冯炼强 作品数:43 被引量:109 H指数:5 供职机构: 中山大学中山医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 广东省卫生厅资助课题 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
Tca8113细胞exosomes的制备、鉴定及体外抗瘤作用观察 被引量:3 2009年 目的:探讨舌癌Tca8113细胞能否分泌exosomes,为口腔肿瘤的免疫治疗寻找新方法。方法:采用超速离心及差异密度梯度离心等方法,从Tca8113细胞中分离并纯化exosomes,透射电镜观察其超微结构,Westernblot分析其表面蛋白成分,最后通过与树突状细胞(dendritic cells,DC)及细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)等介导的细胞毒性实验来观察exosomes体外抗肿瘤效应。结果:从Tca8113细胞中成功分离并纯化出exosomes,其结构及携带蛋白与其他细胞来源的相似,并发现其分泌的exosomes还携带有肿瘤抗原MAGE蛋白。体外抗瘤实验表明:负载exosomes的DC诱导的CTL对Tca8113细胞的杀伤率明显高于未负载exosomes的DC诱导的CTL及加IL-2培养的T细胞,有显著性差异(P<0.01)。结论:舌癌Tca8113细胞能分泌exosomes,exosomes携带各种与肿瘤免疫相关的蛋白,负载DC后,可以诱导T细胞成为抗原特异性CTL,具有特异杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔肿瘤的免疫治疗开拓了新的途径。 廖贵清 李金 冯炼强 刘海潮 苏宇雄 骆晓枫关键词:EXOSOMES 舌癌TCA8113细胞 肿瘤免疫 流体剪应力调节内皮化小径聚氨酯人工血管抗血栓特性的体外研究 2008年 研究不同流体剪应力条件下,内皮化小径聚氨酯人工血管分泌一氧化氮(Nitrogen monoxide,NO)和前列环素(Prostaglandin I2,PGI2)水平的变化,从而为剪应力处理调节内皮化小径聚氨酯人工血管抗血栓特性提供实验依据。分离健康成人外周血的单个核细胞并诱导分化成内皮祖细胞,通过相差显微镜和免疫荧光标记等方法对诱导分化后的细胞进行形态学观察和鉴定。种植内皮祖细胞到小径聚氨酯人工血管表面后,将内皮化小径聚氨酯人工血管分为静态组、低剪应力组(5dynes/cm2)、中剪应力组(15dynes/cm2)和高剪应力组(25dynes/cm2)4个不同处理组,之后用硝酸还原酶法和酶联免疫吸附法测定不同时间点培养液中NO和6-keto-PGF1α(6-keto-prostaglandin F1α,6-keto-PGF1α)的水平。外周血单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光显微镜下呈典型的"纺锤样"梭形细胞,ac-LDL吞噬及lectin抗体荧光标记双阳性,FLK-1和vWF免疫荧光抗体染色均为阳性。流体剪应力增加种植人工血管表面内皮祖细胞NO和6-keto-PGF1α的产生,并且这种作用与剪应力大小呈正相关。因此,提高流体剪应力明显促进内皮祖细胞NO和PGI2等抗血栓物质的分泌,提示流体剪应力可改善内皮化小径聚氨酯人工血管抗血栓特性。 杨震 陶军 王洁梅 涂昌 冯炼强 潘仕荣 马虹关键词:人工血管 剪应力 前列环素 抗CD4单抗-PAP免疫毒素对T淋巴母细胞样CEM细胞的体外效应 2004年 【目的】构建抗CD4单克隆抗体-商陆抗病毒蛋白(PAP)免疫毒素(抗CD4-PAP),分别在体外测定其对T淋巴母细胞样细胞CEM和对照Raji细胞的细胞毒杀伤效应。【方法】以SPDP为交联剂,将纯化的抗CD4单抗与商陆抗病毒蛋白交联成抗CD4-PAP免疫毒素,在体外分别与CEM和Raji细胞进行杀伤试验。【结果】10-9mol/L抗CD4-PAP对CEM细胞产生的细胞毒效应约为60%,而对Raji细胞的细胞毒效应低于10%。抗CD4-PAP免疫毒素在体外对骨髓单个核细胞的CFU无抑制效应,【结论】抗CD4-PAP免疫毒素对T淋巴母细胞样CEM有明显的抑制效应,可能替代抗CD3单抗作为器官移植抗排斥反应及导向免疫治疗T淋巴细胞白血病的临床治疗研究。 