卜定方
- 作品数：178 被引量：826H指数：14
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自然科学总论更多>>
- 趋化素样因子2(CKLF2)mRNA在不同发育期大鼠心肌中的表达被引量：5
- 2005年
- 目的检测趋化素样因子(CKLF2)mRNA在大鼠从胚胎到成年的各个不同时期的表达。方法应用竞争PCR方法,检测CKLF2mRNA在大鼠胚胎12,18d和出生即刻,3,7和21d乳鼠及成年鼠心室肌的表达。结果与成年大鼠相比,胚胎12d大鼠心肌CKLF2mRNA显著高表达,此后下降,出生时降到较低水平,生后有所增高,成年时表达水平最低。结论CKLF2可能参与大鼠胚胎期心肌细胞的增殖过程和出生后心脏发育过程。
- 任鸿坤洪涛蒋捷龚艳君王志坚卜定方周爱儒
- 关键词：MRNA心肌心肌细胞
- 低强度激光照射诱导大鼠胸主动脉金属硫蛋白的生成被引量：1
- 2003年
- 目的 观察低强度红激光照射对大鼠胸主动脉金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)生成的影响 ,探讨激光照射的细胞保护机制。方法 取 2 4只大鼠的胸主动脉 ,将其制成厚度为 0 5mm的薄片 ,置于含 10 %胎牛血清Krebs Henseleit液 6孔培养板 ,经 95 %O2 ～ 5 %CO2 、3 7℃孵育。设对照组及 3个实验组 ,对照组不照射激光 ,3个实验组分别以功率密度为 3、6和 12J cm2 的 63 2nm波长的激光照射。采用竞争性RT PCR法测定胸主动脉内MT的mRNA水平变化 ,以1 0 9Cd牛血红蛋白饱和法测定MT的含量。结果 3个实验组MT1mRNA水平分别比对照组增加 175 % (P >0 0 5 )、418 6% (P <0 0 5 )和 668.2 % (P <0 0 1) ;MT2mRNA水平分别比对照组增加 163 9(P >0 0 5 )、615 %、(P <0 0 1)和 10 87% (P <0 0 1) ;相应的MT蛋白含量分别比对照组增加 142 8%(P <0 0 5 )、170 8% (P <0 0 5 )和 142 1% (P <0 0 5 )。结论 低强度红激光血管照射能诱导MT的生成 。
- 钟光珍陈凤荣卜定方常林吴胜英蒋宏峰庞永正唐朝枢
- 关键词：激光血管平滑肌金属硫蛋白
- 基因芯片在同型半胱氨酸诱导动脉粥样硬化基因表达谱变化中的应用被引量：9
- 2004年
- 应用基因芯片技术研究同型半胱氨酸诱导动脉粥样硬化的基因表达谱变化。选取 3例无冠心病传统危险因素的住院患者 ,其中 1例为血同型半胱氨酸正常的冠状动脉造影正常者 ,1例为血同型半胱氨酸正常的冠心病患者 ,1例为高同型半胱氨酸血症的冠心病患者。分离外周血淋巴细胞并抽提总RNA ,逆转录制备杂交探针 ,应用含有 115 2条基因的人类表达谱芯片进行差异表达谱分析。结果发现 ,高同型半胱氨酸血症的冠心病患者与血同型半胱氨酸正常的冠状动脉造影正常者比较差异表达的基因 177条 (组一 ) ,高同型半胱氨酸血症的冠心病患者与血同型半胱氨酸正常的冠心病患者比较差异表达的基因有 15 1条 (组三 )。组一与组三基因芯片平行比较 ,二者共同的差异表达基因 4 8条 ,其中上调基因 2 3条 ,下调基因 2 5条。结果提示 ,在差异表达的基因中 ,有些是凋亡、信号转导、免疫、蛋白质合成及原癌基因等的相关基因 ,这些基因可能与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化发生有关。应用基因芯片技术研究同型半胱氨酸诱导动脉粥样硬化差异表达谱 ,可能为动脉粥样硬化发病机制研究提供新的思路。
- 顾菲菲高炜蒋捷卜定方柳景华
- 关键词：基因芯片同型半胱氨酸差异表达基因动脉粥样硬化
- 铁粒幼细胞贫血家系一个新的ALAS2基因突变被引量：4
- 2000年
