何永吉
- 作品数：24 被引量：87H指数：4
- 供职机构：山西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 镉诱导华溪蟹不同组织金属硫蛋白表达及镉蓄积的研究被引量：31
- 2008年
- 为了系统研究镉诱导华溪蟹不同组织(肝胰腺,腮)金属硫蛋白(MT)表达及镉蓄积状况,并探讨二者之间的关系,采用体外镉暴露法处理华溪蟹,用镉-血红蛋白饱和法和火焰原子吸收分光光度法(AAS)分别测定华溪蟹肝胰腺及腮中镉蓄积及MT表达含量.结果显示,暴露期间动物死亡率低于9.2%,体重未见显著变化.不同浓度镉暴露下,华溪蟹体内镉蓄积及金属硫蛋白表达具有明显组织差异,且呈现一定的时间-效应与剂量-效应关系.鳃中镉蓄积量高于肝胰腺且最高达到(15.41±3.21)μg·g-1;而肝胰腺中MT表达量高于鳃,最高达到(97.18±11.83)μg·g-1.通过鳃及肝胰腺中MT的镉结合率计算,显示肝胰腺中的镉可完全被MT结合,而鳃中镉蓄积量远远大于MT结合能力.
- 马文丽王兰何永吉颜涛
- 关键词：镉金属硫蛋白肝胰腺
- 人脑金属硫蛋白3(MT-3)原核载体的构建、表达及纯化
- 2017年
- 为探讨采用基因工程技术构建小分子人MT-3蛋白原核表达载体的可能性,以MT-3 c DNA序列为模板,采用聚合酶链式反应引入双酶切位点,定向亚克隆至pho A分泌型原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞构建重组工程菌,经0.05 mmol/L低磷培养基培养诱导重组MT-3表达,利用金属螯合柱分离纯化后,利用SDS-PAGE、Western blot、紫外光谱扫描及金属结合能力分析对其进行鉴定。结果成功构建了pho A-MT-3原核表达载体,重组工程菌经诱导后以可溶形式表达重组MT-3蛋白。SDS-PAGE、Western blot和紫外光谱扫描分析证实重组MT-3表达成功。金属结合能力分析结果显示目的蛋白仍具有结合金属离子的生物学功能,实现了小分子MT-3的体外分泌重组表达。本研究成功实现了小分子人MT-3蛋白的重组制备,为MT-3的规模化应用奠定基础。
- 卢晓霞谢海军赵邑何永吉
- 关键词：神经生长抑制因子
- 黄曲霉毒素M_1酶联免疫吸附检测方法的建立被引量：6
- 2017年
- 建立单抗-多抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)检测方法,为黄曲霉毒素M_1(AFM_1)的快速检测及研究奠定基础。采用有机合成法将AFM_1转化成半抗原AFM1肟化物(AFM1O),进一步与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和卵清蛋白(OVA)偶联合成完全抗原AFM_1-KLH和AFM_1-OVA;以AFM_1-KLH为免疫抗原、AFM_1-OVA为筛选抗原,采用杂交瘤技术制备AFM1单克隆抗体,以AFM_1-KLH免疫新西兰大白兔制备兔多克隆抗体;以AFM_1-OVA为标准蛋白,制备的单克隆抗体为捕获抗体,纯化的兔多克隆抗体为检测抗体,商品化HRP标记的山羊抗兔Ig G作为检测二抗,采用方阵滴定法优化各步检测条件,得到最佳试验条件,建立AFM1夹心ELISA检测方法。标准曲线方程为y=0.004 4x+0.002 1(R2=0.992 2),检测范围0.5 ng/m L^128 ng/m L;最低检测限为0.5 ng/m L,批内和批间差均小于10%,重复性良好。
- 卢晓霞谢海军宋崴赵邑何永吉
- 关键词：抗体ELISA
- 一种彩粒小麦麸皮添加人造肉生产工艺
- 本发明公开了一种彩粒小麦麸皮添加人造肉生产工艺，包括以下步骤，分别从大豆中分离大豆蛋白粉，从麸皮中分离酚酸提取物，从贻贝足丝获取贻贝粘蛋白，从猪血中获得血红素成品，将上述物质按比例与紫色麸皮混合，制备人造肉。本发明所制得...
