高得勇
- 作品数：18 被引量：39H指数：4
- 供职机构：上海交通大学附属第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市卫生局青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- UⅡ/UT系统对LPS刺激枯否细胞固有免疫炎症信号通路TLR4-IRF3的影响被引量：5
- 2014年
- 目的:探讨UrotensinⅡ(UⅡ)/UT系统对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激枯否细胞(Kupffer cell,KC)固有免疫炎症信号通路Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-干扰素调节因子3(Interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法:体外分离培养大鼠肝KCs,KCs培养上清液促炎性细胞因子IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平采用ELISA分析检测,细胞表面TLR4的表达采用流式细胞技术分析,IRF3基因和蛋白表达情况分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测。结果:LPS刺激后,KCs培养上清液IL-6、IFN-β和IFN-γ分泌水平、细胞表面TLR4表达阳性细胞率及细胞内IRF3 mRNA表达水平均显著升高,UT拮抗剂urantide预处理抑制了LPS刺激诱导KCs对上述分子的上调表达;LPS的应用也造成了KCs胞核内IRF3蛋白表达水平升高,而使胞浆内IRF3蛋白表达水平降低,urantide预处理后,抑制了LPS诱导KCs核内IRF3蛋白上调和胞浆水平下调。结论:UⅡ/UT系统通过对TLR4-IRF3通路的正性调控作用,介导了或至少部分介导了LPS刺激KCs的免疫性炎症分泌效应。
- 涂文娟汪小庭刘亮明朱彤梁冬雨杨志文高得勇
- 关键词：枯否细胞炎症URANTIDE干扰素调节因子3
- UⅡ／UT 系统对 LPS 刺激枯否细胞炎症信号通路分子 p38 MAPK 和 NF-κB 的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨urotensinⅡ（ UⅡ）/urotensinⅡ特异性受体（ UT ）系统对脂多糖（ lipopo-lysaccharide， LPS）刺激肝枯否细胞（Kupffer cell， KC）炎症信号通路分子p38丝裂原活化蛋白激酶（ p38 mitogen-activated protein kinase ， p38 MAPK）和核因子-κB（ nuclear factor-κB， NF-κB）的影响。方法采用胶原酶灌注消化和密度梯度离心分离大鼠枯否细胞。将细胞随机分成6组，各组细胞处置方法如下：1组：UⅡ（-）urantide（-）LPS（-）；2组：UⅡ（＋）urantide（-）LPS（-）；3组：UⅡ（-）urantide （＋）LPS（-）；4组：UⅡ（-）urantide（-）LPS（＋）；5组：UⅡ（＋）urantide（-）LPS（＋）；6组：UⅡ（-）uran-tide（＋） LPS（＋）。 p38 MAPK/p-p38 MAPK蛋白、NF-κB p65亚基表达水平采用Western blot分析方法检测；NF-κB与DNA结合活性采用凝胶迁移阻滞（EMSA）分析检测。结果各组KC核内p38 MAPK蛋白的表达水平无明显差异（P均＞0．05）；LPS刺激KC（4～6组）核内p38 MAPK蛋白磷酸化和p65蛋白表达水平以及NF-κB与DNA分子结合活性较正常对照组（1组）均明显升高（P均＜0．01），UⅡ（2组）或UT（3组）处理KC核内上述蛋白质的表达和活性水平与1组相比无明显统计学差异（ P＞0．05），而UT预处理（6组）组则较4组显著降低（P＜0．01）。结论 UⅡ/UT系统参与了LPS刺激KC炎症信号通路分子p38 MAPK和NF-κB的激活。
- 梁冬雨叶长根赵亮于芳苹涂文娟高得勇杨志文刘亮明
- 关键词：UTURANTIDE枯否细胞NF-ΚB
