叶长芸
- 作品数：175 被引量：618H指数：13
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学艺术更多>>
- 一组核苷酸序列及在沙门菌和志贺菌检测中的应用
- 本发明公开了一组用于MERT‑LAMP扩增的引物序列，其中包括分别针对沙门菌和志贺菌的引物F3、B3、EFIP、BIP、LF和LB，在每个EFIP引物的5’端各标记有一个彼此不同的荧光基团，并在所述引物的其它位置标记有一...
- 叶长芸王毅王艳
- 文献传递
- 一种类志贺邻单胞菌的快速诊断方法
- 本发明提供了一种检测类志贺邻单胞菌的方法，所述方法利用环介导等温扩增技术，以hugA基因为目标基因，通过设计3对DNA引物，与待检测的DNA模板放入包括MgSO<Sub>4</Sub>和甜菜碱在内的扩增缓冲液中，在65℃...
- 孟双徐建国叶长芸
- 文献传递
- 一种结合AUDG和自避分子识别系统的多交叉恒温扩增方法
- 本发明公开了一种结合南极热敏尿嘧啶脱氧核酸糖基化酶(AUDG)和自避分子识别系统(SAMRS)的多交叉恒温扩增方法，所述方法对多交叉置换扩增中的引物3’端倒数第二位碱基至倒数第五位碱基的4个碱基进行SAMRS修饰，并在扩...
- 叶长芸王毅王艳
- 多交叉置换扩增结合纳米生物传感器检测伊氏李斯特菌的方法建立
- 2024年
- 目的应用多交叉置换扩增技术结合纳米生物传感器(multiple cross displacement amplification coupled with gold nanoparticle-based lateral flow biosensor,MCDA-LFB)建立一种快速、特异和灵敏的伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii,L.ivanovii)检测方法,并对该方法进行评价。方法以L.ivanovii种特异性基因smcl为靶标设计引物,对引物进行最佳反应温度、灵敏度和特异性测试,并用模拟样本和实际样本进行评估。结果L.ivanovii-MCDA-LFB的最佳反应温度为64℃。在L.ivanovii和non-L.ivanovii菌种鉴定中,该方法特异性为100%。此外,L.ivanovii-MCDA-LFB在纯培养物和模拟污染粪便样本的灵敏度分别为10 fg/反应和6.8×10^(2) CFU/g。在195份野鼠粪便样本增菌培养物检测中,L.ivanovii-MCDA-LFB检测结果和传统培养法(ISO 11290-1)结果相同,且只需二次增菌液水煮模板即可检出。结论L.ivanovii-MCDA-LFB方法作为一种快速、灵敏和特异的诊断方法可应用于食品、医疗和科研领域。
- 李慧王毅王艳叶长芸
- 大肠埃希菌O157:H7分离株MLVA分子分型被引量：6
- 2011年
- 目的了解国内大肠埃希菌O157:H7菌株的分子流行特征。方法采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)方法对1999-2002年江苏、河南、安徽、山东、云南等地的大肠埃希菌O157:H7分离株135株进行分子分型,选取7个可变数目串联重复序列(VNTR)位点,应用PCR技术及毛细管电泳方法,检测分离株DNA多态性,使用BioNumerics软件进行聚类分析。结果 135株大肠埃希菌O157:H7可分为3个群(A群、B群、C群)38个MLVA型别,其中A群占20.7%(28/135)、B群占23.7%(32/135)、C群占55.6%(75/135);MLVA型别存在一定地域性,同一暴发来源的菌株具有相同MLVA型别。结论大肠埃希菌O157:H7国内分离株存在丰富的基因多态性;MLVA方法具有较高分子分型能力,可以在溯源和流行病学调查中发挥重要作用。
- 王涛綦廷娜刘凯赵爱兰白雪梅叶长芸熊衍文
- 关键词：大肠埃希菌O157:H7分子分型
- 一种用于细菌诊断的核苷酸序列及应用
- 本发明提供了一种核苷酸序列及所述核苷酸序列在细菌鉴别诊断中的应用，本发明所提供的探针序列及检测方法可以快速、特异、灵敏地检测类志贺邻单胞菌，有效地避免了其它细菌，特别是肠出血性大肠杆菌的非特异性扩增。
- 孟双徐建国叶长芸
- 文献传递
- 一种采用多重内引物进行恒温扩增核酸的方法及应用
- 本发明公开了一种恒温扩增核酸的方法及应用，所述方法对传统LAMP扩增原理进行改进，包括六条核心引物，四条为内引物，命名为FIP1，FIP2，BIP1和BIP2；两条为外引物，命名为F3和B3，另外的四条环引物加入到反应体...
