周艳芳
- 作品数:13 被引量:27H指数:3
- 供职机构:江苏大学附属人民医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 转化生长因子-β_1在多柔比星致大鼠心肌细胞凋亡中的促进作用被引量:2
- 2012年
- 目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在多柔比星诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:取出生1~2d的SD大鼠心肌细胞进行体外分离及纯化,用α-横纹肌肌动蛋白(α-SA)免疫化学染色法鉴定细胞纯度。将培养第3天的心肌细胞随机分为对照组和不同浓度(0.5,1,2μmol/L)多柔比星处理组,同时对各浓度组的不同时间点(4,12,24,48,72 h)进行检测。用MTT法检测心肌细胞存活率,流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测心肌细胞凋亡率,ELISA法检测心肌细胞上清TGF-β1蛋白浓度。结果:原代分离培养第3天的心肌细胞纯度可达90%。多柔比星在0.5~2μmol/L浓度范围内,随着处理时间延长,心肌细胞存活率下降,呈剂量和时间依赖性;2μmol/L多柔比星可诱导心肌细胞凋亡,在4~48 h内细胞凋亡率不断增加,且心肌细胞TGF-β1蛋白表达量也逐渐增加,与凋亡率呈正相关。结论:TGF-β1可能在多柔比星诱导的大鼠心肌细胞凋亡中起促进作用。
- 陈星潘建业周艳芳王好顾琳张国辉
- 关键词:转化生长因子-Β1多柔比星心肌细胞细胞凋亡
- 骨髓间充质干细胞对体外损伤心肌细胞凋亡的影响被引量:4
- 2009年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外共培养条件下对多柔比星(doxorubi-cin,DOX)损伤心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法:贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞,第3代MSCs用于实验。原代培养3天的SD乳鼠心肌细胞,1.0 mg/L浓度的DOX处理4 h,建立心肌细胞损伤模型。将心肌细胞分为正常对照组、DOX损伤组、DOX损伤+MSCs共培养组。ELISA法检测细胞条件培养基内胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)的浓度。MTT检测MSCs条件培养基对DOX损伤心肌细胞活性的影响。并检测各组心肌细胞caspase-9,caspase-3活性及各组心肌细胞凋亡率。结果:第3代MSCs及原代心肌细胞均有IGF-1分泌,但MSCs条件培养基内IGF-1的浓度明显高于心肌细胞。MSCs共培养组心肌细胞活性高于DOX损伤组,但低于正常对照组(P<0.05)。DOX损伤+MSCs共培养组caspase-9,caspase-3活性及心肌细胞凋亡率低于DOX损伤组,但高于正常对照组(P<0.05)。结论:MSCs对多柔比星诱导的心肌细胞凋亡有保护作用,这种保护作用与旁分泌机制有关。
- 郭俊芳张赢予莫亚宏王好周艳芳张国辉
- 关键词:骨髓间充质干细胞心肌细胞共培养凋亡
- 扩张型心肌病患者血清ST2水平及意义被引量:3
- 2010年
- 目的:探讨IL-1受体家族成员ST2在扩张型心肌病心衰中的临床意义。方法:选择扩张型心肌病心衰患者36例(DCM组),根据纽约心脏病学会(NYHA)心功能分级标准:Ⅱ级12例,Ⅲ级11例,Ⅳ级13例;选择36例健康体检者作为对照(对照组)。检测两组患者血清中的ST2浓度,分析其与B-型尿钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、年龄及心衰病史之间的相关性,并比较不同心功能分级患者之间ST2浓度的差异。结果:DCM心衰患者血清中ST2浓度比正常组明显升高(P<0.05),与BNP(r=0.356,P<0.05)和血尿素氮溶度(r=0.312,P<0.05)正相关,与LVEF值负相关(r=-0.249,P<0.05),与年龄(r=-0.037,P=0.613)和心衰病史(r=-0.116,P=0.381)无关,随着NYHA心功能分级增高,血清ST2浓度也明显升高(P<0.05)。结论:血清ST2是DCM心衰新的生化标志物,并且与心衰的严重程度密切相关。
- 郑枫张赢予周艳芳王好张洪涛张国辉
- 关键词:心肌病扩张型ST2
- 胞内高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-β1表达的影响被引量:1
- 2013年