- 目的 确定一个铁粒幼细胞贫血家系是由于ALAS2基因突变所致。方法 用聚合酶链反应扩增X染色体上与ALAS2距离小于 1.7Mb的微卫星DXS 991和DXS 1199,用变性凝胶电泳进行 3代家族成员 9人 (包括第 2代 2例患者 )的单体型分析 ;克隆患者以及正常人ALAS2基因的cDNA全部编码区 ,并测序比较。结果 该家系 2例先证者都从母亲获得同一ALAS2等位基因。健康兄、妹 2人则获得另一条ALAS2等位基因。克隆患者和正常人ALAS2cDNA编码区后测序发现 ,患者第 5外显子A5 2 3G突变 ,导致苏氨酸变为丙氨酸 ;第 3外显子T372C突变 ,导致亮氨酸由脯氨酸替代 ,后者在ALAS2可剪拼区内 ,意义尚不明确。结论 在X连锁遗传性铁粒幼细胞贫血家系新发现了一种导致发病的ALAS2基因第
- 朱平卜定方
- 关键词：铁粒幼细胞贫血家系基因突变PCR
- 一毛囊角化病家系中ATP2A2基因的突变被引量：6
- 2000年
- 目的 :检测国内一毛囊角化病家系中ATP2A2基因的突变 ,探讨该病的发病机制。方法 :采用电镜、PCR、单链构象多态性 (singlestrandedconformationpolymorphism ,SSCP)分析和DNA测序方法。 结果 :电镜显示表皮基底细胞桥粒减少 ,张力微丝在核周凝聚。PCR SSCP方法提示ATP2A2基因 (编码肌浆网 /内质网钙离子 ATP酶 2 )第 5外显子可能存在异常 ,DNA测序证实了一种未见报道的新突变位点 :第 44 5位碱基由鸟嘌呤突变为腺嘌呤 ,使编码高度保守的 β链区第 149位氨基酸由门冬氨酸突变为门冬酰胺。 结论 :该毛囊角化病家系中存在ATP2A2基因突变 ,突变可能影响钙离子的转运 。
- 杨勇李冠群朱平卜定方朱学骏
- 关键词：毛囊角化病家系DNA测序PCR
- 白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因开放读框的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 2002年
- 根据白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框中编码1MSSVKY6的序列和编码492NEIVR496的序列分别设计上、下游引物,以白念珠菌ATCC11006的基因组DNA为模板进行PCR扩增;将PCR产物克隆并做序列分析后,在大肠杆菌中进行表达。结果表明PCR获得大小约为1.5kb的产物,测序分析表明克隆的产物大小为1491bp,正是白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,表达得到约为80kDa大小的蛋白,与理论计算一致。本研究为开展特比萘芬与其作用靶酶关系的研究奠定了基础。
- 刘伟李若瑜卜定方王端礼马圣清
- 关键词：白念珠菌基因克隆大肠杆菌蛋白分析抗真菌药
- 尾加压素Ⅱ促进大鼠主动脉合成和分泌内皮素1的机制研究被引量：3
- 2007年
- 目的研究尾加压素Ⅱ刺激大鼠主动脉组织产生和分泌内皮素1的作用及其细胞内信号机制。方法将大鼠主动脉组织薄片和不同浓度尾加压素Ⅱ(10-10～10-7mol/L)共孵育3h或6h,采用放射免疫法测定组织和孵育液中内皮素1含量;向孵育液中加入不同阻断剂,观察对尾加压素Ⅱ诱导内皮素1合成效应的影响,初步探讨尾加压素Ⅱ作用的细胞内机制。结果尾加压素Ⅱ明显刺激内皮素1的分泌(孵育液含量)和产生(孵育液和组织内皮素1含量总和),呈现时间和浓度依赖性(10-10～10-7mol/L)。孵育3h后,尾加压素Ⅱ(10-8mol/L)组内皮素1分泌量较对照组高1.46倍(P<0.01),产生总量较对照组高87.9%(P<0.01);孵育6h后,尾加压素Ⅱ刺激组(浓度分别为10-10、10-9、10-8mol/L和10-7mol/L)内皮素1分泌量分别较对照组增加59.2%,108.0%,159.6%和178.0%,产生总量分别较对照组增加40.6%,68.4%,103.1%和105.7%(P<0.01)。尾加压素Ⅱ促进内皮素1产生的作用能分别被Ca2+通道阻断剂尼卡地平、蛋白激酶C阻断剂H7、丝裂素活化蛋白激酶抑制剂PD98059、mRNA抑制剂放线菌素D以及蛋白合成抑制剂环磷酰胺所抑制,其中对内皮素1分泌作用的抑制率分别为34.1%,24.5%,32.2%,32.1%和27.6%(P<0.01),对内皮素1产生总量的抑制率分别为33.5%,31.5%,25.8%,28.0%和36.8%(P<0.01)。结论尾加压素Ⅱ能够促进主动脉组织合成和分泌内皮素1,该作用可通过Ca2+通道、蛋白激酶C以及丝裂素活化蛋白激酶途径来实现,并提示尾加压素Ⅱ的缩血管等效应有可能通过促进内皮素1的产生来实现。