张玲 冯炼强 林学颜关键词:免疫毒素 PAP 淋巴母细胞 RAJI细胞 小径人工血管内皮化种子细胞的实验研究 2004年 目的:为小径人工血管内皮化种子细胞的实验研究提供理想的种子细胞来源。方法:收集健康成人骨髓,通过Ficoll离心法获得骨髓单个核细胞,置于纤维连接蛋白预衬的DMEM培养基中,用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)加以诱导,并通过荧光显微镜和免疫组化分析等方法对诱导后的细胞进行形态学观察和鉴定。结果:在VEGF、bFGF等诱导因子存在的条件下,骨髓单个核细胞分化成为内皮细胞,倒置荧光微镜下呈典形的“纺锤样”梭形细胞,单层细胞贴壁生长融合时呈铺路石样排列,免疫组化示VWF抗体染色阳性,CD34抗体染色阴性。结论:成人骨髓单个核细胞在特定培养条件下可诱导分化成为内皮细胞,可作为小径人工血管内皮化理想的种子细胞。 杨震 潘仕荣 冯炼强 陶军关键词:细胞来源 碱性成纤维细胞生长因子 血管内皮生长因子 小鼠端粒酶蛋白亚单位真核表达载体的构建和序列测定 2006年 目的:克隆小鼠端粒酶蛋白亚单位(mTERT)的cDNA,构建真核表达载体并进行序列测定。方法:从肝癌细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增mTERT的基因编码区序列,将序列定向克隆至真核表达载体pAC,并进行序列测定。结果:获得mTERT编码区3 369 bp的cDNA片段,用PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得重组质粒pAC-mTERT。通过对mTERT编码区cDNA序列测序证实其与GenBank中的已知序列一致。结论:成功克隆了mTERT编码区序列,并构建了其真核表达载体,为以TERT为基础的肿瘤生物治疗奠定基础。 姜楠 陈规划 陆敏强 杨扬 蔡常洁 李华 许赤 易述红 汪根树 易慧敏 冯炼强关键词:寡核苷酸序列分析 真核表达载体 人CD154基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及序列分析 被引量:4 2001年 目的构建人 CD15 4基因真核细胞表达载体。方法采用 RT- PCR方法 ,从激活的人外周血淋巴细胞的总c DNA中扩增得到 82 0 bp的人 CD15 4c DNA片段 ,再用 Bam H 和 Eco R 双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中 ,限制性内切酶酶切分析重组质粒和 DNA序列分析。结果人 CD15 4c DNA已经正确克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中。结论本研究为探讨 CD15 4分子与淋巴细胞活化的关系及其信号传导机制 ,为进一步用于抗移植排斥反应的研究 ,或对由于 CD15 张春艳 宁波 李树浓 张志方 冯炼强关键词:RT-PCR 真核细胞 质粒 免疫缺陷病 小径聚氨酯人工血管内皮化种子细胞的体外诱导分化及种植实验(英文) 被引量:1 2006年 背景:目前,小径人工血管移植后由于缺乏内皮细胞衬里和抗血栓特性,长期通畅率低。有研究尝试用成熟内皮细胞种植人工血管以增强其抗血栓能力,以提高长期通畅率,但由于种子细胞和支架材料存在的缺陷,其效果并不令人满意。因此,临床上亟需寻找合适的种子细胞及血管支架材料,改善小径人工血管移植长期通畅率低这一现状。目的:探讨体外诱导骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞的可行性,并种植聚氨酯小径人工血管表面,为小径聚氨酯人工血管内皮化提供合适的种子细胞。设计:观察性实验。单位:中山大学附属第一医院心血管医学部,免疫学教研室。材料:实验于2004-09/2005-05在中山大学附属第一医院完成。健康志愿者成人骨髓(n=7)约10mL。方法:收集健康成人骨髓单个核细胞,置于纤维连接蛋白预衬的DMEM培养基中,用血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子加以诱导,通过荧光显微镜和免疫组化分析等方法观察和鉴定诱导后的细胞。将诱导分化的内皮祖细胞种植到聚氨酯小径人工血管表面,用扫描电镜观察。