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李成梅

作品数：6 被引量：18H指数：2
供职机构：东北农业大学生物工程系更多>>
发文基金：黑龙江省自然科学基金更多>>
相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 3篇农业科学
  • 2篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 4篇沙门氏菌
  • 4篇酶链反应
  • 4篇聚合酶
  • 4篇聚合酶链反应
  • 4篇合酶
  • 2篇应用聚合酶链...
  • 2篇PCR
  • 1篇阳性
  • 1篇兽医
  • 1篇兽医诊断
  • 1篇兽医诊断学
  • 1篇重组体
  • 1篇免疫
  • 1篇克隆
  • 1篇化学合成
  • 1篇基因
  • 1篇基因工程
  • 1篇核酸
  • 1篇核酸检测
  • 1篇核酸检测技术

机构

  • 6篇东北农业大学

作者

  • 6篇李成梅
  • 6篇李景鹏
  • 3篇吴丹
  • 2篇周静
  • 2篇何成强
  • 1篇崔仁海
  • 1篇何洪彬
  • 1篇孙玉荣
  • 1篇肖仁良
  • 1篇郭荣昌

传媒

  • 2篇黑龙江畜牧兽...
  • 2篇东北农业大学...
  • 1篇中国兽医学报
  • 1篇生物技术

年份

  • 1篇1998
  • 3篇1997
  • 2篇1995
共 6 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
应用聚合酶链反应技术检测沙门氏菌被引量：2
1998年
利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测沙门氏菌，使用了２对引物ＨＩ和ｐｈｏＰ。ＨＩ引物对各长２０ＮＴ，根据鞭毛Ｉ相抗原基因自行设计，扩增序列长２６９ｂｐ；ｐｈｏＰ引物对各长２１ＮＴ，根据ｐｈｏＰ／ｐｈｏＱ基因设计，扩增片段长２９９ｂｐ。ＰＣＲ采用５０μＬ反应体系。ｄＮＴＰＳ各１００μｍｏｌ／Ｌ，引物各１μｍｏｌ／Ｌ，Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，酶２Ｕ。三温段ＰＣＲ循环条件为：９７℃预变性７ｍｉｎ；９４℃变性６０ｓ、５５℃复性４０ｓ、７２℃延伸６０ｓ，３５个循环；７２℃延伸７ｍｉｎ。检测８株标准阳性菌，结果都出现了ＨＩ引物和ｐｈｏＰ引物特异带，标准阴性菌３株只出现ｐｈｏＰ特异带，说明ＨＩ引物特异性很强。
李景鹏李成梅虞塞明何成强丁乃峥吴丹
关键词：聚合酶链反应沙门氏菌PCR兽医诊断学
沙门氏菌简便的核酸检测技术被引量：1
1997年
利用聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术，特异性扩增沙门菌ＨＩ基因的２６９ｂｐ片段。８株标准阳性菌和３株阳性菌检测结果完全相符，并对３０株分离的疑似沙门氏菌进行了检测。采用５０μｌ体系，引物为自行设计各２０６割寡聚核苷酸，各１μＭ；ｄＮＴＰｓ各１００μＭ；Ｔａｑ酶２Ｕ。二温段水浴扩增３５循环，条件为预变性９７℃７ｍｉｎ，变性９４℃６０ｓ，复性和延伸６０℃６０ｓ。
李景鹏肖仁良李成梅丁乃峥王宏
关键词：沙门氏菌PCR核酸检测
沙门氏菌临床检测比较研究被引量：4
1997年
比较研究了临床检测沙门的三种不同方法，采用聚合酶链反应技术，玻片免疫凝集试验和生化检测方法对３０份样品检出阳性率分别８３％、７３％和３０％。
李景鹏李成梅何成强吴丹张建光
关键词：聚合酶链反应免疫沙门氏菌
聚合酶链反应筛选阳性重组体
1995年
聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术已广泛用于ＤＮＡ基础研究和临床诊断。本文介绍用它来鉴定靶序列，从而进一步筛选阳性重组体。由于引物Ｔｍ较高，采用二温段扩增法，确实扩增出１０９ｂＰ靶序列。文章还讨论了扩增较小靶片段要注意的条件。
李景鹏孙玉荣李成梅
关键词：基因工程重组体聚合酶链反应
应用聚合酶链反应快速检测沙门氏菌被引量：9
1997年
利用聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｃｎ，ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌。根据沙门氏菌鞭毛素Ｉ相抗原基因，设计了一对各长２０个碱基的引物，扩增２６９ｂｐ的片段。并用８个标准标沙门氏菌株和３个阴性菌株检查引物特异性，结果完全相符。采用５０μＬ体积，ＮＴＰｓ２００μｍｏｌ，引物各１μｍｏｌ，ｍｇ＋＋３ｍｍｏｌ，Ｔａｑ酶２Ｕ。循环温度为９７℃７ｍｉｎ予变性后；９４℃１ｍｉｎ，６０℃１ｍｉｎ，３５个循环后再延伸７２℃７ｍｉｎ。经电泳分析，灵敏度可达每毫升检出１０４个细胞，经二次扩增后，灵敏度还可提高。实验共检查了３０个可疑样品，检出率明显高于生化检查和免疫学方法检查。
李景鹏李成梅丁乃峥吴丹周静石绍业
关键词：聚合酶链反应沙门氏菌
防御素基因的化学合成及克隆被引量：2
1995年
将防御素基因分成４个寡聚核苷酸片段，采用固相亚磷酰胺法在ＤＮＡ合成仪上化学合成。片段２和４分别用Ｔ＿４多聚核苷酸激酶将５′端磷酸化，４个片段等量混合，用Ｔ＿４ＤＮＡ连接酶连成一个１０９ｂｐ的双股ＤＮＡ片段，其两侧为ＢａｍＨＩ和ＳａｌⅠ粘性末端。把它与经上述双酶切的质粒ｐＵＣ１９连接，转化大肠杆菌ＤＨＳα。转化株经含Ｘｇａｌ青霉素平板初筛，质粒酶切分析以及ＰＣＲ专一性扩增，证实已获得完整的防御素基因克隆。为进一步表达防御素提供了材料．
李景鹏李成梅何洪彬崔仁海郭荣昌石绍业周静
关键词：防御素基因化学合成克隆
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