马长剑 作品数:15 被引量:68 H指数:5 供职机构: 宁夏医科大学检验学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 宁夏回族自治区自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
同型半胱氨酸引起平滑肌细胞LDLR启动子区DNA甲基化改变的位点分析 被引量:5 2012年 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)引起平滑肌细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)启动子区DNA甲基化改变的特点及机制。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs)并鉴定,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy干预,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测LDLR甲基化改变,甲基敏感性限制性内切酶HpaII和BssHII分析LDLR DNA甲基接受能力。结果 50、100、200、500μmol·L-1Hcy组平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化(P<0.05),经限制性内切酶HpaII消化后,LDLR启动子区C↓CGG序列被酶切,经限制性内切酶BssHII消化后,LDLR启动子区GC↓GCGC序列被酶切,与对照组比较,DNA甲基接受能力下降,其中HpaII引起的效果更明显。结论 Hcy可使平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化的效应偏重于一般的CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小。 杨安宁 王菊 杨晓玲 马长剑 孙炜炜 马胜超 王磊 徐华 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 低密度脂蛋白受体 DNA甲基化 平滑肌细胞 同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞周期及P27和CyclinA表达的影响 被引量:6 2011年 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)生长周期的变化特点及P27和细胞周期素A(CyclinA)表达的影响。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、200、500 uM)、叶酸治疗组(Hcyl00 uM+叶酸30 uM),总计6组。以MTT检测VSMCs的增殖率,流式细胞仪测定细胞周期,R T-PCR和Western blotting测定P27和CyclinA基因mR NA及蛋白水平。结果不同浓度Hcy干预的VSMCs与空白对照组和叶酸治疗组相比:随着Hcy浓度的增加VSMCs增殖率增加,处于S及G0/M期的VSMCs比例亦逐渐增加;RT-PCR和Western blotting显示CyclinA mR NA与蛋白表达逐渐增加,P27 mRNA与蛋白表达逐渐降低;叶酸治疗组与空白对照组比所有结果均无明显变化。结论Hcy可通过调节P27和CyclinA mR NA水平,影响细胞周期各时相分布,从而促进VSMCs的增殖;叶酸对Hcy有拮抗作用。 于海娇 马琳娜 徐支芳 孙炜炜 巩慧慧 马长剑 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 平滑肌细胞 细胞周期 P27 CYCLINA 内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化调控同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的作用机制 目的:探讨内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用机制。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,加入0、50、100、200、500μmol/L同型半胱氨酸和100μmol/L同型半胱氨酸+... 姜怡邓 孙炜炜 马胜超 王菊 巩慧慧 马长剑凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1甲基化在同型半胱氨酸作用下对人内皮细胞存活的影响 被引量:5 2013年 目的 :探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)对动脉粥样硬化过程中降低内皮细胞存活率的作用机制研究。方法 :按不同浓度的Hcy对人脐静脉内皮细胞作用分组:对照组(0μM Hcy)、50μM Hcy组、100μM Hcy组、200μM Hcy组和500μM Hcy组;②100μM Hcy+30μM维生素B12+30μM叶酸组(拮抗剂组),各组(n=5)培养液孵育72 h后,采用3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-2苯基溴化四氮唑蓝试验检测Hcy对内皮细胞活性的影响;用分光光度比色法检测各组细胞中过氧化氢;酶免法检测氧化低密度脂蛋白、甲基转移酶-1(DNMT-1)含量;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测LOX-1和DNMT-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法测LOX-1蛋白的表达;巢式降落式PCR法测LOX-1基因甲基化的改变。结果 :同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞存活率的影响:拮抗剂组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。100、200、500μMHcy组与对照组比较:氧化低密度脂蛋白和过氧化氢的含量、LOX-1信使核糖核酸(mRNA)相对甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达量及LOX-1蛋白相对β-肌动蛋白表达量均增加;DNMT-1的含量和mRNA表达、LOX-1基因甲基化程度均降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 :LOX-1低甲基化可能是Hcy致内皮细胞损伤的重要机制之一,其中过氧化氢、氧化低密度脂蛋白和DNMT-1可能起了重要的作用。 马胜超 孙炜炜 巩慧慧 马长剑 王菊 田珏 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 甲基化 人脐静脉内皮细胞 凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1 氧化低密度脂蛋白与高密度脂蛋白比值在同型半胱氨酸致ApoE-/-鼠动脉粥样硬化中的意义 被引量:10 2013年 目的探讨ox-LDL/HDL在同型半胱氨酸(Hcy)致ApoE-/-鼠动脉粥样硬化(AS)中的意义。