- 芦冬涛彭秀英刘雪峰梁文婷张学尧马学文何永吉
- 文献传递
- 组织因子人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建及鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:构建组织因子人-鼠嵌合抗体的真核共表达载体pCN40-VL-VH,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中进行稳定表达,以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性。方法:从分泌鼠抗人的组织因子mAb的杂交瘤细胞株(克隆号:mTA)中抽提总RNA,经RT-PCR扩增mAb VL和VH的基因序列,构建重组真核表达载体pCN40-VL-VH,并进行酶切鉴定和测序。通过磷酸钙沉淀法转染CHO细胞,以终浓度800μg/LG418筛选阳性细胞,通过间接ELISA、Western blot检测细胞培养上清中嵌合抗体的表达量、活性及特异性。结果:成功构建了抗人组织因子嵌合抗体真核共表达载体pCN40-VL-VH并在CHO细胞中表达。ELISA、Western blot证实,表达的抗组织因子嵌合抗体为人鼠嵌合抗体,该抗体能与重组人TF抗原特异性的结合且表达量为51.25mg/L。结论:成功地构建并在真核细胞中表达了抗人组织因子嵌合抗体,为进一步的研究奠定了基础。
- 张全爱齐延红潘薇薇何永吉赵峰梅杨素萍赵邑
- 关键词：人-鼠嵌合抗体真核表达载体CHO细胞
- 河南华溪蟹金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2014年
- 目的制备小鼠抗河南华溪蟹金属硫蛋白(MT)单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法分别利用小泛素样修饰蛋白(SUMO)融合表达系统和碱性磷酸酶(phoA)分泌表达载体制备河南华溪蟹重组蛋白SUMO-MT和His-MT,以SUMO-MT为免疫抗原、His-MT为检测抗原,利用杂交瘤技术建立抗河南华溪蟹MT mAb杂交瘤细胞株。采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Western blot法、Dot-ELISA分析mAb的特异性。结果成功建立了2株稳定分泌抗MT蛋白的mAb杂交瘤细胞株,分别命名为mAb-MT2和mAb-MT3,均属于IgG1亚类。腹水效价分别为1∶500 000、1∶1000 000,Western blot和Dot-ELISA结果证实2株mAb均能特异性识别重组MT和内源性MT。结论成功制备了具有较高特异性的河南华溪蟹MT mAb。
- 何永吉刘进平王兰
- 关键词：金属硫蛋白单克隆抗体
- 镉对长江华溪蟹酶活性及脂质过氧化的影响被引量：31
- 2008年
- 本实验于2005年3—7月,采用急性毒性实验方法,研究了镉(Cd)对长江华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense)酶活性及脂质过氧化产物的影响。Cd处理设5个浓度组,分别为7.25mg/L、14.5mg/L、29mg/L、58mg/L和116mg/L,实验同时设对照组。分别在24h、48h、72h和96h取肝胰腺和鳃进行超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的测定和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的测定。结果显示,在实验剂量范围内,随着镉浓度的增加和处理时间的延长,SOD和GSH-Px的活性均呈现先增高后降低的趋势,并存在组织差异性;而组织中MDA的含量随镉浓度的增加和处理时间的延长而升高。当处理时间为48h、Cd浓度为14.5mg/L时,肝胰腺和鳃中SOD活性均达最大值,较对照组差异极显著;当处理时间为48h、Cd浓度为7.25mg/L时,肝胰腺中GSH-Px活性达最大值,较对照组差异极显著;当处理时间为24h、Cd浓度为14.5mg/L时,鳃中GSH-Px活性达最大值,较对照组差异极显著。伴随处理时间和Cd浓度的增加,SOD和GSH-Px的活性开始逐渐下降。肝胰腺和鳃中GSH-Px/SOD的比值在对照组中处于平衡状态,但是在处理组中失去了平衡,有降低的趋势。结论:SOD与GSH-Px的活性和MDA含量的变化可以灵敏地反映Cd的胁迫程度及毒性大小。
- 李涌泉王兰刘娜王茜何永吉孟帆
- 关键词：长江华溪蟹超氧化物歧化酶谷胱甘肽过氧化物酶丙二醛镉
- 镉对河南华溪蟹线粒体酶的影响
- 于2004年9月至2005年2月采用浸浴法将河南华溪蟹（Sinopotamon henanense）以浓度为2.0 mg/L 的镉（CdCl2·2.5H2O）染毒,分别于第24、48和96 h提取心肌和肝胰腺线粒体,用分...
- 张晓博王兰王茜何永吉
- 关键词：线粒体酶活镉
- 文献传递
- Autotaxin在sf9昆虫细胞的表达及纯化研究被引量：1
- 2017年
- 目的 通过sf9昆虫细胞表达人Autotaxin（ATX）,获得具有生物学活性的目的蛋白。方法 采用TRIzol法提取人的黑色素瘤细胞总RNA,通过RT-PCR获得人ATX基因,构建p Fast BacTMHTA-ATX,Bacmid-ATX重组质粒,脂质体转染sf9昆虫细胞,收获重组ATX病毒;重组病毒侵染sf9昆虫细胞表达人ATX;通过His TrapTMHP和Hi Load 16/600 Superdex 200pg柱两部纯化获得目的蛋白并测定其磷脂酶D（lysophospholipase D,lyso PLD）活性。结果 用Bam H I和Xho I双酶切鉴定PCR产物及重组载体的正确性,重组病毒能够侵染sf9细胞表达人ATX,柱层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳纯度95%以上,每升表达液可得到纯化蛋白6mg,其明显具有溶血磷脂酶D（lysophospholipase D,lyso PLD）活性。结论 通过Bac-to-Bac表达系统构建的重组病毒杆粒能够感染sf9昆虫细胞,并正确表达具有生物学活性的人ATX,为开展ATX结晶与结构分析研究提供材料,为开发高效的ATX小分子药物抑制剂提供帮助。
- 赵峰梅潘薇薇曹鹏程赵亚蕊何永吉赵邑
- 关键词：自分泌运动因子
- 具有抗凝活性抗人组织因子单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的制备并鉴定具有抗凝血活性的抗人组织因子(h TF)单克隆抗体(m Ab)。方法以截短型重组h TF243蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后,采用间接ELISA联合血浆凝血酶原时间(PT)测定方法,筛选具有抗凝血活性的抗h TF m Ab的杂交瘤细胞株,并进行效价测定和特异性鉴定。结果成功建立1株可稳定分泌具有抗凝血活性的抗h TF m Ab的杂交瘤细胞株,该m Ab属于Ig G1亚型。间接ELISA测定腹水效价为1∶200 000,Western blot、PT测定结果表明,该m Ab可特异性结合重组h TF243,同时与SW620结肠癌细胞表面天然TF作用,显著延长血浆凝血酶原时间,具有良好的抗凝血活性。结论成功制备了具有抗凝血活性的抗h TF m Ab。
- 陈尧王兴华何永吉潘薇薇曹鹏程赵峰梅张全爱赵邑
- 关键词：单克隆抗体抗凝血活性杂交瘤技术
