刘相国
- 作品数：8 被引量：32H指数：4
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- Ⅰ棉铃从颗粒体病毒增效蛋白基因克隆及表达的研究Ⅱ霍乱毒素B亚单位与乙肝表 面抗原表位融合基因的构建及原核表达
- 昆虫病毒增效蛋白是能提高核多角体病毒和苏芸金杆菌制剂感染率和死亡率的一类蛋白,在农业生产上具有广阔的应用前景研究昆虫病毒增效蛋白的体外表达对寻找的抗虫源和抗虫策略具有重要的理论意义和应用价值.
- 刘相国
- 关键词：颗粒体病毒增效蛋白基因克隆
- 文献传递
- 棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因克隆及在大肠杆菌中表达被引量：13
- 2000年
- 用PCR技术从棉铃虫颗粒体病毒基因组中扩增得到增效蛋白基因DNA序列。PCR产物酶切后克隆至 pBluescript质粒中 ,核苷酸序列测定表明 ,有 8个核苷酸、5个氨基酸与Genbank发表的序列不同。继而构建了表达质粒 pET 30a En ,诱导后经SDS PAGE和West ernblot检测 ,表明获得了增效蛋白基因在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中包涵体形式的特异表达。生物测定结果表明 ,初步纯化的重组增效蛋白具有明显的增效活性 ,可提高棉铃虫核多角体病毒对 3龄幼虫致死率 31 7% - 34 1 %。重组增效蛋白的获得对研究其增效机理及构建新型杀虫剂提供了条件。
- 刘相国杨恭邱并生田波
- 关键词：增效蛋白基因克隆大肠杆菌
- 乙肝表面抗原a表位粘膜疫苗的构建及免疫原性检测被引量：2
- 2001年
- 利用DNA重组技术 ,构建霍乱毒素B亚单位与乙肝病毒表面抗原a表位的融合基因 ,并在大肠杆菌表达体系pET 30a BL2 1 (DE3)中获得以包涵体形式的高效表达。免疫印迹表明表达产物具有免疫学活性 ,包涵体复性后 ,表达产物能够象CTB那样形成五体 ,以腹腔注射、灌胃。
- 刘相国杨恭邱并生田波
- 关键词：CTB融合蛋白ELISA
- 过碘酸盐氧化法制备固相载体除抗非目的蛋白抗体
- 2001年
- Sephacryl凝胶经过碘酸盐氧化将产生醛基 ,非目的蛋白通过氨基与醛基反应结合到凝胶上制备固相载体。装柱后 ,抗体经过长时间循环上样 ,抗非目的蛋白的抗体被吸收 ,抗体得到了纯化。用经本法处理过的抗体做免疫印迹 。
- 刘相国杨恭邱并生
- 关键词：抗体免疫印迹抗血清
- 棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因克隆及表达的研究 霍乱毒素B亚单位与乙肝表面抗原表位融合基因的构建及原核表达
- 刘相国
- 关键词：昆虫病毒霍乱乙肝基因克隆增效蛋白
- 烟草花叶病毒及番茄花叶病毒弱毒疫苗N14基因组重组体的构建与侵染性分析被引量：5
- 2000年
- 用基因交换的方法将烟草花叶病毒普通株（中国分离物，ＴＭＶ－Ｃｖ和番茄花叶病毒弱毒疫苗Ｎ１４基因组的运动蛋白（ＭＰ）、外壳蛋白（ＣＰ）基因编码区和３＇非编码区嵌合于Ｎ１４和ＴＭＶ－ＣＶ ５＇非编码区和复制酶基因的下游，构建重组病毒克隆ｐＴＮ和ｐＮＴ，并进行体外转录和烟草侵染试验结果 ｐＴＮ和 ｐＮＴ体外转录物对烟草均具侵染性：前者感染枯斑三生烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ．