王宝利
- 作品数：107 被引量：317H指数：8
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- CXCR4和Survivin启动子的克隆及其在乳腺癌细胞系的转录特异性分析被引量：1
- 2009年
- 目的:评估CXCR4和Survivin启动子在乳腺癌细胞系中的特异转录活性。方法:采用PCR方法扩增CXCR4和Survivin启动子序列,将其分别克隆到含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒载体pEGFP-1和含有荧光素酶(LUC)的质粒载体pGL3-Basic,经脂质体分别转染乳腺癌细胞系(MCF-7MDA-MB-231和T-47D)和乳腺上皮细胞(HBL-100)。荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,并测定2个启动子在乳腺癌细胞中的荧光素酶活性。结果:CXCR4和Sur-vivin启动子在3种乳腺癌细胞中均表现特异的转录活性。CXCR4启动子在MDA-MB-231中的活性高于Survivin启动子(P=0.004);而在MCF-7细胞中活性低于Survivin启动子(P=0.006),两者在T-47D细胞中的启动子活性相当,P=0.615。结论:CXCR4和Survivin启动子在乳腺癌细胞中具有强的特异转录活性,且在不同乳腺癌细胞类型表现的转录特异性有一定差异。
- 李晓霞王宝利姚智
- 关键词：CXCR4SURVIVIN启动子
- 膳食碘过量对大鼠脑中胆囊收缩素基因表达的影响
- 2008年
- 目的观察过量碘膳食对成年大鼠脑中胆囊收缩素（CCK）基因表达的影响，探讨发生机制。方法选用断乳1月龄的Wistar大鼠，按体重随机分为5组，每组30只，摄碘量分别为6．15（A组）、30．75（B组）、61．5（C组）、307．5（D组）、615μg／d（E组），各组均饲以正常鼠料，饮用含不同碘浓度的水，饲养3、6个月后处死，用放射免疫分析方法测定血清甲状腺激素水平；取脑组织，采用RT—PCR方法检测脑组织CCKmRNA的表达。结果3个月时，E组大鼠血清总甲状腺素T4（n）（45．2±13．7）nmol／L、总甲状腺素T3（TT3）（0．65±0．20）nmol／L、游离甲状腺素T3（FTT3）（0．93±0．45）pmol／L、游离甲状腺素T4（n）（7．07±2．43）pmol／L、反三碘甲状腺原氨酸（rT3）（0．15±0．04）nmol／L均明显低于A组的TT4（76．0±18．8）nmol／L、TT3（1．34±0．41）nmol／L、FT3（2．45±0．62）pmol／L、FT4（15．12±3．40）pmol／L、rT3（0．24±0．04）nmol／L（F值分别为14．68、16．03、21．16、20．25、13．52，P〈0．01）；C组、D组的FT3水平与A、B组比较降低（F=21．16，P〈0．05）；D组的几水平与A、B、C组比较也有降低（F=13．52，P〈0．05）。6个月时，E组n（51．84±15．83）nmol／L、TT3（0．77±0．22）nmol／L、FT3（0．74±0．28）pmol／L、FT4（6．88±2．23）pmol／L、rT3（0．14±0．03）nmol／L均低于其余各组（F值分别为6．05、12．22、11．25、13．42、5．89，P〈0．05）。E组大鼠脑中CCKmRNA水平在3个月和6个月时与其余各组比较均降低（F值分别为4．04、3．95，P〈0．01）。相关分析结果显示：3、6个月时血清FT4水平与CCK mRNA水平间存在着线性相关趋势（r值分别为0．990、0．948，P〈0．05）。3个月、6个月时血清FT3水平与CCKmRNA水平间不存在线性相关关系（r值分别为0．970、0．932）。结论高于正常100倍的碘摄入会引起大鼠�
- 郑纺郭刚王宝利梁东春张瑞张镜宇赵学勤陈祖培
- 关键词：胆囊收缩素碘甲状腺素
- 基因工程甲状旁腺素高表达系统的构建
- 张镜宇郭刚梁东春王宝利左爱军吴亚峰张瑞赵学勤郭善一张文怡
- 该项目属于基因工程制药领域，是在连续两期完成了市基金项目(96360211和973607411)研究任务的基础上，对三个基因工程趋钙多肽(降钙素、BMP和甲状旁腺素)中有药用前景(治疗骨质疏松)和开发价值之一的甲状旁腺素...
- 关键词：
- 关键词：基因工程甲状旁腺素大肠杆菌骨质疏松症
- 人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析被引量：1
- 2005年
- 骨保护素 (OPG)成熟肽N端D1～D4结构域仅由 2个外显子编码 .以人基因组DNA作为模板 ,采用重叠延伸PCR得到N端D1～D4域编码序列 ,并在其上游引入 2×His密码子序列 ,然后克隆入载体pQE 30进行表达 ,SDS PAGE表明 8×His融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,可被抗OPG抗体识别 .变性条件下通过Ni NTA金属螯合亲和层析对表达产物进行纯化后再经梯度透析进行复性 ,采用破骨细胞样细胞 (osteoclast likecell ,OLC)诱导分化实验来检测重组蛋白的生物活性 ,证实单核 巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)和破骨细胞分化因子 (ODF)可协同促进多核OLC的生成 ,但加入重组OPG片段后 ,OLC生成显著减少 .