主要观察指标:①细胞形态学变化。②免疫组化VWF和CD34抗体染色结果。③聚氨酯小径人工血管表面内皮祖细胞的黏附生长状态。结果:①在血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子等诱导因子存在的条件下,骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光显微镜下呈典形的“纺锤样”梭形细胞,单层细胞贴壁生长融合时呈铺路石样排列。②免疫组化示VWF和CD34抗体染色阳性。②扫描电镜下,未种植细胞的聚氨酯小径人工血管表面呈典型的多孔蜂窝状结构,孔径大小比较适合内皮祖细胞爬行。种植细胞后,聚氨酯小径人工血管表面有大量的内皮祖细胞黏附、爬行及铺展生长,有时可见内皮祖细胞长入蜂窝状孔径内。结论:在体外能将骨髓单� 杨震 陶军 涂昌 冯炼强 徐明国 潘仕荣关键词:人工血管 干细胞 内皮 微波凝固肝癌细胞活性的酶组织化学检测 被引量:4 2006年 目的比较HE染色和酶组织化学染色对判断微波消融灭活肝癌细胞活性的价值。方法用10W、1.5~2min(85~95℃)和5W、1.5~2min(55~65℃)两种条件的微波消融,分别治疗A、B两组(每组3只)小鼠移植型肝癌,并取微波消融前后的肿瘤组织标本制成切片,进行常规HE染色及琥珀酸脱氢酶的酶组织化学染色,在显微镜下观察两种染色的情况。结果从HE染色观察到,A、B两组小鼠肝癌组织在微波消融后的即刻,其细胞核形态和排列较消融前无明显改变。酶组织化学染色显示,A组肿瘤消融区内的琥珀酸脱氢酶的活性均消失,这说明了癌细胞的灭活;B组肿瘤消融区内上述的酶活性都呈散在阳性,提示部分癌细胞仍存活,A、B两组的肿瘤灭活效果明显不同(Ρ<0.01)。结论HE染色不能评价微波消融对肝癌的即刻灭活效应,用酶组织化学染色测琥珀酸脱氢酶的活性能判定MA对肝癌的灭活效果。 冯炼强 刘大全 朱兆玲 吕明德 谭进富 王竹 周忠信关键词:肝癌 HE染色 琥珀酸脱氢酶 酶组织化学 系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞因子表达及对免疫功能的影响 被引量:1 2007年 【目的】研究系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓基质细胞因子表达情况,及其对外周血淋巴细胞增殖反应的影响,探讨SLE的发病机制。【方法】采用ELISA方法观察SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ、TGF-β等细胞因子的表达,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT),观察基质细胞培养上清液对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。【结果】SLE患者骨髓基质细胞培养液IL-6、MIP-1、IFN-γ浓度明显增高,TGF-β则降低,3种细胞因子与SLEDAI评分相关;正常人及SLE患者骨髓基质细胞上清液均对刀豆蛋白A诱导的外周血淋巴细胞增殖有明显的抑制作用,而SLE患者的上清液抑制作用明显低于正常人;在分别加入抗MIP-1、抗IFN-γ单抗后,骨髓基质细胞上清液对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用明显增强,而加入抗TGF-β单抗后,抑制作用明显减弱。【结论】SLE患者骨髓基质细胞对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用较弱,与其部分细胞因子异常表达有关,骨髓基质细胞可能与SLE的发病、发展有一定关系。 邹外一 童秀珍 蓝惠霞 冯炼强 彭辉 尹培达 罗绍凯关键词:红斑狼疮 骨髓 基质细胞 细胞因子 以实践为导向的研究生形态学技术课程探索 2021年 研究生是国家科技创新的主力军。良好的实验技能和实验思维是研究生进行科研探索和自主创新的重要基础,实验教学是医学研究生教育的重要一环。从教学目标、教学内容、教学模式、教学评价等方面总结以实践为导向的研究生形态学技术课程教学实践,对革新教学目标、教学内容和教学方式进行探索和思考。 陈少锐 袁广明 冯炼强 潘昭良 陈大缇 袁慧杰 胡黎平关键词:医学硕士研究生 实验室