赖庆安
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：福州大学生物科学与工程学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：教育部重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学石油与天然气工程更多>>
- 猪胃蛋白酶原A在毕赤酵母中的高效表达及其分离纯化被引量：2
- 2007年
- 尝试利用毕赤酵母(pichia pastoris)表达体系大量生产制备猪胃蛋白酶,用化学的方法合成猪胃蛋白酶原A基因,并构建表达载体pGAPZα-pepsinogen;利用化学转化技术,将该基因整合到巴斯德毕赤酵母x-33菌株的染色体上.经过发酵,三角摇瓶培养条件下获得的猪胃蛋白酶原A总酶活达5 250U/L.发酵液上清经过DEAE离子交换色谱和Sephacryl S-200分子筛色谱分离,活化酶原后测定其比活达到52 800 U/g.
- 李仁宽赖庆安陈菁刘树滔
- 关键词：毕赤酵母纯化
- 猪胃蛋白酶原A在毕赤酵母中的高效表达及其分离纯化
- 猪胃蛋白酶作为重要的消化酶,广泛应用于农产品蛋白质水解加工以及医药与养殖工业中。本文尝试利用巴斯德毕赤酵母表达体系大量制备猪胃蛋白酶原A。首先用化学法合成猪胃蛋白酶原A（pepsinogen A,pA）基因,并构建重组质...
- 刘树滔李仁宽赖庆安陈菁饶平凡
- 关键词：毕赤酵母纯化
- 文献传递
- 鸡氨肽酶H在大肠杆菌中的表达、纯化与部分酶学性质分析
- 氨肽酶H(Aminopeptidase H,APH))是生物组织内一种常见的氨基内肽酶,但因为天然材料中含量很低,基本无法深入研究其催化机理、功能与结构的关系及其在生物体内的确切功能。从鸡肝组织克隆了APH的全基因序列,...
- 赖庆安刘树滔卢菀华陈莉Toshihide NISHIMURA饶平凡
- 关键词：纯化酶活
- 文献传递
- 氨肽酶H的表达、纯化与表征
- 氨肽酶H是生物组织内一种重要的蛋白质端解酶。本文从鸡肝组织中提取总RNA反转录成 cDNA第一链,根据APH基因序列设计合成特异性引物,PCR扩增APH基因,并插入原核表达载体 pGEM(-T Easy,转化感受态受体菌...
- 赖庆安刘树滔卢菀华陈莉Toshihide NISHIMURA饶平凡
- 关键词：基因克隆纯化
- 文献传递
- 鸡氨肽酶H在大肠杆菌中的表达、纯化与部分酶学性质分析被引量：5
- 2008年
- 氨肽酶H(Aminopeptidase H,APH))是生物组织内一种常见的氨基内肽酶,但因为天然材料中含量很低,基本无法深入研究其催化机理、功能与结构的关系及其在生物体内的确切功能。从鸡肝组织克隆了APH的全基因序列,并把该序列亚克隆到载体pET22b(+)上,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),构建了APH的表达菌株。该菌株经IPTG诱导,在SDS-PAGE上明显出现一条与天然APH理论分子量一致的新增蛋白带,该条带的浓度随着表达时间的延长逐渐加深;6h基本达到平衡,此时重组蛋白占总蛋白的16.7%,表达水平高达94.7mg/L。对表达产物进行了活性检测、纯化和酶学性质分析,发现重组蛋白在亚基构成,热稳定性,最适pH等方面与天然APH基本相同,据此可以确认表达产物确实是APH,发酵液总活力达到1636u/L。这些结果为APH的催化机理及其在生物体内的功能的阐明奠定了重要的物质基础。
- 赖庆安刘树滔卢菀华陈莉Toshihide NISHIMURA饶平凡
- 关键词：纯化酶活