- 抗结核药物肝毒性对血浆miRNA分子表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨抗结核药物肝毒性(ATDH)对患者血浆中微RNA(miRNA)分子表达的影响。方法对3例活动性肺结核患者用药前和发生ATDH后的血浆标本进行miRNA芯片检测。对存在差异性表达的miRNA分子,采用Real Time-PCR进行验证。应用互联网miRNA靶基因预测软件对经证实存在差异性表达的miRNA进行靶基因预测,采用PANTHER蛋白分类系统查找靶蛋白基因本体(GO)功能分类。结果 ATDH发生后,血浆中共筛选出22个与用药前比较差异性表达的miRNA分子,表达上调和下调的miRNA各11个。Real Time-PCR验证结果显示:ATDH发生后,患者血浆中显著上调的miRNA有5个,分别为miR-378i、miR-125b-5p、miR-1224-5p、miR-194-5p和miR-34a-5p;下调的miRNA有3个,分别为miR-1260a、miR-338-3p和miR-4286。结论 ATDH发生患者血浆中存在与用药前比较差异性表达的miRNA分子,这些分子的存在可能与ATDH的发生有关。
- 叶长根谢平刘亮明白茹陈彩萍朱伟星赵晖王迎迎汪妍妍吴剑琴高得勇徐国荣夏利萍
- 关键词：抗结核药物肝毒性微RNA
- 病毒性肝炎临床分型与病理诊断分析被引量：6
- 2005年
- 目的探讨病毒性肝炎临床分型与病理诊断符合情况。方法对38例病毒性肝炎患者,采用快速穿刺活体肝组织病理检查。结果临床与病理诊断的符合率为78.9%。结论病毒性肝炎临床与病理诊断存在差距,对临床表现不典型而病理改变显著者,需进行治疗观察和多次肝穿随访。
- 张玉臣高得勇孙洁
- 关键词：病毒性肝炎肝活检组织病理检查临床分型临床表现不典型诊断符合情况
- 抗结核药物肝毒性患者血浆microRNA分子差异性表达分析
- 目的探讨抗结核药物肝毒性(ATDH)患者血浆差异性表达的miRNA分子,并分析其调控的靶基因与功能。方法采集3名ATDH和3名抗结核治疗无肝损伤(非ATDH)患者血浆标本,进行miRNA芯片检测。对存在差异性表达的miR...
- 刘亮明高得勇王迎迎徐国荣陈彩萍谢平朱伟星白茹赵晖吴剑琴夏利萍汪妍妍
- Urantide对急性肝衰竭小鼠肝组织中IRF3表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨urotensinⅡ(UⅡ)受体拮抗剂urantide对急性肝衰竭小鼠肝组织干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)表达的影响.方法:♂Balb/c小鼠随机分为4组(每组6只).A组:健康对照组;B组:预处理对照组;C组:模型组;D组:预处理模型组.预处理组给予0.6 mg/kg urantide尾静脉注射.30 min后模型(包括预处理模型)组立即以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)联合D-半乳糖胺(D-galactosamin,D-GalN)腹腔注射诱导急性肝衰竭.LPS/D-GalN攻击12 h后采集小鼠肝组织标本.采用RT-PCR和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测小鼠肝组织中IRF3mRNA表达水平,免疫印迹(Western blot)检测IRF3蛋白表达含量.结果:C组小鼠肝组织中IRF3 mRNA经RTPCR和Real-time PCR检测,其相对表达水平显著高于A组和B组(均P<0.001),D组显著低于C组(均P<0.001),而A和B组之间无明显差异(P>0.05);C组IRF3蛋白表达水平显著高于A组和B组(均P<0.001),D组显著低于C组(P<0.001),而A和B组之间无明显差异(P>0.05).结论:UⅡ受体特异性拮抗剂urantide可抑制LPS/D-GalN诱导ALF小鼠肝组织IRF3 mRNA和蛋白质表达.
- 汪小庭涂文娟刘亮明梁冬雨于芳苹赵亮叶长根杨志文高得勇
- 关键词：急性肝衰竭URANTIDE干扰素调节因子3小鼠
- 抗结核药物肝损伤与无肝损伤患者化疗前血循环miRNA分子的差异性表达被引量：1
- 2014年
- 目的:研究抗结核药物肝毒性(anti-tuberculosis drug-induced hepatotoxicity,ATDH)与非ATDH患者化疗前血浆差异性表达的miRNA分子,为ATDH易感者筛检提供新的生物学指标.方法:采用miRNA芯片检测ATDH及对照患者化疗前血浆标本.对存在差异表达趋势的25种miRNA分子,采用高通量实时荧光定量PCR进行分析验证.应用互联网上miRNA靶基因预测软件对表达上调的miRNA进行靶基因预测,并采用PANTHER tool查找靶蛋白GO功能分类.结果:与对照组相比,ATDH患者化疗前血浆中共检出7个差异性表达的miRNA分子,其中表达上调的miRNA有4个,包括miR-4284、miR-3620、miR-652-5p和miR-4800-5p;表达下调的miRNA有3个,包括miR-338-3p、miR-424-5p和miR-194-5p.结论:ATDH患者化疗前血浆内存在差异性表达的miRNA分子,其中表达上调的miRNA分子(特别是miR-4284)可能作为ATDH易感者筛检的生物学指标.
