董万春
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：合肥工业大学生物与食品工程学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金安徽省自然科学基金安徽省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 拟南芥AtXCD1蛋白的原核表达研究被引量：1
- 2014年
- [目的]研究拟南芥AtXCD1蛋白的原核表达。[方法]构建XCD1原核表达载体,根据NCBI基因序列设计引物,并以PCR扩增得到大量目的片段XCD1,将XCD1连接到原核表达载体pET-32a+,并对重组质粒进行测序鉴定,将重组质粒转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21(DE3),对蛋白表达条件:诱导时间、诱导温度和IPTG浓度等进行优化。IPTG诱导表达获得目的蛋白,对蛋白表达条件:诱导时间、诱导温度和IPTG浓度等进行优化。[结果]XCD1序列全长为1 242 bp,与PCR产物大小一致。蛋白XCD1-pET-32a+较适表达条件为在30℃0.1 mmol/L的IPTG诱导1.5 h。[结论]该结果为进一步蛋白纯化及酶活测定试验奠定了基础。
- 陈光朗董万春韩娇樊婷婷杨立波曹树青
- 关键词：原核表达
- 拟南芥bZIP23基因过量表达载体的构建及过表达植株的筛选被引量：1
- 2014年
- [目的]以拟南芥为材料克隆bZIP23基因,构建bZIP23基因的过量表达载体和筛选过表达植株,为验证其功能奠定基础。[方法]提取拟南芥总RNA和RT-PCR克隆bZIP23基因,用限制性内切酶切割和T4 DNA连接酶连接,使bZIP23基因连接到35S强启动子的pART27载体上;将连接产物转化到Trans1-T1感受态细胞中,筛选阳性单克隆进行菌落PCR鉴定并测序验证,获得重组质粒。将该重组质粒电激转化至根瘤农杆菌GV3101菌株,浸花法转化拟南芥野生型植株。[结果]通过单菌落PCR鉴定和DNA测序结果显示,bZIP23基因与35S过量表达载体已连接,获得了重组载体;抗性筛选与遗传鉴定获得相应的转基因过量表达阳性植株。[结论]构建的过量表达载体及筛选得到的过量表达植株为验证bZIP23基因功能奠定了基础。
- 顾菊韩娇董万春阳立波曹树青
- 关键词：转基因植株
- AtbZIP19和AtbZIP23蛋白的原核表达
- 2015年
- bZIP类转录因子参与调控多种生物学过程,包括植物生长、花的发育、种子的成熟、衰老、光信号传导、损伤修复、病菌防御以及对各种环境胁迫的响应等。文章构建AtbZIP19和AtbZIP23基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了蛋白表达;提取拟南芥植株总RNA,通过RT-PCR克隆AtbZIP19与AtbZIP23基因cDNA全长;将pET-32a+载体和聚合酶链反应(PCR)产物进行双酶切,通过DNA连接反应将2个基因定向克隆到pET-32a+质粒中;经菌液PCR和测序鉴定获得阳性克隆后,将重组质粒转化至大肠杆菌原核表达菌株BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达得到目的蛋白。
- 孙成磊董万春韩娇管灵霞阳立波曹树青
- 关键词：拟南芥原核表达
- 拟南芥CDR6基因在调控铅胁迫响应中的功能研究
- 土壤重金属污染已成为一个严重的环境问题，其中重金属铅通过生物链累积到人类的组织和器官中，对人类健康构成严重威胁。植物修复技术与基因工程技术结合，被应用于解决土壤重金属污染问题，而该研究的关键就在于植物耐受重金属毒害的关键...
- 董万春
- 关键词：环境植物学生物学功能
- 拟南芥CDR6基因过表达载体构建及过量表达植株筛选鉴定被引量：2
- 2015年
- [目的]以拟南芥为材料克隆CDR6基因,构建CDR6基因的过量表达载体并筛选鉴定获得过表达植株。[方法]提取拟南芥mRNA,反转录成c DNA,并以此为模板克隆CDR6基因CDS全长,通过限制性内切酶切割、T4DNA连接酶连接,将CDR6基因CDS全长连接到带有35S强启动子的p XB094载体上;然后转化至Trans1-T1感受态细胞中,菌落PCR鉴定阳性单克隆并测序确认。将重组质粒转化至根瘤农杆菌GV3101菌株,通过浸花法侵染拟南芥野生型植株,通过抗性筛选和鉴定获得预期的转基因植株。[结果]菌落PCR鉴定和测序结果表明CDR6基因已成功构建至p XB094载体;通过抗性筛选并鉴定获得了过量表达阳性植株。[结论]筛选和鉴定获得的过量表达植株为研究CDR6基因的分子功能奠定了基础。
- 董万春樊婷婷阳立波江海坤张其安方凌倪娇娇管灵霞曹树青
- 关键词：拟南芥转基因植株
