赵丹华
- 作品数：10 被引量：32H指数：4
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- GATA1在经p38MAPK信号通路介导表观遗传修饰调控γ珠蛋白基因表达中的作用
- 背景与目的β-蛋白生成障碍性血发病机制及治疗现状β-珠蛋白生成障碍性贫血(β-thalassemia)是世界上最常见的常染色体隐形遗传病之一,其发病机制是β珠蛋白基因的突变或缺失,导致p珠蛋白链合成减少(β+)或完全不能...
- 赵丹华
- 关键词：P38MAPK
- 文献传递
- P38MAPK在黄芪多糖诱导γ珠蛋白基因表达中的作用
- 背景与目的：
β-珠蛋白生成障碍性贫血(β-thalassemia，β-地贫)是一种常见的单基因遗传病，是由于β-珠蛋白基因突变或缺失，使β-珠蛋白链合成障碍，导致相对过剩的α-肽链形成包涵体沉积于细胞膜上，引起红...
- 赵丹华
- 关键词：障碍性贫血K562细胞黄芪多糖红细胞生成素
- 文献传递
- p38磷酸化与K562细胞红系分化的关系被引量：5
- 2008年
- 目的探讨p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38MAPKs)信号通路直接持续活化在γ-珠蛋白基因转录激活和胎儿血红蛋白(HbF)合成中的作用,为阐明p38磷酸化与K562细胞红系分化的关系提供直接依据。方法经脂质体介导将pCDNA 3.1-MKK3(Glu)和pCDNA3.1-MKK3(Ala)重组质粒转染人红白血病细胞株K562,经G418筛选,反转录(RT)-PCR和Western blot鉴定获得p38持续高磷酸化和低磷酸化的稳定细胞株K562-MKK3(Glu)和K562-MKK3(Ala)。通过RT-PCR和联苯胺染色观察不同细胞模型中γ-珠蛋白基因的表达和HbF的合成。采用SPSS 11.5软件进行统计学分析。结果不同细胞模型中p38mRNA和蛋白水平表达均无明显变化。但与K562亲本细胞、K562-vect和K562-MKK3(Ala)细胞比较,K562-MKK3(Glu)细胞中p38蛋白磷酸化水平、γ-珠蛋白表达均显著增加。联苯胺染色结果显示,K562亲本细胞、K562-vect、K562-MKK3(Ala)、K562-MKK3(Glu)和SB203580处理的K562-MKK3(Glu)细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±1.4)%、(3.7±1.2)%、(2.8±0.9)%、(32.6±5.3)%和(7.8±2.3)%(q=7.56P<0.01)。结论p38MAPKs信号通路直接持续活化可激活γ-珠蛋白基因的转录,并促进HbF的合成。p38磷酸化在K562细胞红系分化中起重要作用。
- 付素珍钱新华杨敏赵丹华
- 关键词：珠蛋白生成障碍性贫血胎儿血红蛋白
- 黄芪多糖诱导K562细胞γ-珠蛋白基因表达被引量：8
- 2009年
- 目的探讨黄芪多糖(APS)对K562细胞γ-珠蛋白基因表达的诱导作用。方法以K562细胞为模型,以APS诱导的细胞为实验组,未加药细胞为空白对照,丁酸钠(NaB)处理的细胞为阳性对照,分别用联苯胺染色和RT-PCR分析联苯胺染色阳性率、Aγ-和Gγ-珠蛋白基因mRNA表达水平。结果(1)与空白对照组相比,300mg/LAPS诱导48h后联苯胺染色阳性率由(4.37±0.58)%升高至(15.67±1.80)%(P<0.05)。300mg/LAPS诱导K562细胞48h的联苯胺染色阳性细胞总数为(60.40±6.33)×102,与NaB组(42.02±16.42)×102相比差异有显著性意义(P<0.05)。(2)与空白对照组相比,300mg/LAPS诱导48hAγ和Gγ珠蛋白基因mRNA表达分别增加3.59±0.16倍和5.02±0.81倍(P=0.000)。结论APS可诱导K562细胞Aγ和Gγ珠蛋白基因mRNA表达增强,具有治疗β-珠蛋白生成障碍性贫血的潜能。
- 黄为民钱新华赵丹华
- 关键词：黄芪多糖Β-珠蛋白生成障碍性贫血K562细胞丁酸钠
- 丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达的诱导作用及机制被引量：2
- 2008年