- 目的:探讨胞内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞表达转化生长因子-β1(TGF-β1)中的作用。方法:酶消化法分离3周C57/BL6小鼠心脏成纤维细胞,培养并传代,实验使用2~4代细胞,波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色鉴定细胞。高糖培养不同时间(0,6,12,24,48h)后分别检测成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达量。在转染siRNA后再高糖培养心脏成纤维细胞6 h,RT-PCR检测HMGB1、TGF-β1 mRNA的水平。结果:与0h相比,高糖培养6,12,24,48 h后成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达都上调。转染HMGB1 siRNA后高糖培养6 h的成纤维细胞TGF-β1表达下调。结论:HMGB1可能参与调节高糖诱导的心脏成纤维细胞的TGF-β1的表达。
- 潘皓韩尧辉张赢予毛俊倩周艳芳王好鲍永辉赵龙张国辉
- 关键词:高糖心脏成纤维细胞转化生长因子-Β1
- miR-133a真核表达载体的构建及转染大鼠心肌H9C2细胞
- 2011年
- 目的:构建miR-133a真核表达载体后,体外转染大鼠H9C2心肌细胞。方法:设计并合成DNA模板引物,用T4DNA连接酶将pre-miR-133a连接到线性化的PgenesIL-1.1质粒中,对重组质粒进行酶切及测序鉴定。以Li-pofectamineTM2000 Reagent将鉴定正确的重组质粒瞬时转染H9C2细胞,用流式细胞仪及倒置荧光显微镜检测转染效率。结果:miR-133a真核表达载体符合设计要求,瞬时转染H9C2细胞的转染率达70%以上。结论:成功构建了miR-133a真核表达载体并转染至大鼠心肌H9C2细胞。
- 张洪涛张赢予周艳芳王好郑枫张国辉
- 关键词:真核表达载体凋亡转染
- 6-姜酚降低血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞衰老的机制研究被引量:5
- 2014年
- 目的探讨6-姜酚对血管平滑肌细胞(VSMCs)病理衰老的影响及机制。方法培养的VSMCs细胞,给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激及6-姜酚干预,采用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老变化,流式细胞术检测细胞周期分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测mTOR蛋白表达及其底物P70-S6K磷酸化水平。结果 AngⅡ显著增加VSMCs的β-半乳糖苷酶染色率、G0/G1期停滞、mTOR蛋白表达及P70-S6K磷酸化,而6-姜酚能显著干预上述AngⅡ诱导的细胞衰老表型及相关信号分子变化。结论 6-姜酚可能通过抑制mTOR/P70-S6K降低AngⅡ诱导的VSMCs衰老。
- 周艳芳张国辉王好
- 关键词:6-姜酚MTOR细胞衰老
- 骨髓间充质干细胞旁分泌途径与阿霉素损伤心肌细胞凋亡:怎样证明其抑制效应?被引量:8
- 2010年
- 背景:近来研究发现骨髓间充质干细胞移植后短期心功能受益主要是因为其可分泌多种细胞因子,促进了内生性修复过程,而不是心肌细胞的再生。目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌途径对阿霉素损伤心肌细胞凋亡的影响。方法:体外培养的乳鼠心肌细胞按3×108L-1浓度加入6孔培养板,3mL/孔,培养72h后分为3组:阿霉素损伤组、共培养组加入1mg/L阿霉素作用4h建立心肌细胞损伤模型,正常对照组不进行任何干预。共培养组取培养至第3代大鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞浓度为3×108L-1,以3mL/孔加入共培养插件Millicell装置中,预培养24h,在造模后将Millicell装置插入到预先培养心肌细胞的6孔培养板中,建立共培养体系。检测条件培养基内细胞因子的质量浓度变化,骨髓间充质干细胞对阿霉素损伤心肌细胞Caspase-9和Caspase-3活性、细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果与结论:与正常对照组比较,阿霉素损伤组胰岛素样生长因子1及肝细胞生长因子的质量浓度、心肌细胞Caspase-3及Caspase-9活性、心肌细胞凋亡率、心肌细胞Bax蛋白表达均明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。与阿霉素损伤组比较,共培养组胰岛素样生长因子1及肝细胞生长因子的质量浓度、心肌细胞Bcl-2蛋白表达均明显升高(P<0.05),心肌细胞Caspase-3及Caspase-9活性、心肌细胞凋亡率、心肌细胞Bax蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结果证实骨髓间充质干细胞在损伤环境下细胞因子分泌增加,并可通过旁分泌途径抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。