- 叶长芸王毅王艳
- 文献传递
- 限制性内切酶介导的依赖于PCR扩增的实时核酸检测技术
- 本发明公开了一种聚合酶链扩增方法，在所述方法中，在用于扩增的上游引物或下游引物的5’端添加一种限制性内切酶序列，在所述引物的5`端标记荧光基团，在引物的中间位置标记能够特异性地猝灭5`端所述荧光基团的猝灭基团，在所述聚合...
- 叶长芸王毅王艳
- 文献传递
- 乳酸乳球菌食品级分泌性表达载体pSQZ的构建及报告蛋白的表达被引量：5
- 2008年
- 目的构建乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L lactis)食品级分泌表达载体,表达报告蛋白核酸内切酶(NucA)方法PCR扩增乳酸乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)编码基因的启动子、核糖体结合位点、分泌信号和成熟肽前11个氨基酸编码序列,克隆到载体pSH91中,构建食品级分泌性表达载体pSQZ;克隆报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的编码序列nucA到pSQZ中分泌信号后,转化乳酸乳球菌MBP71,构建乳酸乳球菌分泌性表达系统L lactis MBP71/pSQZ-nucA;采用TB-D法和酶谱法检测乳酸乳球菌分泌性表达的NucA活性。结果PCR扩增得到usp45基因片段,酶切、连接到载体pSH91中构建了食品级表达载体pSQZ;将扩增的nucA基因片段克隆入载体pSQZ并转化乳酸乳球菌,得到乳酸乳球菌分泌性表达系统L lactis MBP71/pSQZ-nucA。在TB-D平板上,L lactis MBP71/pSQZ-nucA克隆子周围出现橙色光晕;在酶谱检测中,L lactis MBP71/pSQZ-nucA上清和菌体在18kDa位置均有橙色条带,但上清条带亮度和宽度大于菌体。结论成功构建了乳酸乳球菌食品级分泌表达系统,实现了报告蛋白NucA在乳酸乳球菌中分泌性表达,为进一步保护性抗原的分泌性表达研究奠定了基础。
- 孙强正熊衍文叶长芸徐建国
- 关键词：乳酸乳球菌食品级载体分泌性表达
- 霍乱毒素B亚单位在乳酸乳球菌食品级表达系统中的分泌性表达
- 2009年
- 目的 在乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）食品级分泌性表达系统L．lactis MBP71／pSQZ和L．lactisMBP71／pSQ中克隆表达霍乱毒素B亚单位（CTB），实现CTB的分泌性表达。方法采用PCR扩增霍乱弧菌569B菌株染色体中CTB蛋白编码基因片段，克隆到食品级分泌表达载体pSQZ和pSQ中，转化入宿主菌L．1actisMBP71，构建CTB的分泌性表达系统L．lactisMBP71／pSQz—ctB和LlactisMBP71／pSO—ctB；采用Western．blot检测重组菌株中CTB的表达及表达量。结果PCR扩增得到CTB编码基因片段ctB，酶切、连接到载体pSQZ和pSQ并转化到宿主菌L．lactisMBP71中，构建了分泌性表达系统L．1actisMBP71／pSQZ，ctB和L．lactisMBP71／pSQ．ctB。Western．blot检测发现，L．lactisMBP71／rISQ．ctB和L．1actisMBP71／pSQZ．ctB系统均能分泌性表达CTB，L．lactisMBP71／pSQ—ctB上清的表达量约为2μg/ml；L．lactisMBP71／pSQ—ctB的表达效率远远高于L．lactisMBP71／pSQZ—ctB。结论成功实现了CTB在食品级表达系统中的分泌性表达。
- 孙强正李振军李娟王艺婷金东郑霄张晓嫒熊衍文叶长芸徐建国
- 关键词：乳酸乳球菌霍乱毒素B亚单位食品级载体分泌性表达