- 叶长根孙水林白茹朱伟星陈彩萍谢平赵晖涂文娟高得勇刘亮明
- 关键词：肝毒性
- 丙型肝炎病毒1b型F蛋白抗原和抗体特异性表达的研究被引量：2
- 2016年
- 目的研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)1b型F蛋白抗原在慢性HCV感染者中产生的特异性抗原和抗体的表达并检测其流行率。方法应用人工合成HCV 1b型的双框移动F蛋白多肽,采用ELISA方法,对其在慢性HCV感染者中F蛋白的流行率进行分析;合成并纯化抗HCV 1b型F蛋白的抗体,采用Western blot方法验证抗体的特异性,包被纯化的F蛋白的特异性抗体,检测慢性HCV患者血清中F蛋白抗原的表达及其流行率。结果 HCV 1b型F蛋白的抗体在32例HCV 1b型慢性感染者中有19例可以检测到抗体的表达,其流行率为59.38%,而非HCV 1b型慢性感染者、健康对照及慢性HBV感染者中未检测到HCV 1b型F蛋白的抗体,其流行率为0;Western blot方法鉴定了人工合成的HCV 1b型F蛋白抗体的特异性及纯度;ELISA方法检测32例HCV 1b型感染者中有6例检测到HCV 1b型F蛋白抗原的表达(18.75%),而非HCV 1b型慢性感染者、健康对照及慢性HBV感染者中未检测到HCV 1b型F蛋白抗原的表达。结论丙型肝炎病毒F蛋白抗体的产生具有型免疫特异性的特点,不同基因型F蛋白产生的抗体不同,且慢性HCV感染者中有F蛋白抗原的特异性表达。
- 高得勇娄小丽王迎迎汪妍妍徐国荣吴剑琴夏利萍刘亮明
- 关键词：丙型肝炎病毒抗原抗体特异性表达
- 丙型肝炎病毒F蛋白和C蛋白克隆表达及纯化
- 目的:丙型肝炎病毒F蛋白是近年来在感染丙型肝炎病毒的病人血清中发现的一种蛋白,是由 HCV核心蛋白(Core)翻译时核糖体读码框移位而产生的。本课题在大肠杆菌中诱导表达1b型HCV F 蛋白及核心蛋白并纯化鉴定,为进一步...
- 高得勇张欣欣侯刚徐念沁金根娣张东华陆志檬
- 文献传递
- 原发性胆汁性肝硬化血浆microRNA 表达谱的初步分析被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者血浆微小RNA（miRNA）的表达及临床意义.方法 采用随机对照研究的方法,收集上海松江中心医院2010年12月至2013年1月就诊的19例PBC患者的血浆,同时收集了性别年龄与PBC患者相匹配的10名健康体检者和10例病毒性肝炎患者的血浆,从中选取3例PBC患者和3名健康体检者,应用芯片技术进行miRNA表达谱筛选.针对筛选出有表达差异的miRNA,采用荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对收集的3组标本进行验证,统计学分析和绘制受试者工作曲线（ROC）评估差异miRNA的临床价值.结果 芯片结果显示PBC组与对照组共有16个差异表达miRNA.qRT-PCR验证发现,与正常组相比,PBC组miRNA-572和miRNA-575表达明显上调（P＜0.05）,miRNA-92a-3p和miRNA-4516表达明显下调（P＜0.05）.而与非PBC肝硬化组相比,PBC组miRNA-92a-3p和miRNA-4516表达下调（P＜0.05）.miRNA-92a-3p在评价PBC组和健康对照组的曲线下面积（AUC）为0.92（0.86～ 1.00）,当最佳临界值为1.26,敏感度92％,特异度80％.miRNA-4516在评价PBC组和健康对照组的曲线下面积为0.89（0.75 ～1.00）,当最佳临界值为1.16,敏感度85％,特异度70％.miRNA-92a-3p和miRNA-4516在鉴别诊断PBC和非PBC肝硬化时曲线下面积分别为0.84 （0.68～0.99）和0.76（0.57 ～0.96）.当miRNA-92a-3p取最佳临界值为1.08,敏感度89％,特异度81％.当miRNA-4516取最佳临界值为1.06,敏感度77％,特异度68％.结论 PBC患者血浆中特异表达的miRNA对PBC诊断及鉴别诊断的具有潜在临床应用价值.
- 梁冬雨高得勇娄晓丽侯彦强
- 关键词：微RNAS