- 王宝利戴芳梁晖张瑞吴亚锋郭刚张镜宇
- 关键词：骨保护素活性分析
- 人骨形态发生蛋白2(BMP-2)在巴斯德毕赤酵母中的表达被引量：7
- 2005年
- 以重组质粒pUC-BMP2为模板PCR扩增人BMP-2成熟肽编码序列,将该序列克隆入pGEM-T载体进行DNA序列分析后亚克隆入分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9K中。重组质粒oPIC9K-BMP2经BelⅡ酶切后回收线性化片段,聚乙二醇法转染毕赤酵母茵株GS115。PCR筛选整合有人BMP-2基因的酵母细胞重组子,以甲醇进行诱导表达,于酵母细胞培养基中可检测到rhBMP-2。体外培养条件下,所得rhBMP-2可增加2T3小鼠成骨细胞内碱性磷酸酶活性;体内实验.rhBMP-2冻干粉可于小鼠骨四头肌肌袋中诱导软骨细胞群产生。
- 梁东春左爱军王宝利郭刚张镜宇
- 关键词：巴斯德毕赤酵母骨形态发生蛋白酵母表达载体体外培养条件PUCT载体
- 1、核因子—κB受体激活物配基（RANKL）反义RNA影响破骨细胞样细胞生成的研究 2、小鼠RANKL活性区cDNA克隆及在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达 3、人护骨素（OPG）成熟肽基因酵母表达载体的构建
- 护骨素(osteoprotegerin，OPG)及其同源配基核因子-κB受体激活物配基(receptor activator of nuclear factor κB ligand，RANKL)在破骨细胞分化和激活的调控...
- 王宝利
- 文献传递
- 人破骨细胞分化因子基因启动子报告载体的构建
- 2006年
- 目的:构建能够报告人破骨细胞分化因子(ODF)基因启动子活性的表达载体。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有ODF基因启动子的2段序列(-2433￣-1243bp和-1262￣+100bp),通过T-A克隆将这2个序列片段分别连接到pGEM"-TEasy克隆载体上。利用特定的限制性内切酶位点,将这2个序列片段酶切后进行正确拼接并定向克隆到不含启动子的pEGFP-1报告基因载体上。将该重组质粒pEGFP-1-ODF瞬时转染成骨细胞系UMR106,检测其能否在ODF基因启动子(-2358￣+100bp)的调控下表达报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。结果:pEGFP-1-ODF经酶切鉴定和序列分析证实与设计完全一致。细胞瞬时转染结果表明,pEGFP-1-ODF转染的UMR106能表达EGFP。结论:人ODF基因启动子报告载体的成功构建,为进一步研究ODF基因表达转录水平的调控机制奠定了基础。
- 杨宇虹郑纺刘瑞王宝利
- 关键词：破骨细胞分化因子
- 一种治疗骨骼代谢性疾病的药物及其应用
- 本发明涉及一种治疗骨骼代谢性疾病的药物及其应用。所述药物包括上皮调节蛋白(Epiregulin)。本发明首次发现Epiregulin参与骨髓基质细胞成骨/成脂分化过程，通过提高自噬相关基因ULK‑1、Beclin‑1、A...
- 王宝利吴晓文周杰朱恩东袁海瑞
- 文献传递
- 护骨素配基反义RNA对破骨细胞样细胞生成的影响
- 2004年
- 目的 :研究护骨素配基 (OPGL)反义RNA对成骨细胞OPGL和护骨素 (OPG)mRNA表达及破骨细胞样细胞 (OLC)生成的影响。方法:构建小鼠OPGLcDNA反义表达载体 ,转染小鼠成骨细胞 ,筛选稳定表达细胞 ,通过RT -PCR研究其OPGL和OPGmRNA表达的变化。将转染有OPGL反义基因的成骨细胞与小鼠骨髓细胞共培养 ,观察OPGL反义RNA对OLC生成的影响。结果:转染有反义OPGLcDNA的成骨细胞OPGLmRNA表达水平显著降低 ,OPGmRNA表达不受影响。其诱导的OLC数目显著减少。结论:OPGL反义RNA抑制了OPGL基因的表达 ,使得成骨细胞促进破骨细胞形成、分化的能力减弱。
- 王宝利邱明才梁东春郭刚张镜宇
- 关键词：反义RNA成骨细胞小鼠基因表达
- 用于研究CXCR4启动子活性的重组腺病毒的制备
- 2007年
- 目的:应用细菌内同源重组法构建用于研究趋化因子受体CXCR4启动子活性的重组腺病毒载体。方法:采用两步化学转化法获得重组腺病毒质粒pAd/CXCR4/GL3B/Shuttle,经质粒大小比较、PacI酶切和PCR方法分别鉴定证实重组腺病毒。结果:成功构建了用于研究CXCR4启动子活性的重组腺病毒载体。结论:两步法构建用于研究CX-CR4启动子活性的重组腺病毒,方法简单、重组效率高,为今后启动子的研究工作奠定了基础。
- 李晓霞王宝利姚智
- 关键词：CXCR4启动子腺病毒基因工程