方法选用SPF级5周龄雄性ApoE-/-小鼠为研究对象,随机分为3组:对照组,高蛋氨酸组,folic acid and VitB12干预组。所有小鼠喂养14周后处死,进行后续实验。行主动脉病理切片HE染色;全自动生化分析仪检测血清Hcy、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)含量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ox-LDL含量。结果与对照组比较,高蛋氨酸组与folic acid and VitB12干预组动脉粥样硬化斑块面积不同程度的增大,高蛋氨酸组ApoE-/-小鼠主动脉内膜见灶性病变部位隆起并突入动脉腔内,富含粥样坏死物质。高蛋氨酸组血清Hcy、LDL、TC和ox-LDL均升高,血清HDL含量减少,LDL/HDL、TC/HDL及ox-LDL/HDL升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);叶酸与维生素B12可以改善高蛋氨酸所致的改变。血清Hcy浓度与LDL/HDL比值(γ=0.4938,P<0.05)、TC/HDL比值(γ=0.4474,P<0.05)及ox-LDL/HDL比值(γ=0.5434,P<0.05)均呈正相关。结论 ox-LDL/HDL比值更能预测和反映Hcy诱导AS形成及进展程度,在探索防治AS途径中更有价值。 王菊 杨安宁 孙炜炜 巩慧慧 马胜超 马长剑 姜怡邓关键词:动脉粥样硬化 同型半胱氨酸 生物信息学在动脉粥样硬化特异性miRNA筛选中的应用研究 被引量:2 2013年 目前,生物信息学数据在分子生物学发展的基础上呈现较快的增长速度,因此动脉粥样硬化相关基因及转录后调控检测就显得异常重要。本研究以miRBase作为miRNA信息的主要来源,以Access作为数据库管理系统平台,运用生物信息学预测网站、软件miRanda,TargetScan,Pictar、microTar进行预测筛选。实际操作中,对引起动脉粥样硬化的三大学说中关键基因进行生物信息学预测、搜索,初步发现动脉粥样硬化中特异性miRNA,为临床动脉粥样硬化检测提供了较好的查询平台。 马长剑关键词:生物信息学 动脉粥样硬化 LDLR启动子区DNA甲基化调控同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制 被引量:3 2012年 目的探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)在同型半胱氨酸(Hcy)致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用机制。方法原代培养VSMCs,用50、100、200及500μmol/L Hcy干预72 h;MTT法观察VSMCs增殖的活性,ELSIA法和同位素法分别检测VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性;实时定量PCR和巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测LDLR的表达和启动子区DNA甲基化的状态。结果随着Hcy浓度的增加,VSMCs中ox-LDL含量和DNA甲基转移酶活性明显增加,而VSMCs增殖活性下降,同时LDLR mRNA表达增高,且LDLR基因启动子区呈低甲基化状态,与对照组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论 LDLR基因启动子区DNA低甲基化致LDLR表达增高可能是Hcy引起VSMCs损伤的重要机制之一。 姜怡邓 孙炜炜 马长剑 王菊 马胜超 巩慧慧 梁宇关键词:低密度脂蛋白受体 同型半胱氨酸 血管平滑肌细胞 高同型半胱氨酸血症通过线粒体损伤及p53依赖的凋亡途径诱导ApoE~/(-//-/)鼠心肌损伤 目的观察高同型半胱氨酸血症/(Hyperhomocysteinemia, HHcy/)对心肌损伤的影响,进一步探讨与心肌损伤有关的活性氧簇(ROS)、线粒体DNA缺失、p53蛋白及其下游凋亡蛋白/(Bax、 Bcl-2和... 马长剑关键词:高同型半胱氨酸血症 心肌损伤 线粒体损伤 文献传递 同型半胱氨酸致内皮细胞、平滑肌细胞和泡沫细胞低密度脂蛋白受体DNA甲基化的比较研究 被引量:2 2011年 目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞、平滑肌细胞以及泡沫细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化的影响。方法原代培养内皮细胞、人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞源性泡沫细胞,用0、50、100、200和500μM Hcy干预后培养72 h,提取基因组DNA,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法分别检测3种细胞中LDLR DNA甲基化修饰状态的变化,以观察Hcy对不同细胞LDLR的作用和影响。结果内皮细胞、VSMCs与不同浓度Hcy培养72 h后,LDLR基因启动子区DNA呈高甲基化改变,泡沫细胞LDLR启动子区DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且以50或100μM Hcy组最明显。结论 Hcy对不同细胞LDLR启动子区DNA甲基化的影响有差异性,提示可能存在更深层次的机制。 孙炜炜 马琳娜 徐支芳 马长剑 王菊 巩慧慧 姜怡邓关键词:低密度脂蛋白受体 DNA甲基化 同型半胱氨酸 枸杞多糖对泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激作用机制的研究 被引量:1 2012年 目的研究枸杞多糖(LBP)对单核细胞源性泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激的作用机制。方法原代培养单核细胞源性泡沫细胞后,用50、100、200μg.mL-1 LBP孵育72 h,油红O染色法检测泡沫细胞的数量;用荧光分光光度法分析细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量;用酶联免疫吸附法检测细胞中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及内质网应激蛋白(Grp78,CHOP,Xbp-1)的含量。结果 LBP可减少泡沫细胞的形成和细胞内TC、FC、CE的含量,同时可降低细胞内ox-LDL与内质网应激蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论 LBP通过降低ox-LDL及内质网应激蛋白的含量引起泡沫细胞内胆固醇的含量下降从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。 姜怡邓 马胜超 杨安宁 马长剑 阮建桥 王树人关键词:枸杞多糖 氧化低密度脂蛋白 泡沫细胞 泡沫化 胆固醇酯