- 目的:研究丁酸钠对K562细胞系γ珠蛋白基因表达和胎儿血红蛋白合成的诱导作用及机制。方法:以丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72h的K562细胞为实验组,设K562亲本细胞和SB203580(10μmol/L)处理1h后用丁酸钠(0.5 mmoL/L)诱导72h的K562细胞为阴性对照组,设羟基脲(100μmol/L)诱导72h的K562细胞为阳性对照。分别提取细胞总RNA和总蛋白。采用RT-PCR、Western blotting和联苯胺染色方法检测γ珠蛋白基因、胎儿血红蛋白和p38表达及p38磷酸化水平。结果:与K562亲本细胞和SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞相比,丁酸钠诱导的K562细胞中G-γ珠蛋白、A-γ珠蛋白和胎儿血红蛋白的表达均明显上调(P<0.05),p38 mRNA和蛋白水平表达均无明显变化(P>0.05),但p38蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05)。K562亲本细胞、SB203580处理后丁酸钠诱导的K562细胞和丁酸钠诱导的K562细胞中联苯胺阳性细胞百分率分别为(3.2±0.4)%、(12.7±0.2)%和(36.3±0.8)%(P<0.05)。结论:丁酸钠可以诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因、合成胎儿血红蛋白,p38MAPKs的激活在丁酸钠诱导K562细胞高表达γ珠蛋白基因中发挥重要作用。
- 付素珍钱新华杨敏赵丹华
- 关键词：地中海贫血丁酸钠胎儿血红蛋白K562细胞系
- 黄芪多糖对K562细胞胎儿血红蛋白合成和细胞增殖的影响被引量：8
- 2009年
- 目的探讨黄芪多糖(APS)对K562细胞胎儿血红蛋白(HbF)合成和细胞增殖的影响。方法以K562细胞为模型,不同质量浓度APS(150、300、450 mg/L)诱导的细胞为实验组,丁酸钠(NaB)诱导的细胞为阳性对照,分别用Western blot和锥虫蓝拒染法计数分析HbF表达水平和对K562细胞增殖的影响。结果1.剂量效应:150、300和450 mg/L APS分别诱导K562细胞48 h,HbF合成增强(F=310.476 P=0),分别增加至未加药组的(1.56±0.03)、(1.78±0.04)和(1.51±0.32)倍,诱导前后有显著性差异。300 mg/LAPS组诱导时HbF合成最强(P=0.005)。2.时间效应:300 mg/LAPS诱导K562细胞后HbF合成逐渐增加,峰值在48～60 h,为未加药组的(2.10±0.19)倍(P=0),以后逐渐下降。与NaB组[(2.88±0.27)倍]比较,APS诱导K562细胞HbF合成有显著性差异(P=0)。3.APS对K562细胞的增殖作用:不同质量浓度(150、300和450 mg/L)APS和0.5 mmol/L NaB对K562细胞生长的影响不同(F=297.078 P=0)。APS的抑制作用随质量浓度升高而增强,但均弱于NaB(P=0.001)。APS和NaB各诱导K562细胞48 h抑制率分别为20.45%和79.55%,有显著性差异(P=0);诱导72 h抑制率分别为38.46%和90.11%,有显著性差异(P=0)。结论APS可诱导K562细胞HbF合成增加,其对K562细胞增殖的抑制作用较NaB弱。
- 黄为民钱新华赵丹华阳勇
- 关键词：Β-珠蛋白生成障碍性贫血K562细胞黄芪多糖
- 黄芪不同提取物对K562细胞向红系分化的诱导作用研究被引量：14
- 2008年
- 目的探讨黄芪不同提取物对K562细胞向红系分化的影响。方法用超声醇提水提法从黄芪根中获取富含黄芪总苷(AST)的醇溶部分和富含黄芪多糖(APS)的水溶部分并分别作用于K562细胞,联苯胺染色法观察K562细胞向红系分化的情况,MTT法测定细胞活性。以丁酸钠(BA)处理的K562细胞作为阳性对照。结果以不同浓度(1、2、4、8mg/ml)APS作用于K562细胞后显示其有诱导后者向红系分化的作用,以4mg/ml为最适浓度,而AST诱导作用不明显。4mg/ml APS、AST及0.5mmol/L BA作用后K562细胞的联苯胺染色阳性率(BZ%)峰值分别为13.2%、2.9%及17.5%。以4mg/ml APS作用于K562细胞24、48、72h后,其BZ%显著低于同时点BA组(P<0.01),但72、96h的联苯胺染色阳性细胞总数明显高于BA组(P<0.01)。MTT测定结果显示,APS、AST对K562细胞的生长无明显抑制作用,而BA对细胞生长有明显抑制作用(P<0.01)。结论黄芪可诱导K562细胞向红系分化,其有效成分在富含多糖的水溶部分(APS),以4mg/ml浓度的诱导作用最强。黄芪提取物对K562细胞的生长无明显抑制作用。
- 杨敏赵丹华钱新华