Ｓａｍｓｕｎ ＮＮ），等量感染的枯斑形成数比 ＰＴＭＶ－Ｃｖ少；感染普通烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｈｕａｎｇｍ－ｉａｏｙｕ，黄苗榆品种），出现典型系统症状，但叶片畸形率较低．后者感染枯斑三生烟，等量感染的枯斑形成数比ｐＮ１４多；感染普通烟仍不出现系统症状．结果表明：重组病毒ＴＮ和ＮＴ仍能在试验用烟草中增殖，前者在普通烟上基本表现为ＴＭＶ－Ｃｖ的强病毒性状，后者在普通烟上表现为Ｎ１４的弱病毒性状； ＴＭＶ－ＣＶ和 Ｎ１４的复制酶与 ＭＰ， ＣＰ和 ３＇非编码区之间为非严紧型连接，两者在类似的各亚基因组之间可进行功能互补．初步推测，Ｎ１４复制酶编码基因的突变区对Ｎ１４的致弱起主要作用；
- 杨恭刘相国邱并生
- 关键词：花叶病毒番茄基因组侵染性
- 烟草花叶病毒(普通株中国分离物)及其弱毒疫苗-N14(番茄株)基因组侵染性cDNA核苷酸全序列测定与分析被引量：8
- 2000年
- 用双脱氧末端终止法对侵染性烟草花叶病毒普通株中国分离物 (TMV vulgar,ChineseIsolate,TMV Cv)和番茄株弱毒疫苗TMV N14(AttenuatedTMVvaccinestrain)基因组cDNAs的核苷酸全序列进行了测定 ,并分析和比较了其基因组的结构和特征。结果表明 :普通株基因组 (Genbank接收号 :AF16 5 190 )为 6 395个核苷酸 ;4个功能性开放阅读框架 (ORF) ,分别编码 12 6kD/ 183kD的复制酶、30kD运动蛋白和 17 6kD外壳蛋白。弱毒疫苗TMV N14基因组 (Genbank接收号 :AF15 5 5 0 7)为 6 384个核苷酸 ;5个功能性ORF分别编码 98 5kD/ 12 6kD/ 183kD的复制酶、2 7kD运动蛋白和 17 6kD外壳蛋白。与参比序列核苷酸和氨基酸序列比较 :普通株核苷酸序列同源率为99 4% ;推断的复制酶与运动蛋白分别有 5个和 2个氨基酸残基不同。TMV N14核苷酸序列同源率为 99 7% ;核苷酸位置 2 6 70～ 2 6 72和 5 6 32～ 5 6 34分别发生乳石 (Opal)突变 (UGA)和赭石 (Ochre)突变 (UAA) ;推断复制酶有13个氨基酸残基发生了变异。
- 杨恭刘相国邱并生
- 关键词：TMV植物病毒
- 棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因5′端截短片段的表达及增效活性测定被引量：11
- 2001年
- 将带有棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白 (HaGVenhancin)基因的重组表达载体 pET 30a En分别用BalⅠ和DraⅠ酶切后连接 ,构建重组表达载体pET 30a Ben和 pET 30a Den ,其外源基因的开放阅读框分别为HaGV增效蛋白基因 5′端的 1 7kb和 2 2kb。IPTG诱导表达产生 66 7kD和 85 1kD的多肽并命名为Ben和Den。初步纯化的Ben和Den显示了对棉铃虫核多角体病毒 (HaNPV)及Bt的增效活性。Ben可对棉铃虫核多角体病毒增效 1 0 5%～2 6 5% ,LT50 缩短 0 9d ,Den增效 1 0 2 %～ 33 0 % ,LT50 缩短 1 2d～ 1 9d。重组增效蛋白可对Bt(1∶2 50 0稀释 )增效 2 0 7%～ 35 4% ,Den增效 1 6 7%～ 31 5% ,Ben增效 1 1 7%～2 7 4%。
- 刘相国杨恭邱并生张克勤田波
- 关键词：颗粒体病毒增效蛋白HANPVBT昆虫病毒
