徐向红
- 作品数:5 被引量:8H指数:2
- 供职机构:南华大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 耐辐射奇球菌基因组DNA表达文库的构建与鉴定被引量:1
- 2009年
- 目的:构建耐辐射奇球菌(Deinococcus radioduransR1)基因组DNA表达文库,为进一步研究耐辐射奇球菌高抗辐射的调控网络奠定基础。方法:提取耐辐射奇球菌基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组DNA部分酶切成0.5-5kb大小的片段,用T4DNA连接酶将部分酶切片段与经BamHⅠ和碱性磷酸酶(CIAP)处理的pGADT7载体进行连接后电击转化大肠杆菌DH5α。结果:得到重组子数为2.2×104,扩增后的文库滴度为108cfu/mL。结论:构建了耐辐射奇球菌基因组pGADT7表达文库,为进一步筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础。
- 徐向红李斌元马云廖永强何淑雅
- 关键词:耐辐射奇球菌酵母双杂交系统
- 耐辐射球菌基因组DNA酶切条件的优化被引量:2
- 2009年
- 目的研究耐辐射奇球菌Deinococcus radiodurans R1基因组DNA酶切的优化条件,从而获得构建基因文库所需的DNA片段,旨在构建DR菌基因组DNA表达文库,进一步筛选文库中与其有相互作用的蛋白。方法培养耐辐射奇球菌,提取基因组DNA,用Sau3AI酶切DR菌基因组DNA,分别从酶浓度、酶切时间等选择酶切产生的DNA片段集中在0.5-5.0 kb的最佳条件,最后通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果Sau3AI酶切DR菌基因组DNA的最佳酶浓度为0.125 u/10μL,最佳作用时间为3 h,此条件下DR菌基因组DNA片段主要集中于0.5-5.0 kb。结论优化了DR菌基因组DNA的酶切条件,为进一步构建DR菌基因组DNA表达文库,筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础。
- 马云徐向红李斌元何淑雅
- 关键词:耐辐射奇球菌
- 结构域酵母三杂交诱饵载体的构建及酵母转化
- 2007年
- 目的脆性X相关蛋白(FXR1P)是一种RNA结合蛋白,本研究构建了其N-端结构域、KH结构域的酵母三杂交诱饵载体并转化酵母菌株L40 ura3/pHyblex/Zeo-MS2,为筛选这2种结构域的相互作用RNA作基础。方法根据Genebank提供的序列设计引物,以pYESTrp3/FXR1质粒作为模板,扩增分别包含FXR1P N-端结构域、KH结构域的编码区序列,连接到用于酵母三杂交文库筛选的pYESTrp3质粒,得到诱饵质粒,导入大肠杆菌Top10扩增,筛选阳性克隆并提取其中的重组质粒,再转化酵母菌L40 ura3/pHyblex/Zeo-MS2。结果经过测序验证,该重组诱饵质粒构建成功,转化酵母菌之后对宿主菌无毒性,无自激活现象。结论成功构建了能用于酵母三杂交文库筛选的FXR1P蛋白N-端结构域、KH结构域酵母三杂交诱饵载体,为研究这两个结构域的RNA结合功能奠定了基础。
- 马云李斌元徐向红刘慧婷贾瑜何淑雅
- 关键词:脆性X综合征
- 不同民族人群FMR1基因CGG重复序列检测与分析被引量:6
- 2007年
- 目的检测和分析脆性X综合征致病基因FMR1 CGG重复序列在汉族和壮族人群中的多态性分布。方法采用PCR扩增技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对1060例汉族人(男280人,女780人)和283例壮族人(男85人,女198人)FMR1基因CGG重复序列进行分析,并用Southern印迹技术对结果进行了验证。结果汉族人群中共检测到33种等位基因,其中CGG重复序列范围为6~43,壮族人群共检测到27种等位基因,CGG重复序列范围为6~57,两类人群中最常见的等位基因分别为28和29。结论应用PCR扩增技术进行了FMR1基因的大面积筛查,中国汉族和壮族人群中FMR1基因CGG重复序列变异分布略有差异。
- 马云何淑雅李斌元苏娇喻长顺刘慧婷徐向红
- 关键词:脆性X综合征FMR-1基因
- 耐辐射奇球菌基因组DNA表达文库的构建与鉴定
- 徐向红
- 文献传递