- 关键词：K562细胞红细胞细胞分化
- 丁酸钠诱导K562细胞红系分化基因表达谱分析被引量：1
- 2009年
- 目的分析丁酸钠(NaB)诱导K562细胞后的差异表达基因,筛选出与红系分化相关基因,探索NaB的作用机制。方法应用Affymetrix公司的人类全基因组HG-U133Plus2芯片,检测0.5mmol/LNaB诱导K562细胞48h的珠蛋白基因变化及差异表达基因,筛选出与红系分化相关基因。应用反转录(RT)-PCR检测ε、γ、β、δ4个珠蛋白基因及2个红系分化相关基因KLF1及KLF3的表达,验证基因芯片结果。结果表达谱基因芯片结果分析显示:总探针组54675个芯片中,阳性表达数23175(42.4%),阴性表达数30693(56.1%)。信号比对数值(SLR)结果显示,表达上调(SLR>1)433个,包含340个不同的基因;表达下调(SLR<-1)171个,包含144个不同的基因。生物学功能分类发现所涉及的基因主要包括参与细胞及大分子代谢、细胞信号、生物学调节、细胞发育及细胞增殖等。7个珠蛋白中ε、Aγ、Gγ、β、δ珠蛋白基因表达均上调,而α及ζ珠蛋白基因无明显改变;表达上调或下调且与红系分化相关的有ALAS2、EGR1、LMO2、RUNX1、KIT、GYPA、GATA-2、KLF1及KLF3等29个基因。RT-PCR验证基因芯片结果可靠。结论NaB诱导K562细胞向红系分化;NaB可能通过调节ALAS2、EGR1、LMO2、RUNX1、KIT、GYPA、GATA-2、KLF1及KLF3等与红系分化相关的基因调控γ珠蛋白合成。
- 杨敏钱新华付素珍赵丹华
- 关键词：丁酸钠K562细胞红系分化
- 染色质免疫共沉淀分析丁酸钠对γ珠蛋白基因启动子组蛋白乙酰化的作用被引量：4
- 2010年
- 目的建立基于Real-time PCR分析的染色质免疫共沉淀(ChIP)方法,探讨丁酸钠对γ-珠蛋白基因启动子区组蛋白乙酰化的作用。方法将K562细胞分为0.5 mmol/L丁酸钠处理48 h组和K562细胞组,每组取1×107细胞用实验。采用抗乙酰化组蛋白H3及H4抗体分别对两组细胞进行ChIP,荧光定量PCR分析不同处理细胞Gγ-、Aγ-珠蛋白基因启动子区乙酰化H3和H4(acH3,acH4)水平。结果各细胞组组内Gγ-和Aγ-珠蛋白基因启动子区域acH3、acH4水平高于阴性对照necdin基因。与K562细胞相比,NaB处理组Gγ-珠蛋白基因启动子区acH3和acH4水平分别升高3.1和2.6倍,Aγ-珠蛋白基因启动子区acH3和acH4水平分别升高3.7和3.2倍(P<0.01)。结论建立了基于荧光定量PCR分析的ChIP技术用于研究珠蛋白基因启动子区域组蛋白的表观遗传修饰,并进一步证实了丁酸钠对γ-珠蛋白基因启动子区域组蛋白乙酰化的作用。
- 陈剑锋钱新华赵丹华千新来
- 关键词：丁酸钠组蛋白乙酰化
- 丁酸钠对K562细胞γ-珠蛋白基因启动子组蛋白磷酸化的影响被引量：4
- 2010年
- 目的探讨丁酸钠(NaB)对K562细胞Gγ-珠蛋白基因和Aγ-珠蛋白基因启动子区域组蛋白H3磷酸化/乙酰化(ph/acH3)的影响。方法将K562细胞按不同处理方法分为2组,即0.5 mmol.L-1NaB处理48 h的K562细胞组[K562(NaB)组]和K562亲本细胞组(K562组)。采用半定量RT-PCR测定Gγ-珠蛋白和Aγ-珠蛋白mRNA水平,采用基于Real time PCR分析的染色质免疫共沉淀(ChIP)方法分析不同处理细胞Gγ-珠蛋白和Aγ-珠蛋白基因启动子区域ph/acH3水平。结果与K562组细胞比较,K562(NaB)组细胞Gγ-珠蛋白mRNA、Aγ-珠蛋白mRNA的相对水平分别升高1.4倍(t=-149.022,P=0.000)和1.2倍(t=-13.363,P=0.000)。与K562组比较,K562(NaB)组细胞Gγ-珠蛋白和Aγ-珠蛋白基因启动子区ph/acH3水平分别升高了2.9倍(t=-12.833,P=0.006)和3.2倍(t=-10.484,P=0.000)。K562(NaB)组细胞Gγ-珠蛋白和Aγ-珠蛋白基因启动子片段的%In-put值分别比Necdin基因升高10.0倍(P=0.000)、9.5倍(P=0.000);K562组细胞的Gγ-珠蛋白和Aγ-珠蛋白基因启动子片段的%Input值分别比Necdin基因升高3.2倍(P=0.000)、2.7倍(P=0.000)。结论 NaB可促使γ-珠蛋白基因启动子区域组蛋白H3磷酸化及乙酰化,这一作用途径可能是NaB诱导K562细胞γ-珠蛋白基因表达的机制之一。
- 陈剑锋钱新华赵丹华千新来
- 关键词：丁酸钠组蛋白磷酸化乙酰化