- 郭俊芳张赢予陈蓉周艳芳王好张国辉
- 关键词:旁分泌凋亡胰岛素样生长因子1BCL-2蛋白BAX蛋白骨髓间充质干细胞心肌细胞
- MSCs旁分泌对多柔比星诱导的H9C2细胞凋亡的影响被引量:1
- 2014年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)旁分泌因子肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对多柔比星诱导的H9C2细胞凋亡的影响及其机制。方法:将SD大鼠MSCs传代至第3代后分为未转染组、转染HGF-siRNA组及转染阴性对照(NC)-siRNA组,分别进行相应处理。通过ELISA、蛋白质印迹法检测各组MSCs细胞上清中及细胞中HGF、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)含量和蛋白表达量。用浓度为1μmol/L的多柔比星处理H9C2细胞4 h后分为4组:单独培养组、MSCs共培养组、与HGF-siRNA-MSCs共培养组及与NC-siRNA-MSCs共培养组。培养24 h后通过流式细胞术AnnexinⅤ/PI双染法检测H9C2细胞凋亡率。结果:HGF-siRNA组MSCs上清中TGF-β1浓度为(519.23±24.34)pg/mL,明显高于未转染组[(459.65±11.78)pg/mL]及NC-siRNA组[(459.33±11.78)pg/mL](P均<0.05);转染HGF-siRNA组MSCs中TGF-β1表达量亦明显高于其他两组。HGF-siRNA-MSCs与H9C2细胞共培养组中H9C2细胞凋亡率为(18.54±0.64)%,较MSCs共培养组[(6.65±0.49)%]及NC-siRNA-MSCs共培养组[(9.70±1.62)%]明显增加(P均<0.05)。结论:MSCs旁分泌因子HGF通过抑制TGF-β1的表达对多柔比星诱导的H9C2细胞凋亡起保护作用。
- 刘玲玲赵龙李晓丽张赢予王好周艳芳张国辉
- 关键词:旁分泌肝细胞生长因子细胞凋亡多柔比星
- 糖尿病心肌病小鼠心肌成纤维细胞miR-375表达及其对胶原蛋白Ⅰ合成的影响被引量:2
- 2013年
- 目的:探讨miR-375在糖尿病心肌病心肌纤维化发生发展过程中的作用机制。方法:原代培养小鼠(C57BL/6)心肌成纤维细胞,采用免疫组织化学染色法鉴定细胞纯度。将培养的第2~3代心肌成纤维细胞随机分成对照组和高糖组,高糖组在处理6,12,24 h后,采用实时定量PCR方法检测各组细胞中miR-375的差异性表达。miR-375抑制剂瞬时转染心肌成纤维细胞,实时定量PCR检测转染效率。免疫组织化学染色检测心肌成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白的表达。结果:原代分离培养的第2代心肌成纤维细胞纯度可达90%;心肌成纤维细胞经高糖处理6,12,24 h后其miR-375的表达有增加趋势;抑制miR-375的表达后,高糖处理的心肌成纤维细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达显著降低。结论:miR-375可能在糖尿病心肌病心肌纤维化中发挥重要的作用。
- 黄燕张赢予王好周艳芳张国辉芮涛
- 关键词:糖尿病心肌病心肌纤维化
- S100B在多柔比星诱导心肌细胞损伤中的表达及作用被引量:2
- 2013年
- 目的:研究S100B在多柔比星诱导心肌细胞损伤中的表达变化及作用。方法:将体外培养的心肌细胞随机分为对照组,多柔比星损伤组(DOX组),多柔比星+阴性siRNA对照组(DNC组),DOX+S100B-siRNA组(DSB组)。用脂质体RNAi-MAX将S100B-siRNA转染到心肌细胞48 h后,多柔比星(2.0μmol/L)处理2 h。分别采用四甲基噻唑蓝(MTT法)、流式细胞术、蛋白质印迹法检测细胞存活率、凋亡率、S100B蛋白变化。结果:MTT测定显示,DNC组与DOX组存活率相比差异无统计学意义(P>0.05),DSB组与DOX组相比,其存活率增加(P<0.05)。流式细胞术分析表明,DOX组与DNC组凋亡率相比,差异无统计学意义(P>0.05);与DOX组相比,DSB组凋亡率降低(P<0.01)。蛋白质印迹检测S100B蛋白结果显示,DOX组与DNC组相比,差异无统计学意义(P>0.05);DSB组与DOX组相比,S100B蛋白表达下降(P<0.01)。结论:S100B在多柔比星诱导损伤的心肌细胞中表达明显增加并且可能促进心肌细胞凋亡。
- 韩尧辉潘皓毛俊倩周艳芳张赢予王好鲍永辉赵龙刘玲玲张国辉
- 关键词:S100B多柔比星心肌细胞细胞凋亡小干扰RNA