- 张勇刚魏睿宏张辉李玉光卜定方庞永正唐朝枢
- 关键词：内科学内皮素1信号转导放射免疫分析
- 伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病四个家系的NOTCH3基因突变研究被引量：12
- 2004年
- 目的 报告 4个伴皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(CADASIL)家系的NOTCH3基因突变特点。方法 对 4个经临床和病理检查证实的CADASIL家系中的先证者作NOTCH3基因编码区外显子 1～ 12的聚合酶链反应 (PCR)和DNA测序 ,对家系 2和 4中的部分亲属也作了同样的检查。结果 4个家系中的先证者均发现有NOTCH3基因的杂合性错义突变 ,先证者 1为外显子 3的 2 6 8C→T突变 ,先证者 2为外显子 3的 32 2C→T突变 ,先证者 3为外显子 3的 32 8C→T突变 ,先证者 4为外显子 11的 1819C→T突变 ,分别造成Notch3蛋白质R90C、C10 8R、R110C和R6 0 7C 4个位点氨基酸的替换。其中先证者 2的C10 8R突变尚未见文献报道。在家系 2和家系 4中 ,部分成员也携带与先证者同样的突变。结论 这 4个家系的CADASIL病均由NOTCH3基因的突变引起 。
- 王朝霞吕鹤张英卜定方牛小媛张茁黄一宁袁云
- 关键词：皮质下梗死白质脑病显性遗传性脑动脉病家系NOTCH3基因
- 钙化心肌细胞肾上腺髓质素和受体活性修饰蛋白2mRNA含量的变化被引量：4
- 2002年
- 为探讨离体钙化处理的新生大鼠心肌细胞肾上腺髓质素及受体活性修饰蛋白 2mRNA含量的改变及意义。采用β 磷酸甘油制备钙化的心肌细胞 ;放射免疫分析方法测定心肌细胞中肾上腺含量 ;竞争性定量逆转录—多聚酶链反应测定心肌细胞肾上腺髓质素和受体活性修饰蛋白 2mRNA水平。结果显示 ,钙化心肌细胞钙含量较非钙化心肌细胞高 3倍 (P <0 .0 1) ,肾上腺髓质素含量较非钙化心肌细胞高 136 .9% (P <0 .0 1) ,钙化心肌细胞肾上腺髓质素和受体活性修饰蛋白 2mRNA含量分别增加 2 4 % (P <0 .0 5 )和 2 5 % (P <0 .0 5 )。而且钙化心肌细胞受体活性修饰蛋白 2和肾上腺髓质素基因表达上调的程度相平行。钙化心肌细胞肾上腺髓质素生成增加 ,肾上腺髓质素和受体活性修饰蛋白 2mRNA表达亦明显上调 ,提示肾上腺髓质素 受体活性修饰蛋白 2信号途径在心肌细胞钙化发展中可能具有一定的调节作用。
- 齐永芬牛大地王述女亘卜定方石彦荣高霖蒋宏峰庞永正唐朝枢
- 关键词：心肌细胞钙化肾上腺髓质素MRNA
- 11例慢性家族性良性天疱疮患者的基因突变被引量：8
- 2003年
- 目的 :对 11例中国慢性家族性良性天疱疮 (Hailey Haileydisease ,HHD)患者进行基因突变研究。 方法 :根据病史、临床表现和组织病理诊断慢性家族性良性天疱疮 ,收集家系资料 ,提取外周血DNA ,设计引物 ,采用聚合酶链反应、DNA直接测序、克隆测序等方法对 11例非同家族的慢性家族性良性天疱疮患者ATP2C1基因进行突变检测。结果 :11例患者中 ,发现 3例提前终止突变 ,发现 2例剪切位点突变。其中有 4例的突变方式尚未见报道。结论 :提前终止突变和剪切位点突变会影响转录和翻译的结果 。
- 李航孙秀坤卜定方朱学骏
- 关键词：慢性家族性良性天疱疮基因突变克隆测序
