用鼠抗Lpp20单克隆抗体进行纯化产物western blot鉴定。结果高效表达出Lpp20-GST融合蛋白,相对分子质量约为4.5 kDa,产物以部分可溶性形式表达,凝血酶成功切除GST标签,纯化产物能被鼠抗Lpp20单克隆抗体识别。结论凝血酶柱上切除GST标签获得目的蛋白。
- 姜茵王小平何殿殿李妍
- 关键词：幽门螺杆菌LPP20凝血酶纯化
- 恶性疟原虫核糖核酸酶H2基因的重组质粒构建及其原核表达被引量：3
- 2011年
- 目的构建恶性疟原虫(plasmodium falciparum,P.falciparum)核糖核酸酶H2(ribonuclease H2,RNase H2)编码基因的重组质粒并在E.coli中表达。方法应用PCR技术从P.falciparum 3D7 cDNA文库(MRA-297)扩增RNase H2编码基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布预测P.falciparum 3D7RNase H2(登录号PFF1150w)的基因序列进行同源比对,再将目的基因插入至表达载体pET23b中进行表达。结果 RNase H2基因全长为867 bp,与GenBank公布的RNase H2基因的同源性为99%,表达的RNase H2蛋白的相对分子质量(Mr)为33 000。结论重组RNase H2能在E.coli中高效表达,为研究此蛋白在P.falciparum DNA复制中的作用奠定了基础。
- 杨尚明何殿殿李妍
- 关键词：恶性疟原虫克隆基因表达
- 胰高血糖素样肽-1抑制高糖和高胰岛素诱导的大鼠主动脉内皮细胞氧化损伤
- 2014年
- 目的 观察胰高血糖素样肽-1（GLP-1）对高糖高胰岛素诱导主动脉内皮细胞损伤的保护作用,并揭示其机理.方法 原代培养正常成年SD大鼠胸主动脉内皮细胞,将细胞分为五组,即（A）正常糖（5.5 mmol/L）组,（B）高糖（25 mmol/L）组、（C）高糖±GLP-1（10 nmol/L）组,（D）高糖＋高胰岛素（100 nmol/L）组和（E）高糖高胰岛素±GLP-1组.采用DAPI染液检测发生凋亡改变的细胞,各组细胞凋亡率=（凋亡改变的细胞数/总细胞数）×100％;采用比色法检测细胞内caspase-3和SOD1,SOD2的相对酶活性（A实验组/A对照组）;采用流式细胞术检测细胞中活性氧自由基（ROS）的相对含量（平均荧光强度）,并通过荧光定量PCR对细胞中NADPH氧化酶的亚基p22phox以及SOD1,SOD2和过氧化氢酶的mRNA转录水平进行检测（RQ值）.结果 ①B组和C组细胞的凋亡率分别为（36.9±5.90）％和（20.5±3.39）％,两者相比差异具有统计学意义（P=0.035）;D组和E组细胞的凋亡率分别为（52±8.14）％和（17.52±0.68）％,两者相比差异具有统计学意义（P=0.017）;②caspase-3相对酶活性在B组和C组中分别为1.50±0.07,1.06±0.03,两者相比差异具有统计学意义（P=0.000）,在D组和E组中分别为1.77±0.08和1.22±0.07,两者相比差异具有统计学意义（P=0.000）;③ROS的相对含量在B组和C组中分别为1.50±0.11,0.52±0.10,两者相比差异具有统计学意义（t=6.844,P=0.000）;④B组中SOD2和过氧化氢酶的mRNA转录水平（1.06±0.06,1.04±0.22）均低于C组（1.33±0.10,1.77±0.16）,差异具有统计学意义（P=0.002和0.018）,D组中SOD2和过氧化氢酶的mRNA转录水平（1.08±0.13,1.02±0.15）均低于E组（1.27±0.06,1.58±0.17）,差异具有统计学意义（P=0.022和0.020）;B组和D组分别与C组和E组相比,p22phox和SOD1的mRNA转录水平差异不具有统计学意义（P＞0.05）;⑤SOD2的相对酶活性在B和C组中分别为0.82±0.02和1.03±0.07,两�
- 马丁何殿殿李妍惠宏襄
- 关键词：胰高血糖素样肽-1内皮细胞高糖活性氧自由基
- GLP-1用于制备预防与治疗2型糖尿病大血管并发症的药物的用途
- 本发明提供了胰高血糖素样肽-1（GLP-1）用于制备预防与治疗2型糖尿病大血管并发症的药物的用途。本发明通过实验表明，GLP-1通过抑制大鼠主动脉内皮细胞中JNK信号通路、增加Bcl-2的表达和抑制caspase-3的活...
- 惠宏襄唐永明赵小宁马丁何殿殿李妍
- 文献传递
- 幽门螺杆菌Lpp20融合蛋白的表达、标签切除及鉴定被引量：7
- 2011年
- 目的:利用GST融合基因表达系统表达Lpp20-GST融合蛋白,并利用凝血酶切除GST标签。方法:IPTG诱导重组质粒Lpp20/pGEX-4T-1在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,菌体经反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌后,发现Lpp20-GST融合蛋白以部分可溶性的形式表达。采用GST蛋白纯化系统对其纯化,得到Lpp20-GST融合蛋白,再用凝血酶进行GST标签的切除,所得产物进行Western Blot鉴定。结果:高效表达出Lpp20-GST融合蛋白的相对分子质量约4.5kDa,凝血酶成功切除了GST标签,Western Blot证实Lpp20蛋白能被鼠抗Lpp20单克隆抗体识别。结论:成功表达和纯化了重组Lpp20蛋白,为深入研究Lpp20的功能奠定了基础。
- 姜茵奚悦王小平何殿殿李妍
- 关键词：幽门螺杆菌LPP20纯化
- 体内外胰高血糖素样肽-1上调炎症细胞因子基因转录
- 目的观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对免疫细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和胰腺细胞中炎症细胞因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白介素-1β(IL-1β)表达的影响,以及GLP-1对糖尿病大鼠主动脉MCP-1...
- 何殿殿
- 关键词：胰高血糖素样肽-1血管细胞胰腺细胞炎症细胞因子
- 文献传递
